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相似文献
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1.
  目的  超低温保存是植物优良种质长期保存的重要方法。本文为探究梯度预处理对超低温保存存活率的影响，以期有效保存华北落叶松胚性组织的发育潜能。  方法  本研究以华北落叶松胚性组织为材料，对超低温冷冻保存程序中预培养、冷冻处理方式、解冻方式和恢复培养等关键环节开展研究。预培养和冷冻保护共设计成4种处理，以不经过预培养和冷冻保护直接冷冻保存为对照，每个处理重复3次。  结果  结果表明:处理组合1、2、3之间虽无显著差异，但结合冷冻保护剂二甲基亚砜（ DMSO）对细胞具有一定毒害作用，高浓度的DMSO会影响后续胚性组织的恢复甚至造成细胞死亡，因此选出效果较好的超低温保存方法为: 0.2、0.4 mol/L山梨醇液体梯度预处理与0.4 mol/L山梨醇 + 5%DMSO为冷冻保护剂进行冷冻保护，最佳解冻方式为37 ℃水浴，解冻后的胚性愈伤组织细胞活性最高达78%；超低温保存后的胚性组织与正常增殖的胚性组织在外观及显微结构上无明显差异，且低温保存后的愈伤组织仍保持分化形成体细胞胚的能力。  结论  研究结果为华北落叶松乃至其他针叶树胚性组织的超低温保存提供了参考。   相似文献   

2.
王跃华  刘益丽  林抗雪  马良良  代勇  徐世军  王晓蓉 《安徽农业科学》2011,39(23):14023-14024,14026
[目的]建立一套完整、快速和经济的卷叶贝母超低温保存关键技术。[方法]对卷叶贝母愈伤组织超低温保存技术中的预培养时间、保护剂类型和解冻方式进行了研究。[结果]预培养时间、冷冻保护剂类型和解冻方式均是影响卷叶贝母愈伤组织冷冻保存过程中的关键因素。经预培养9 d、由10%二甲基亚砜和0.5 mol/L山梨醇组合的复合冷冻保护剂冷冻、在40℃水浴条件下解冻的卷叶贝母愈伤组织其保存效果最佳,保存后细胞的存活率可达87.39%。[结论]为更好地保护卷叶贝母种质资源提供了参考。  相似文献   

3.
玻璃化法超低温保存龙眼胚性愈伤组织的初步探讨   总被引：12，自引：2，他引：12  
采用玻璃化法对不同基因型的龙眼胚性愈伤组织超低温保存进行了初步探讨.将保存一定时间的胚性愈伤组织于常温下用60%玻璃化溶液(2PVS2)装载30 m in,再于0℃下用PVS2溶液平衡60 m in;换新鲜的PVS2溶液,迅速投入液氮中保存;48 h后化冻.结果表明,具有原胚分化的胚性愈伤组织保存后的存活率明显高于普通胚性愈伤组织;40℃温水浴、25℃左右室温和自来水冲洗等3种不同的化冻方式对龙眼胚性愈伤组织玻璃化超低温保存后的存活率具有同样的效果.  相似文献   

4.
采用玻璃化法对匍匐翦股颖愈伤组织进行超低温保存条件及植株再生进行初步研究.结果表明:将继代2次的愈伤组织接种到预培养基上,4℃低温预培养5 d.预培养后的愈伤组织在常温下用装载液过渡10 min,再于0℃下用玻璃化溶液PVS2处理50 min后,加入新鲜的PVS2迅速投入液氮中保存1 h以上,取出后在30℃水浴中解冻,用MS+1.0 mol.L-1蔗糖溶液洗涤3次,每次10 min,细胞存活率可达85.6%,接种在恢复培养基上培养,胚性愈伤组织能正常进行体细胞胚胎发生、成熟和植株再生.  相似文献   

5.
日本晴水稻悬浮细胞系的建立和保存   总被引：2，自引：0，他引：2  
本研究旨在建立日本晴水稻悬浮细胞系和保存悬浮细胞。在添加2 mg.L-1 2,4-D的NB培养基之后日本晴的成熟胚被诱导愈伤组织形成,2个月的继代后,愈伤组织在2 mg.L-1 2,4-D的NB液体培养基上用于悬浮细胞的培养。3个月的继代后,得到理想的悬浮细胞。关于培养的植物细胞的超低温保存程序大多数报道是两步保存法,采用含有脱落酸激素的预培养溶液培养,同时利用化学冷冻保护剂处理,并在-30℃下放置2 h后投入液氮保存,复苏后细胞的存活率(氯化三苯四氮唑还原法)为80%以上。  相似文献   

6.
为研究长期有效的保存橡胶种质资源新方法,以解决传统橡胶种质资源大田保存方式花费大量的人力、物力和土地,不利于橡胶种质资源在国际间的交换,制约了橡胶树杂交育种工作进展的问题.选用海南广泛栽培的7-33-97橡胶花药脱分化和松散型胚性两种不同形态的愈伤组织经低温驯化、脱水处理、低温保存、解冻处理后,在橡胶愈伤组织增殖培养基上培养,比较不同处理间愈伤组织恢复增殖能力的差别.结果表明:常温培养的松散型胚性愈伤组织,经过-80℃先慢降温再-196℃快降温,液氮保存,在40℃水浴解冻后容易恢复增殖能力.因此,采用先慢后快的降温方式,40℃的解冻方式保存松散的胚性愈伤组织是最优的橡胶愈伤组织保存方法.可以采用这种方法对现有多个橡胶无性系愈伤组织进行保存.  相似文献   

7.
玻璃化法超低温保存荔枝胚性愈伤组织及其植株再生   总被引：7，自引：0，他引：7  
采用玻璃化法对荔枝胚性愈伤组织超低温保存及植株再生进行了初步探讨.将继代保存15 d的荔枝胚性愈伤组织转接到预培养基[MS+50 mL.L-1二甲基亚砜(DMSO)+1 mg.L-12,4-D+20 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂糖]中,在5℃低温下预培养.将预培养后的愈伤组织于常温下用体积分数为60%玻璃化溶液(2PVS2)装载20 min,再于0℃下用PVS2溶液平衡40 min;换新鲜的PVS2溶液,迅速投入液氮中保存.1周后取出,于40℃温水浴中化冻,弃PVS2,用1.2 mol.L-1蔗糖液+MS基本培养基的洗涤液洗涤3次,再接种到新鲜的培养基中恢复培养,恢复培养后的胚性愈伤组织能正常进行体细胞胚胎发生、成熟和植株再生.  相似文献   

8.
以抗松材线虫病黑松(Pinus thunbergii)(以下简称抗性黑松)未成熟合子胚为外植体,诱导出胚性愈伤组织。对影响胚性愈伤组织诱导的因素进行研究发现,在南京地区,6月下旬至7月上旬是采集抗性黑松未成熟球果诱导胚性愈伤组织的最佳时期;抗性黑松未成熟球果在冰箱4℃冷藏7~14 d,能有效地提高胚性愈伤组织的诱导率;麦芽糖更适合抗性黑松胚性愈伤组织诱导;KT质量浓度变化对抗性黑松胚性愈伤组织诱导影响比6-BA显著,诱导抗性黑松胚性愈伤组织最佳激素组合为2,4-D 4 mg·L-1+6-BA 2 mg·L-1或2,4-D 4 mg·L-1+KT 1 mg·L-1。  相似文献   

9.
籼稻粤泰B成熟胚愈伤组织诱导培养条件初探   总被引：2，自引：1，他引：1  
对籼稻HL-CMS保持系粤泰B种子成熟胚的愈伤组织诱导培养条件进行了初步探讨.结果表明.将存储的成熟种子于50℃预处理2d,种子表面清洗消毒后,晾干2～3 h,在1 800 μmol·m-2·s-1光照12 h/黑暗12 h、温度为24～30℃的较大的组织培养室内,采用pH5.9～6.0、添加3.0 mg·L-12,4-D的N6培养基上,粤泰B种子的愈伤诱导率可达93%,且愈伤组织的生长状况很好,为不育基因向籼稻HL-CMS保持系粤泰B的遗传转化奠定了基础.  相似文献   

10.
采用单因素随机区组试验及多因素、多水平正交试验方案建立了百子莲胚性愈伤组织(embryogenic callus,ECs)玻璃化法超低温保存体系。将由花梗诱导的胚性愈伤组织接种至预培养基(MS+0.5mol/L蔗糖+1%琼脂)上,在4℃下预培养2d后,在室温下加入装载液(MS+0.4mol/L蔗糖+2mol/L丙三醇+10mmol/L KNO3)处理60min;利用改良后的PVS 2玻璃化溶液(MS+0.4mol/L蔗糖+30%丙三醇+15%乙二醇+15%DMSO)在0℃下处理40min,将含有ECs的冻存管投入液氮中冻存1h;在40℃水浴中快速解冻90s;用洗涤液(MS+1.2mol/L蔗糖+10mmol/L KNO3)处理30min,每10min换1次新鲜的洗涤液;洗涤后,接种到胚性愈伤组织增殖培养基上恢复培养24h后,相对成活率分别达56.9%(TTC法)和43.3%(Evans blue法)。恢复培养55d的百子莲胚性愈伤组织经过AFLP多态性检测后未发现基因组变异,证明该方法可用于百子莲种质资源的超低温保存。  相似文献   

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