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1.
用T4噬菌体表达的重组新城疫病毒HN蛋白(rHN)为包被抗原,建立新城疫抗体检测的酶联免疫吸附实验(rHN-ELISA).结果表明,抗原最适包被浓度为1.6μg/100μL,待检血清最适稀释度为1:80,鸡血清样品的光吸收值OD450大于0.126可判定为阳性结果,而SPF鸡血清,非免疫鸡血清以及MD,IBD,IB,ILT,AI阳性血清的检测结果均为阴性.对批内和批间样品重复检测的变异系数分别为3.7%～8.5%和3.1%～7.4%.人工感染NDV的SPF鸡第3 d即可用rHN-ELISA检测到抗体,灵敏度明显高于HI和AGP试验.因此,rHN-ELISA是1种特异、敏感、快速的ND抗体检测方法. 相似文献
2.
为了建立一种鸡传染性支气管炎抗体检测的ELISA方法,本研究根据GenBank中的传染性支气管炎病毒(IBV)山东分离株LC2的N基因序列,设计一对引物,扩增N基因,将目的基因与载体pET-32a(+)连接,构建重组表达质粒pET-32a-N,转化E. coli BL21(DE3),诱导表达融合蛋白pET-32a-N,纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白为抗原建立鸡传染性支气管炎抗体检测的间接ELISA方法,并利用所建立的ELISA方法对临床血清样本进行检测。结果表明,IBV N基因可在大肠杆菌中稳定、高效地表达。Western-blot检测表明,表达的重组蛋白能与鸡传染性支气管炎阳性血清发生特异性反应。确定间接ELISA方法的抗原最佳包被浓度为2 μg·孔-1,血清最佳稀释度为1:200,临界值为D450值≥0.297,建立的ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性。该方法与进口IDEXX试剂盒的符合率为96.25%,初步临床应用结果表明该方法可用于雏鸡传染性支气管炎母源抗体和免疫后抗体的消长变化的检测。综上所述,本研究所建立的N-ELISA方法是一种有效的鸡传染性支气管炎病血清学诊断的方法,并为进一步研究IBV N蛋白的免疫原性和抗感染保护作用奠定了基础。 相似文献
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用T4噬菌体表达的重组新城疫病毒HN蛋白（rHN）为包被抗原,建立新城疫抗体检测的酶联免疫吸附实验（rHN-ELISA）.结果表明,抗原最适包被浓度为1.6μg/100μL,待检血清最适稀释度为1：80,鸡血清样品的光吸收值OD450大于0.126可判定为阳性结果,而SPF鸡血清,非免疫鸡血清以及MD,IBD,IB,ILT,AI阳性血清的检测结果均为阴性.对批内和批间样品重复检测的变异系数分别为3.7%～8.5%和3.1%～7.4%.人工感染NDV的SPF鸡第3 d即可用rHN-ELISA检测到抗体,灵敏度明显高于HI和AGP试验.因此,rHN-ELISA是1种特异、敏感、快速的ND抗体检测方法. 相似文献
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《甘肃农业大学学报》2015,(5):31-34
将新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)感染健康鸭胚,采用尿囊液方法提取总RNA,根据GenBank已发表的新城疫病毒HN基因序列设计一对引物,以一株鸭源NDV的总RNA为模板,经RT-PCR扩增出约1.7kb的HN基因片段.将其克隆到原核表达载体pET-30a,获得重组质粒pET-HN后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞.重组菌经IPTG诱导表达后,裂解产物进行SDS-PAGE分析,结果发现在约64ku处可见预期条带.Western-blot结果表明:表达的HN蛋白可与NDV阳性血清发生特异性结合,具有良好的反应原性,本结果为鸭源NDV抗体检测提供了理论依据. 相似文献
5.
建立以传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白为诊断抗原的传染性法氏囊病(IBD)血清学检测方法,研究了VP2蛋白的编码基因,并在原核表达系统中表达了VP2蛋白。用表达的VP2蛋白建立了IBDV间接ELISA检测方法。抗原最佳包被量为每孔174.67 ng,血清最佳稀释度为1:40。对采自安徽部分地区的979鸡血清样品进行检测,IBDV抗体阳性率为39.73%。结果证实,间接ELISA法用于IBD血清抗体的监测具有良好的特异性,是一种快速简便的血清学方法,值得在基层推广应用。 相似文献
6.
利用生物软件对新城疫病毒F48E9株的血凝素神经氨酸酶(HN)蛋白进行抗原特性分析,选定172～570位氨基酸区域作为多肽表位候选区域。以pUC18-F-HN为模板,设计引物通过PCR扩增,获得HN抗原结构域基因片段,SaⅠl、NoⅠt双酶切定向克隆到原核表达载体pET28a,获得重组质粒分别命名为pET28a-HNa。重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞BL21,筛选出阳性克隆,诱导表达并取产物进行分析。结果表明,HN抗原结构域基因片段获得了融合表达,Western-blotting分析证实表达产物HN与NDV阳性血清具有免疫反应性。为进一步研究HN蛋白抗原结构域的免疫原性以及HN蛋白与F蛋白相互作用奠定了基础。 相似文献
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鸡传染性支气管炎病毒核衣壳蛋白基因的克隆、表达及应用 总被引：3，自引：0，他引：3
核衣壳蛋白(N)是鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的重要结构蛋白。根据已报道的IBV基因序列扩增IBVN基因,割胶回收扩增产物并将其克隆到pET-28a( )载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,目的蛋白得到高效表达。分离纯化重组N蛋白并用其作为抗原建立ELISA检测抗体方法,研究了IBVM41攻毒后雏鸡血清特异性抗体消涨规律。 相似文献
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鹅源新城疫病毒HN基因在Bac to Bac系统中的表达及抗原性检测 总被引：1，自引：0，他引：1
血凝素-神经氨酸酶蛋白(Haemagglutinin Neuramindase,HN)是鹅源新城疫病毒诱导体液免疫的重要靶抗原。经pMD18-T-HN阳性质粒扩增了HN基因,扩增的片段亚克隆到转座载体pFastHTb中构建重组转座载体pFastHTb-HN。将其转化到DH10Bac感受态细胞中,得到重组杆粒rBacmid-HN,重组杆粒rBacmid-HN转染sf9昆虫细胞,收获的重组病毒盲传两代。PCR鉴定重组病毒,获得的重组杆状病毒命名为rBv-HN。经间接免疫荧光(IFA)和SDS-PAGE鉴定,获得的重组杆状病毒rBv-HN在sf9昆虫细胞中获得表达,且表达的蛋白大小为75ku左右,与理论值相当。Western blot和Dot-ELISA检测结果表明,表达的蛋白可与鸡抗NDV血清发生特异性抗原反应,证实所表达的蛋白具有良好的反应原性。 相似文献
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试验旨在制备原核表达鹅源新城疫病毒(NDV)JS/5/05/Go株M蛋白的多克隆抗体并进行鉴定。以鹅源NDV总RNA为模板,RT-PCR扩增M基因,亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)获得重组质粒pET32a-M,转化E.coli BL21(DE3)菌株进行诱导表达,SDS-PAGE电泳检测表达产物;用KCl染色切胶纯化法纯化重组蛋白;采用切胶免疫小鼠的方法制备M蛋白多克隆抗体,抗体效价用间接ELISA检测,特异性用Western blot和间接免疫荧光法鉴定。结果表明,在大肠杆菌中成功表达了分子量约为55 000的重组蛋白,用切胶纯化法获得了纯度较高的重组蛋白;ELISA法检测抗体效价可达1∶102 400,Western blot和间接免疫荧光试验结果表明制备的多克隆抗体能够特异性识别纯化的M蛋白及NDV自身表达的M蛋白。 相似文献
10.
利用杆状病毒表达系统对ⅦNDV HN基因进行表达研究。RT-PCR扩增HN基因,将其克隆到p Fast Bac HT A载体中,阳性重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,PCR鉴定获得阳性克隆,碱裂解法提取阳性质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得含HN基因的重组杆状病毒质粒,重组病毒感染Sf9细胞72 h后,进行SDS-PAGE电泳、间接免疫荧光和Western-blot试验。免疫SPF鸡,间接ELISA测定抗体滴度,攻毒保护试验检测重组HN蛋白保护性。结果显示,目的蛋白HN在昆虫细胞中有特异性表达,该蛋白诱导了高滴度的NDV特异性抗体,具有良好的免疫原性;强毒攻击保护率达到75%,与La sota疫苗组保护率接近,均明显高于阴性对照组。上述结果为NDV新型亚单位疫苗奠定了基础。 相似文献
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对某鸡场因不明原因已死亡及濒死产蛋鸡进行病理剖检变化及实验室诊断，确诊为鸡非典型性新城疫．抗体检测的结果显示，随机抽样检测32份鸡血清的新城疫血凝抑制效价在1：40～1：2560之间，表明该鸡场的鸡群存在野毒感染． 相似文献
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用新城疫(ND)分离强毒油佐剂灭活苗和NDV La Sota油佐剂灭活苗分别免疫带有新城疫母源抗体的雏鸡,免疫后每7d采集血清,用微量血凝抑制试验方法检测HI抗体.并于免疫后第21、28、35 d用鸡新城疫分离毒和NDV F_(48)E_9分别进行攻毒试验,结果显示,免疫鸡的HI抗体水平没有大的差异,分离毒株灭活苗对鸡新城疫强毒感染的免疫保护效力优于La Sota灭活苗. 相似文献
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复方三氮唑核苷注射液对鸡新城疫病毒的抑制试验 总被引：2，自引：0，他引：2
将复方三氮唑核苷（毒菌杀平）注射液、三氮唑核苷液和盐酸吗啉双胍液分别稀释成2，10，20，100μl/L的溶液，分别与等量鸡新城疫病毒（NDV）液混合，其中含抗病毒药含量分别为0.025,0.125，0.250,1.250μg/mL。将混合液37℃感作2h，尿囊腔接种9-11日龄鸡胚，每组接种11个鸡胚，每胚0.1mL，37℃培养，每6-8h照蛋1次，死亡鸡胚及时取出冷冻，活胚孵化至96h全部取出，冷冻后测定血凝效价，计算病毒滴度和病毒灭活率。试验结果表明：含量为0.025,0.125,0.250,1.250μg/mL的毒菌杀平注射液、三氮唑核苷液、盐酸吗啉双胍液对NDV均有不同程度的抑制作用，复方制剂没有降低原抗病毒药的药效，三氮唑核苷对该NDV的抑制效果好于盐酸吗啉双胍。 相似文献
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用胶体金免疫电镜技术检测新城疫病毒 总被引：5，自引：0，他引：5
应用柠檬酸三钠还原法制备了20 nm的胶体金颗粒标记NDV抗体,并且用直接电镜、免疫电镜和胶体金免疫电镜技术比较观察了新城疫病毒.证明胶体金免疫电镜技术作为检测NDV的检测方法具有简单、快速、准确和无污染等优点. 相似文献
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鸽新城疫病毒分离鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
从病死美国鸽脾脏分离到１株病毒,经血凝抑制试验（ＨＩ）和电镜观察,确诊为新城疫病毒（ＮＤＶ）。采用ＳＰＦ鸡胚和ＳＰＦ鸡测定其致病指数分别为：ＭＤＴ＝６１．４,ＩＶＰＩ＝２．５３,ＩＣＰＩ＝１．６８,属于强毒株,该毒株经滴鼻／点眼途径可在９６ｈ致死６周龄非免疫鸡并出现典型的新城疫病变和症状,鸽子攻毒试验同样出现了新城疫症状和病变,超过鸽子产生高滴度的ＨＩ抗体。 相似文献
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抗病毒合剂对新城疫病毒抑制作用的体内试验 总被引：4，自引：0，他引：4
抗病毒合剂由具有抗病毒、清热、滋阴凉血等作用的中药组方经水煎、浓缩而成。通过鸡胚法和人工感染雏鸡测定其对新城疫病毒的抑制作用。结果表明 ,抗病毒合剂在鸡胚内对新城疫病毒 F4 8E9毒株具有显著的抑制作用 ;对人工感染新城疫病毒的雏鸡具有显著的预防和治疗作用 ,并可延长雏鸡的存活时间 相似文献
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鸡新城疫、产蛋下降综合症病毒血凝抑制试验抗原的研制 总被引：2，自引：0，他引：2
新城疫病毒（ＮＤＶ）鸡胚尿囊液和产蛋下降综合症病毒（ＥＤＳＶ）鸭胚尿囊液在不同保护剂和保存条件下血凝（ＨＡ）试验结果表明，以１０％甘油做保护剂制备的抗原，在－１８℃、４～８℃和常温条件下可保存一年，其ＨＡ效价稳定。抗原制备方法简单，成本低廉，适合基层生产单位使用。 相似文献
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新城疫病毒(NDV)F基因的克隆及其真核表达重组质粒的构建 总被引：4，自引：1，他引：4
应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和一对自行设计的引物,从新城疫病毒(NDV)F48E9株扩增出长度为1664bp的DNA片段。与已报道的NDV-融合蛋白(F)基因比较,两者大小一致。经限制性内切酶反应,获得两个预期大小的片段。将克隆的F基因定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经酶切和测序鉴定,证明构建的重组质粒含有NDV-F基因。 相似文献
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采用新城疫病毒强毒快速检测法聚乙二醇介导的单抗夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）对湖南省新城疫病毒（NDV）强毒感染进行了监测，共检测来自30个新城疫发病群和28个无明显新城疫病症群共58个禽群的泄殖腔棉试样品1719份，并对97份样口进行了病毒分离鉴定。结果表明，NDV强毒感染的禽种多，易与其他疫病混合感染，免疫鸡群在发生形式上呈非典型化趋势，养禽场普遍存在NDV强毒且临诊健康群有一定比例的强毒感染率，这些是目前ND难以控制和净化的主要原因。结果还表明，所采用的ELISA是监测NDV强毒感染并指导免疫的可靠的快速检测方法。 相似文献