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1.
应用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法提取百山祖冷杉Abies beshanzuensis叶片DNA,建立百山祖冷杉简单重复序列（SSR）反应体系。在体系建立过程中,采用单因素法分别对影响聚合酶链反应（PCR）的因素进行分析。结果表明：在20.00 μL反应体系中,模板DNA用量、镁离子（Mg2+）浓度、三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸（dNTPs）浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶用量分别是60 ng,3.75 mmol·L－1,0.15 mmol·L－1,0.40 μmol·L－1,16.67 nkat（1.0 U）时结果最好。随机挑取其中1对引物扩增的多态性片段进行克隆测序,序列经比对后得到的一致性值达到94%,表明其他杉科植物的SSR引物可以在百山祖冷杉中应用。通过引物筛选,得到15对引物可在百山祖冷杉中扩增得到多态性条带,其中4对引物扩增得到的部分片段在百山祖冷杉和日本冷杉Abies firma间有明显区别。这些结果表明,利用SSR分子标记技术能够用于百山祖冷杉人工辅助授粉子代的初步鉴定。图7表2参16 相似文献
2.
麻疯树遗传多样性的相关序列扩增多态性（SRAP）分析 总被引：4，自引：1，他引：3
采用相关序列扩增多态性（SRAP）分子标记对中国6省（区）及印度尼西亚共8个麻疯树Jatropha curcas种源样本进行研究,旨在阐明麻疯树种源间的遗传关系和遗传多样性。结果表明：麻疯树相关序列扩增多态性?鄄聚合酶链式反应（SRAP-PCR）最佳反应体系为：10 × PCR buffer 2 μL,DNA模板20 ng,Taq酶16.67 nkat,Mg2+ 2.50 mmol·L－1,三磷酸脱氧核苷酸（dNTP）120.00 μmol·L－1,引物0.15 μmol·L－1,总体积为20 μL;并从274对引物中选出具有多态性的45对引物,共检测出500条清晰的条带,其中多态性条带141条,占总条带数的28.20 %。非加权成对算术平均法（UPGMA）聚类分析及主成分分析表明,各个种源间的亲缘关系均很近,其相似系数为0.791 ~ 0.940,8个种源被聚为3类,其中印度尼西亚种源单独聚为1类,来自不同地域的7个中国种源被混聚为另外2类。图6表3参16 相似文献
3.
以山核桃Carya cathayensis基因组DNA为模板,对聚合酶链式反应（PCR）体系各组分进行了梯度实验,优化出条带清晰、重复性好的相关序列扩增多态性聚合酶链式反应（SRAP-PCR）扩增体系,并筛选了引物。该体系（25.00 μL）为：1 × 缓冲液0.20 mmol·L－1,脱氧核糖核苷酸（dNTPs）,0.20 μmol·L－1 引物,2.00 mmol·L－1镁离子（Mg2+）,33.34 nkat Taq DNA 聚合酶,0.80 mg·L－1基因组DNA（以上均为终浓度）。反应条件为94 ℃预变性5 min;94 ℃变性30 s,35 ℃退火30 s,72 ℃延伸2 min,5个循环;94 ℃变性30 s,50 ℃退火30 s,72 ℃延伸2 min,30个循环;72 ℃延伸8 min,4 ℃保存,反应时间比其他体系缩短了一半。从100对引物中筛选出了适用于山核桃的引物15对。在山核桃中,随机扩增多态性DNA（RAPD）,简单序列重复区间（ISSR）,SRAP等3种标记,以SRAP标记每对引物扩增的位点数及每对引物扩增的多态性位点数为多,但SRAP多态性引物的比例、多态性位点比例居于另2种标记之间。在山核桃研究中可以考虑使用SRAP及RAPD标记。图6表4参28 相似文献
4.
以厚朴 Magnolia officinalis为材料,通过对扩增片段长度多态性（AFLP）反应体系中的酶切模板用量、扩增条件等几个方面进行优化,建立了较为理想的厚朴AFLP反应体系。结果表明：①采用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）硅珠法提取的DNA质量较好,适用于AFLP分析。②酶切的基因组DNA以400 ng为宜;预扩增产物的稀释倍数以30倍为宜;20.00 μL选扩反应体系中Mg2+最佳浓度为2.00 mmol·L－1,三磷酸脱氧核苷酸（dNTPs）最佳浓度为0.225 mmol·L－1,Taq DNA 聚合酶最佳用量为16.67 nkat时,扩增带清晰且稳定,扩增效果较好。旨在为研究厚朴天然种群的遗传多样性及遗传结构分析、新品种选育及鉴定和遗传图谱构建等奠定理论基础。图7表1参12 相似文献
5.
香榧ISSR-PCR扩增条件的优化和引物筛选 总被引：1，自引：1，他引：0
以香榧Torreya grandis ‘Merrillii’基因组DNA为材料,对影响简单序列重复区间扩增?鄄聚合酶链式反应（ISSR-PCR）的Taq酶用量、Mg2+浓度、模板DNA用量、磷酸碱基脱氧核苷酸（dNTPs）浓度和引物浓度等进行了优化试验。优化后的香榧ISSR-PCR扩增体系为：总容积20 μL,包括30 ng模板DNA,16.67 nkat Taq酶,0.350 μmol·L -1引物,1.625 mmol·L-1 Mg2+,0.250 mmol·L-1 dNTPs,10 × PCR buffer 2 μL。PCR扩增程序：94 ℃变性5.0 min;35个循环：94 ℃变性30 s,退火45 s,退火温度视引物而定,72 ℃延伸1.5 min;最后72 ℃延伸7.0 min,4 ℃保温。在此基础上,从77个ISSR引物中筛选出34个适合香榧ISSR分析的引物,且通过梯度PCR确定了各自最适的退火温度。研究结果为香榧遗传图谱构建打下了基础。图4表1参12 相似文献
6.
以杂交新美柳Salix matsudana × alba幼苗为研究材料,采用LI?鄄6400便携式光合测定系统对其光合特性进行研究。结果表明：①自然生长季节,杂交新美柳叶片的净光合速率（Pn）日变化呈单峰曲线,最高峰出现在中午11 : 00,其最大净光合速率（Pmax）为20.8 μmol·m－2·s－1。②在控制二氧化碳摩尔分数和温度的条件下,光饱和点（PLS）为1 847.6 μmol·m－2·s－1,光补偿点（PLC）为58.1 μmol·m－2·s－1。杂交新美柳的光饱和点和光补偿点都较高,表明它是一种阳性植物。③在控制光照强度和温度的条件下,利用Farquhar模型对杂交新美柳叶片净光合速率-胞间二氧化碳摩尔分数的响应进行拟合,当胞间二氧化碳摩尔分数小于400 μmol·mol-1时,可算得其最大羧化速率（Vcmax）为91.6 μmol·m－2·s－1,二氧化碳补偿点（Г *）为46.5 μmol·mol－1,呼吸速率（Rd）为4.9 μmol·m－2·s－1;升高二氧化碳摩尔分数可使杂交新美柳的净光合速率增大,提高叶片对光能的利用率,其叶片二氧化碳饱和点（PCS）大约在1 000 μmol·mol－1,同时可算得其最大电子传递速率（Jmax）为256.0 μmol·m－2·s－1;当二氧化碳过饱和（＞1 000 μmol·mol－1）时,可算得其磷酸丙糖利用速率（UTP）为19.7 μmol·m－2·s－1。图3表2参18 相似文献
7.
以文心兰Oncidium flexuosum无菌苗叶片为外植体,1/2 MS（Murashige and Skoog）为基本培养基,对不同叶位、叶片大小（叶龄）、不同植物生长调节物质处理诱导体胚的效果进行了研究。结果表明：①幼苗的叶尖、叶基部切口、叶面切口、叶面和叶缘均能诱导出体胚,绝大部分体胚能形成二次体胚并能分化成多个类原球茎（PLBs）。②诱导体胚的最佳外植体材料是取自带根幼苗15 mm长叶片。③诱导体胚的适宜培养基组成如下：1/2 MS培养基（其中微量元素和有机添加物为全量,铁盐减半）,磷酸二氢钠170.00 mg·L－1,谷胺酰胺1 000.00 mg·L－1,蛋白胨1 000.00 mg·L－1,噻苯隆（TDZ）0.50 mg·L－1,聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP）250.00 mg·L－1,蔗糖20 000.00 mg·L－1,固化剂（gelrite） 2 800.00 mg·L－1,pH 5.2。叶片体胚诱导率为90.00%以上,叶片基部切口和中切口体胚诱导率分别达74.56%和66.91%。图4参17 相似文献
8.
椽竹各器官生物量模型 总被引：1，自引：0，他引：1
对耐寒丛生竹种椽竹Bambusa textilis var. tasca 种群的生物量结构进行了研究,并对其各器官生物量与胸径和平均壁厚的相关模型进行了拟合。结果表明：椽竹各器官生物量的分配中,竹秆所占比例最大,为总生物量的74.62%,远超过毛竹Phyllostachys pubescens等竹种的相应值。椽竹的胸径和平均壁厚与各器官生物量之间均呈极显著相关性,其中竹枝生物量干质量（Bt）,竹叶生物量干质量（Bf）,竹秆生物量干质量（Bs）,地上部分生物量干质量（Ba）,全竹生物量干质量（Wbt）与胸径（D）和平均壁厚（A）间相关关系的拟合模型分别Bt ＝ － 2 672.765 + 1 299.919D + 59.298D2 － 36.222D3,Bf ＝ － 2 756.615 + 1 290.910D + 95.822D2 － 34.991D3,Bs ＝ － 4 016.535 + 2 161.650D + 21.755D2 － 45.453D3,Ba ＝ － 7 445.916 + 3 952.480D + 45.439D2 － 96.666D3,Wbt ＝ － 7 360.122 + 3 933.155D + 41.158D2 － 93.171D3,Bt ＝ － 1 914.129 + 739.465A + 30.261A2 － 61.285A3,Bf ＝ － 3 342.800 + 1 228.745A － 1.165A2 － 104.356A3,Bs ＝ － 6 103.838 + 1 790.994A + 44.430A2 － 13.674A3,Ba ＝ － 9 770.036 + 2 464.708A + 19.688A2 － 23.782A3,Wbt ＝ － 9 914.842 + 2 912.175A + 25.624A2 － 23.513A3。根据以上公式估算出椽竹林单株平均秆生物量为1.52 kg·株－1,单株平均全竹生物量2.31 kg·株－1,单位面积秆生物量3.28 kg·m－2;单位面积全竹生物量4.96 kg·m－2。表8参29 相似文献
9.
光照强度对苦槠幼苗生长与光合作用的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
为了研究弱光环境对林下亚热带常绿阔叶树种苦槠Castanopsis sclerophylla幼苗光合生理和生长的影响,进行了不同生长光强（100%,40%和15%自然光强）处理,并在5月和9月对苦槠幼苗光合以及荧光参数进行测定。结果表明：无论5月和9月,随着生长光强的降低,苦槠幼苗叶片的最大净光合速率、光补偿点和光饱和点均有减小的趋势,尤其在9月,在15%自然光强下分别为13.08 μmol·m－2·s－1,9.62 μmol·m－2·s－1,198.80 μmol·m－2·s－1,显著低于对照（P＜0.05）,分别是对照（19.47 μmol·m－2·s－1,22.53 μmol·m－2·s－1,350.33 μmol·m－2·s－1）的48.9%,76.2%和74.6%;遮光处理下叶片的相对叶绿素含量、叶绿素荧光参数光系统Ⅱ（PSⅡ）最大光化学效率（Fv /Fm）和潜在活性（Fv /Fo）值均高于对照的,存在显著差异（P＜0.05）,且随遮光程度的增加其值均依次增加。这说明,苦槠是一种耐荫树种,遮光可降低其最大净光合速率、光补偿点和光饱和点,以及增加叶绿素相对含量、PSⅡ最大光化学效率和潜在活性,以增强在弱光条件下的生长发育能力。这些现象表明,强光环境对苦槠幼苗的光合作用具有一定的负效应,但对林下的幼苗光合作用与生长却是有利的。图4表2参23 相似文献
10.
为了解集约经营雷竹Phyllostachys praecox林土壤磷素状况及流失风险,从浙江省临安市太湖源镇10块典型的雷竹林地采集土壤样品。通过等温吸附实验及利用Langmuir等温方程,对雷竹林土壤磷的流失阈值及流失潜能进行了探讨。结果表明：10块雷竹林地的土壤有效磷质量分数平均为169.25 mg·kg－1。 用Langmuir等温方程来拟合,相关性达到极显著水平（R2 = 0.987 ~ 0.999）。所有调查样地土壤的磷零点吸附平衡质量浓度（CEPC0）值远远超过了0.02 mg·L－1;磷吸附饱和度（DPS）平均值为46.18%,最高的达82.94%,有7块样地的DPS值明显高出临界值（25.00%）。土壤有效磷与CaCl2-P呈极显著线性相关,雷竹林土壤发生磷素流失的有效磷“阈值”为52.52 mg·kg－1,10块样地中有9块样地的有效磷质量分数超过了阈值,最高的达到该“阈值”的5.5倍。通过Langmuir方程,求得雷竹林土壤的标准需磷量为8.14 ~ 64.66 kg·hm－2,平均为27.41 kg·hm－2。图2表2参29 相似文献
11.
为获得稳定的聚合酶链式反应（PCR）产物,采用正交设计L25（56）对光皮桦Betula luminifera表达序列标签一简单重复序列聚合酶链式反应（EST-SSR PCR）反应体系中的5个因素：DNA模板浓度,引物浓度,镁离子（Mg2＋）浓度．三磷酸碱基脱氧核苷酸（dNTPs）浓度和DNA聚合酶量进行优化,每个因素设计5个水平。优化试验结果表明：光皮桦EST-SSR最佳PCR反应体系：4．0mg·L-1DNA模板,0．500μmol·L-1引物,1．250mmol·L-1Mg2＋,0．250mm01·L-1dNTPs．0．0725×16．67mkat·L-1 rTaq酶。通过梯度PCR试验筛选得到相应引物的最佳退火温度。对优化出的EST—SSRPCR反应体系进行稳定性检测．结果均能获得稳定、清晰可辨的DNA谱带。图6表3参15 相似文献
12.
实验材料为色素万寿菊雄性不育两用系'9901AB',通过对SSR-PCR反应体系中的主要因素dNTPs、引物及模板DNA进行最优条件筛选,建立了适合于万寿菊雄性不育两用系的SSRPCR反应体系:2.5μL 10×buffer、40 ng模板DNA、2μL 10μmol·μL1引物、1.0 U Taq酶、1.2μL2.5... 相似文献
13.
为获得稳定的聚合酶链式反应（PCR）产物,采用正交设计L25（56）对光皮桦Betula luminifera表达序列标签-简单重复序列聚合酶链式反应（EST-SSR PCR）反应体系中的5个因素:DNA模板浓度,引物浓度,镁离子（Mg2+）浓度,三磷酸碱基脱氧核苷酸（dNTPs）浓度和DNA聚合酶量进行优化,每个因素设计5个水平。优化试验结果表明:光皮桦EST-SSR最佳PCR反应体系:4.0 mgL－1DNA模板,0.500 molL－1引物,1.250 mmolL－1 Mg2+,0.250 mmolL－1 dNTPs,0.072 5 16.67 mkatL－1 rTaq酶。通过梯度PCR试验筛选得到相应引物的最佳退火温度。对优化出的EST-SSR PCR反应体系进行稳定性检测,结果均能获得稳定、清晰可辨的DNA谱带。图6表3参15 相似文献
14.
以三球悬铃木组培苗为试验材料,对影响SSR-PCR扩增效果的退火温度、dNTP、引物浓度、Taq酶量及悬铃木DNA等因素的筛选,建立适宜的悬铃木SSR-PCR分子标记反应体系。结果表明,在20μL-1体积中,50℃退火温度、4 ng.μL-1模板DNA、0.2 mmol.L-1 dNTP、0.05 U.μL-1 Taq酶量和0.6μmol.L-1引物浓度是悬铃木的最适SSR反应体系。此外,利用该体系筛选出了54对适合悬铃木SSR扩增的引物。 相似文献
15.
利用L16（45）正交实验设计,针对模板DNA,镁离子（Mg2+）,dNTPs,TaqDNA酶和引物5个因素进行正交优化,建立适用于桂花Osmanthus fragrans表达序列标签-简单重复序列（EST-SSR）的最优扩增反应体系,将其用于桂花转录组EST-SSR多态性引物的筛选,最后利用筛选得到的多态性引物和聚类分析对14份四川省常见的栽培丹桂（SC01~SC14）样本进行品种鉴定。结果表明:桂花EST-SSR最优反应体系包含40 ng模板DNA,2.25 mmol·L-1 Mg2+,0.3 μmol·L-1引物,0.3 mmol·L-1 dNTPs,1.25×16.67 nkat TaqDNA聚合酶,10×PCR Buffer缓冲液2 μL,双蒸水补至20 μL;从150对EST-SSR引物中筛选得到了19对稳定性好、多态性高的SSR引物,多态性从高到低依次为五核苷酸（25.00%）,六核苷酸（19.44%）和三核苷酸（16.67%）重复类型。利用筛选得到的3对高度多态性SSR引物（OF8623-1677,OF24299-844和OF28774-2088）对四川省成都市周边常见栽培的14份丹桂（Aurantiacus group）样本进行了有效鉴定。结果表明:14份样本中,有12份可判定为‘朱砂丹桂’‘Zhusha Dangui’,SC06为‘堰红桂’‘Yanhong Gui’,SC08与‘满条红’‘Mantiao Hong’和‘状元红’‘Zhuangyuan Hong’亲缘关系较近。本研究也为今后利用EST-SSR标记对桂花指纹图谱构建、遗传多样性分析、分子育种及品种鉴定与保护等工作奠定基础。 相似文献
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正交设计优化莲雾ISSR-PCR反应体系 总被引：1，自引：0，他引：1
以莲雾品种‘农科一号’为试材,采用经改良的CTAB法提取莲雾叶片的DNA,探讨了Mg2+、dNTPs、引物浓度、Taq聚合酶、模板DNA含量对莲雾ISSR-PCR的影响。建立了总体积为25μL的莲雾ISSR-PCR反应体系:Mg2+浓度为3.0mmol.L-1﹑dNTP浓度为0.2mmol.L-1﹑primer浓度为0.4μmol.L-1﹑Taq DNA聚合酶1.5U﹑模板DNA含量为30ng,并含2.0μL 10×PCR Buffer(Mg2+free)。应用该反应体系对‘农科一号’和‘农科二号’进行ISSR-PCR扩增,共筛选出12条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物。 相似文献
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胡萝卜ISSR反应体系优化的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
以改良CTAB法提取胡萝卜基因组DNA作为ISSR-PCR模板,通过单因素试验建立了一套适合胡萝卜ISSR-PCR的优化的反应体系,即25μL反应液中含10×buffer2.5μL,2.0mmol.L-1Mg2＋,200μmol·L-1dNTPs,Taq酶1.5U,引物0.5μmol·L-1,DNA模板20ng。PCR扩增程序为：94℃预变性4min,94℃变性40s,48～58℃退火45s,72℃延伸2min,进行35个循环,72℃延伸8min,在16℃保存。应用该优化反应体系筛选出了24条有效引物。 相似文献
18.
银杏ISSR-PCR扩增反应体系的优化 总被引：2，自引：0，他引：2
为了对影响银杏戗ngkobiloba简单序列重复区间扩增-聚合酶链式反应（ISSR-PCR）扩增反应体系的因素进行优化,采用[SSR-PCR扩增技术和UVP凝胶电泳成像技术对模扳DNA浓度、Taq酶用量、引物用量、dNTP的用量以及退火温度等因素进行筛选和优化筛选优化后的反应条件：Taq酶0．3μg,2μL10×Buffer（含15mmol·L^-1 MgCl2）,模板DNA40ng,dNTP0．2mmol·L^-1,引物0．5μmol·L^-1,Mg^2＋,5nmol·L^-1。PCR扩增程序：94℃变性5min,然后进行38个循环：94℃变性30S,48～53℃（根据引物而定）退火30s,72℃延伸1min;最后72℃延伸10min,4℃终止反应。上述反应条件可广泛应用于银杏的遗传多样性分析、遗传育种和转基因等方面的研究。图6表1参19 相似文献
19.
采用改良CTAB法提取葡萄属22种植物的基因组DNA,对其完整性进行了测定,通过单因素五水平试验,筛选模板、Mg2+、Taq酶、dNTPs和随机引物的浓度及其用量,建立了葡萄RAPD技术最优体系,即25 μL体积中模板DNA为40 ng·μL-1,MgCl２ 2.0 mmol·L-1,dNTP 0.8 mmol·L-1,Taq DNA 聚合酶1 U·μL-1,引物 0.8 μmol·L-1,建立了葡萄基因组DNA的RAPD 反应扩增程序,即94℃预变性4 min, 94℃循环变性 45 s,37℃退火 55 s,72℃ 延伸 80 s,40个循环,最后72℃ 延伸10 min。 相似文献