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以提纯的ＣＭＶ作为抗原，经静脉注射，肌肉注射和足垫注射等对家兔进行免疫，获得高效价的抗血清（琼脂双扩散效价为１／２５６），在间接ＥＬＩＳＡ试验过程中，用ＰＢＳ＋０．０５％，ＴｒｉｔｏｎＸ－１００作为样本研磨液，用１：１６０００稀释度的ＣＭＶ抗血清或２μｇ／ｍｌＣＭＶ抗血清的ＩｇＧ作为第一抗体，用１：１０００稀释度的冻干辣根过氧化物酶标记的羊抗兔的ＩｇＧ作为第二抗体，以待测样本光密度值与阴性对照光密 相似文献
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以提纯的ＣＭＶ作为抗原，经静脉注射、肌肉注射和足垫注射等对家兔进行免疫，获得高效价的抗血清（琼脂双扩散效价为１／２５６）；在间接ＥＬＩＳＡ试验过程中，用ＰＢＳ＋０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００作为样本研磨液，用１：１６０００稀释度的ＣＭＶ抗血清或Ｚμｇ／ｍｌＣＭＶ抗血清的ＩｇＧ作为第一抗体，用１：１０００稀释度的冻干辣根过氧化物酶标记的羊抗兔的ＩｇＧ作为第二抗体，以待测样本光密度值与阴性对照光密度值之比大于或等于３作为判断待测样本为阳性反应的标准，结果表明：间接ＥＬＩＳＡ试验的灵敏度比生物检测的灵敏度要高３２～１６０倍。用间接ＥＬＩＳＡ检测矮牵牛的病毒样本３０份，ＣＭＶ占７０％。 相似文献
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葡萄扇叶病毒的ELISA检测技术 总被引：7，自引：0，他引：7
本文是关于葡萄扇叶病毒ＥＬＩＳＡ检测技术的报告。采用Ｌ．ｐｉｎｋ的方法提纯病毒，制备了兔抗血清和小鼠腹水抗体，效价分别达１：５１２００和１：５×１０￣６，特异性较强。经间接双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测ＧＦＶ提纯病毒最低浓度为３ｎｇ／ｍｌ。对葡萄的根、幼叶和嫩茎抽提液检测结果一致，稀释倍数１：２０。 相似文献
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用浓度为１０＾８ｃｆｕ／ｍｌ，Ｘ．ｃ．ｐｖ．ｃｉｔｒｉ全胞活菌免疫家兔，得以效价为１／２５６０～１／１０２４０的抗血清，应用斑点酶联法（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测Ｘ．ｃ．ｐｖ．ｃｉｔｒｉ表明，抗血清经交叉吸收后特异性高，适宜稀释倍数为１：１０＾４～１０＾６，检测灵敏度度要达１０＾４ｃｕｆ／ｍｌ。加有０．５％Ｔｗｅｅｎ２０或０．５％Ｔｗｅｅｎ８０或０．１％ｔｒｉｔｏｎＸ－１００的ＴＢＳ液为适宜封闭液， 相似文献
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蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制 总被引：2，自引：0，他引：2
用蚕豆萎蔫病毒提纯病毒粒子免疫ＢＡＬ Ｂ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有稀释法克隆,成功获得了２株ＢＢＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１：６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ ４４．７ｋＤ的外壳蛋白 相似文献
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鸡传染性法氏囊病毒的分离、纯化与抗血清的制备 总被引：2，自引：0，他引：2
采用鸡胚尿囊液培养传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）。将培养病毒的鸡胚尿囊液经高速离心，聚乙二醇（ＰＥＧ）沉淀、蔗糖垫底超速离心、ＮａＢｒ密度梯度离心，可获得纯化的鸡传染性法氏囊病毒带。通过透射电子显微镜观察，表明ＩＢＤＶ颗粒呈六角形，直径约６０ｎｍ，无囊膜，其浮力密度为１．３０～１．３６ｇ／ｍｌ。实验所分离的病毒粒子的平均含量为１．７２ｍｇ／ｍｌ。用这种病毒免疫健康家兔制备抗ＩＢＤＶ的血清，获得了效价在１∶３２以上的抗血清，抗血清有较高的纯度和专一性 相似文献
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通过对甜菜坏死黄脉病毒提纯液进行紫外扫描，获得了典型的核蛋白曲线，ＯＤ２８０／ＯＤ２６０＝０．９０１，推算病毒液浓度约为０．５８ｍｇ／ｍｌ。采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定证实ＢＮＹＶＶ只有１种蛋白亚基，分子量为２０７４９道尔顿。 相似文献
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用烟草赤星病菌的悬浮液免疫家兔，得到效价为１：６４０的抗血清，按硫酸铵沉淀法和ＤＥＡＥ纤维素离子交换柱层析法提取抗体球蛋白ＩｇＧ，用ＥＬＩＳＡ间接法进行试验，结果表明：辣根过氧化物酶标记羊抗兔结合物的最适稀释度为１：１００，最适抗体球蛋白ＩｇＧ的浓度为Ｒ－６μｇ／ｍＬ。 相似文献
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蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制 总被引：14，自引：3，他引：11
用蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）提纯病毒粒子免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有限稀释法克隆,成功获得２株ＢＢ－ＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１∶６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ４４．７ｋＤ的外壳蛋白大亚基的特异性抗体．单抗抗原结合位点分析表明４Ｄ１１和３Ｇ１２两单抗作用于同一抗原决定簇 相似文献
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应用生物素-链霉亲和素的酶联免疫吸附法检测谷物中的玉米赤霉烯酮 总被引：1，自引：0，他引：1
基于生物素-链霉亲和素的酶联免疫吸附法(ELISA),建立了玉米赤霉烯酮(ZEN)的ZEN-ELISA检测方法。该方法的检测灵敏度为0.8 ng/ml,批内、批间变异系数分别为5.1%和8.6%,平均加样回收率为91.2%;抗ZEN单克隆抗体与玉米赤霉醇的交叉反应度为12.3%,而其与赭曲霉素A、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉素B1无交叉反应;相关试剂在4℃存180 d后各检测参数基本无变化;该方法与商品ELISA试剂盒对同一样品ZEN测定结果的相关系数为0.943 2。说明该方法的特异性和稳定性较好,测定结果准确,可用于ZEN的大量筛查。 相似文献
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异戊烯基腺嘌呤核苷（iPA）的间接酶联免疫吸附测定法 总被引：5，自引：0，他引：5
以ｉＰＡ－ＢＳＡ为免疫抗原制备了兔抗血清,与其它ｉＰＡ类似物的交叉反应率均低于５％,抗体－抗原亲和常数为６．２６＊１０＾６Ｌ．ｍｏｌ＾－１。利用此抗体与生物素－亲和素标记系统建立了ｉＰＡ的间接酶联免疫吸附测定法,检测线性范围为０．８－１０００ｎｇ．ｍＬ＾－１。 相似文献
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采用NBT光化还原反应检测SOD活性时,反应系统中蛋白质含量在100 μg以上将对SOD活性测定造成严重干扰,并且干扰程度随蛋白质含量的增加而加剧;连苯三酚自氧化系统受维生素C的干扰,当反应系统中维生素C的含量在20 μg以上,则明显抑制连苯三酚的自氧化.同一植物材料的SOD同工酶在不同浓度的凝胶系统中分离将显示出不同的分离效果. 相似文献
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斑点免疫金检测鸡传染性支气管炎病毒的研究 总被引：4，自引：0，他引：4
通过胶体金标记提纯后的兔抗ＩＢＶＩｇＧ，建立了一种以微孔滤膜为固相载体，以红色胶体金为标记物，检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的斑点免疫金测定法（ＤＩＧＦＡ）。ＤＩＧＦＡ对ＩＢＶ的最小检出量为２０．３×１０￣（－８）ｇ，在１０份自然病例样品中检出８份。鸡胚培养法以育传３～５代，出现侏儒胚者为阳性，从上述样品中检出６份。对接种ＩＢＶ的鸡胚尿囊液，ＤＩＧＦＡ法检出率为１００％。实验结果表明，ＤＩＧＦＡ法对鸡传染性支气管炎的早期诊断具有简便、灵敏、快速、特异性强和重复性好等优点。 相似文献
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马兜铃酸广泛存在于中草药和中成药中,该化合物已被证实可导致人类肿瘤。研究通过体外小鼠淋巴瘤细胞致突变试验来检测马兜铃酸(AA)的致突变率和药剂剂量的相关性,对试验具体所采用的96孔板法进行了详细的论述,并进而希望能够建立可以用于各种中草药遗传毒性检测的方法。经过试验证实了小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变试验方法可以有效地检测马兜铃酸的细胞毒性和致突变性。并且随着AA剂量的增加,L5178Y细胞的相对存活率和悬浮生长率均明显降低。表明AA对L5178Y细胞具有明显的细胞毒性,并可以诱导tk基因的突变。 相似文献
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将A21位缺失胰岛素原基因直接克隆到温度诱导型表达载体pBV220上，在E.coli系统中得到高效表达，表达量为8％－15％。表达产物经过超声波破碎或高压匀浆，包涵体裂解，等电点沉淀、二硫键还原及A，B链重组等后加工过程后，得到高纯度的突变胰岛素原。用酶切的方法将其活化为A21位缺失胰岛素，并进行性质和活性测定，证明其免疫活性和受体结合活性均大幅下降。因此认为A21Asn在维持胰岛素发挥其生物功能所必须的特定空间结构方面有重要作用，A21Asn是不可缺失的。 相似文献
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抗大肠杆菌O157鸡卵黄抗体的酶联免疫吸附试验 总被引：1，自引：0，他引：1
以灭活大肠杆菌(E.coli)O157为抗原免疫产蛋鸡获得抗E.coliO157卵黄抗体(IgY),建立了该抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。并研究了包被温度和时间及不同卵黄前处理方法对ELISA检测的影响,所获得的最佳检测条件为:以浓度为108~109/mL的灭活E.coliO157为抗原进行包被,4℃包被19h,水稀释法对卵黄进行前处理,然后检测其中的IgY效价。该方法简便可靠,适于对大肠杆菌特异性抗体IgY的动态检测和批量检测。 相似文献
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茉莉酸酶联免疫检测法（ELISA）的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
以茉莉酸－牛血清白蛋白复合物作为免疫原,获得了兔抗茉莉酸甲酯抗血清,并在此基础上建立了茉莉酸固相抗原型ＥＬＩＳＡ。此外,利用茉莉酸甲酯和辣根过氧化物酶标记的茉莉酸对鼠抗茉莉酸甲酯单克隆抗体的竞争结合,建立了茉莉酸固相抗体型ＥＬＩＳＡ。上述两种ＥＬＩＳＡ的检测灵敏度分别为０．４２ｐｍｏｌ和０．２０ｐｍｏｌ,检测范围分别为０．９８～１０００ｐｍｏｌ和０．６３～２０ｐｍｏｌ,批内变异系数分别为３．４４％和１．６２％,批间变异系数分别为２．４７％和２．０６％。样品的平均回收率分别为７３．３％和７６．９％。 相似文献
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使用斑点免疫结合试验(DIBA)和PCR法分别对灰飞虱体内水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)和沃尔巴克氏体(Wolbachia)的感染特点进行研究。结果发现:灰飞虱体内广泛存在Wolbachia感染,但是灰飞虱体内Wolbachia的感染与其体内携带RSV的特点不存在明显的相关性,同时二者在经卵传播过程中也没有明显的相关性。这暗示了RSV和Wolbachia在灰飞虱体内虽然都可以垂直传播给下一代,但是二者在传播方式上或者在传播过程中可能是两个相对独立、相互间没有明显影响的过程。 相似文献
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【研究目的】建立一种便于检测鸭病毒性肝炎抗体的方法。【研究方法】将纯化的鸭病毒性肝炎I型病毒(DHV-I)致敏双醛化红细胞,制备检测DHV抗体的间接血凝诊断抗原。【研究结果】使用该抗原对9种常见的禽传染病阳性血清、15只随机抽样的非免疫鸭血清进行检测,抗体均为阴性;检测被鸭病毒性肝炎I型病毒阻断后的阳性血清,抗体为阴性;用不同批次的诊断抗原检测同一血清样品结果显示一致;敏感性是琼脂扩散试验的32～64倍;对15只随机抽样的免疫鸭进行检测,阳性率达93%。【结论】该方法敏感性较高、特异性强、重复性好,可用于疫苗免疫后抗体水平的检测及鸭病毒性肝炎的流行病学调查。 相似文献