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1.
《中国预防兽医学报》2015,(10)
为分离牛病毒性腹泻病毒(BVDV)并分析其5'UTR序列和遗传特征,本研究于2010年对黑龙江某奶牛场采集的患有腹泻的牛病料样品进行病毒分离,通过理化特性试验及RT-PCR对两株分离株进行鉴定,并根据其5'UTR序列进行同源性分析。结果表明,两株分离株均能够产生典型的细胞空泡样细胞病变,对乙醚、氯仿、胰酶极其敏感,不耐热,Mg2+对其不具有保护力,对酸的抵抗力较弱;5'UTR序列分析显示两株分离株与BVDV-1b型5'UTR同源性较高。以上结果表明本研究分离获得的两株分离株为1b基因型的BVDV,为引起该牛群腹泻病的主要病原因素。本研究为BVDV感染机制和疫苗研制奠定了重要基础。 相似文献
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《动物医学进展》2015,(12)
探讨牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染对牛胚肾细胞(MDBK)类泛素基因转录水平的影响。对致细胞病变型(cp型)BVDV标准株NADL毒株及非致细胞病变型(ncp型)BVDV分离株shz 132毒株进行增殖,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)反应测定2种病毒拷贝数,按照Reed-Muench法测定BVDV NADL病毒TCID50值。以100TCID50BVDV NADL病毒和同等拷贝数的BVDV shz 132病毒分别感染MDBK细胞不同时间(4、12、24、48h)后收集细胞,提取细胞总RNA,反转录得到cDNA。以cDNA为模板,采用特异性引物,通过RT-qPCR反应检测细胞类泛素基因SUMO1、SUMO2、SUMO3、Ubc9的转录水平。结果显示,致细胞病变型BVDV NADL感染MDBK细胞48h,引起细胞显著的病变,而非致细胞病变型BVDV shz 132感染不引起细胞病变。BVDV NADL和shz 132的病毒拷贝数分别是1.13×1011 copies/mL和1.77×1011 copies/mL,BVDV NADL的TCID50是10-4.9 TCID50/0.1mL。RT-qPCR分析显示,与对照组相比,2种BVDV病毒感染都能引起MDBK细胞SUMO1、SUMO2、SUMO3、Ubc9基因的相对表达量变化。在BVDV shz 132感染的细胞中,SUMO1、SUMO2、SUMO3的相对表达量在各个感染时间都高于或接近于BVDV NADL感染的细胞,且在感染后24h,以上3个基因的相对表达量下调,差异极显著(P0.01);而Ubc9基因的相对表达量则低于或接近于BVDV NADL感染的细胞,且在感染后24h,其相对表达量上调,差异极显著(P0.01)。结果表明,BVDV感染调控了MDBK细胞SUMO系统,提示细胞SUMO系统参与了BVDV在胞内的活动,且这种调控作用与病毒的生物型存在密切联系。 相似文献
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从牦牛(Yak)体内分离出牛病毒性腹泻/黏膜病病毒(BVDV/MDV),参考GenBank中已收录的BVDV-Ⅰ型的全基因组序列,设计了19对引物,通过RT-PCR方法,对牛病毒性腹泻病毒牦牛株进行克隆及测序,得到其全基因组序列(GenBank登录号:JQ799141),序列全长12214 nt,其中5'-UTR长288 nt,3'-UTR长232 nt。将牦牛株BVDV全基因序列与GenBank中登录的其他8株BVDV病毒全基因序列进行同源性比对及系统进化分析,结果表明,牦牛株BVDV与BVDV-Ⅰ型毒株出于同一分支,但与其他8株BVDV毒株全基因序列同源性均不高,有可能属于新的独立基因型或基因亚型,仍需进一步研究证实。 相似文献
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应用RT-PCR方法从牛病毒性腹泻病毒（BVDV）新疆石河子分离株、玛纳斯不同年份两个分离株扩增获得的3株BVDV的E2基因序列,分别命名Shihezi148、Manasi和MNS2（GenBank登录号：EU159699、EU159703和EU169937）。序列分析结果表明3株E2基因长度分别为1121bp、1122bp和1122bp,分别编码373、374和374个氨基酸残基。核酸序列同源性和系统发生分析表明,3株病毒均属于BVDV基因1型（BVDV-1）,Shihezi 148株与澳大利亚Bega株亲缘关系最近,同处于BVDV-1c基因亚型群,其E2氨基酸同源性为90.11%。Manasi株和MNS2株E2基因核酸序列仅有4个碱基的差别,它们与Changchun 184和匈牙利VEDEVAC株亲缘关系最近,位于BVDV-1b基因亚型群。Manasi和MNS2株与Changchun 184株E2氨基酸同源性分别高达98.66%和98.93%。 相似文献
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从云南某牛场疑似BVDV感染的病料通过接种MDBK细胞分离到1株BVDV,将其命名为BVDV/W。该分离毒株连传15代均不产生CPE,为NCP型BVDV。通过电镜检测可观察到直径为 40～60nm病毒粒子。该分离病毒能被牛病毒性腹泻标准阳性血清中和,且能被BVDV IFA荧光抗体识别;针对常用作BVDV基因分型的5′-UTR设计特异性引物,经RT-PCR可扩增出288bp特异性片段。将所测的目的片段序列与中参考序列进行同源性比较,结果显示与293株和Y2株同源关系较近,分别为90.0%和89.9%,与2014年以来我国报道的分离株同源性在88%左右,具有一定的代表性。5′-UTR遗传进化分析证实该分离毒株为BVDV-1型。动物回归试验显示,该分离毒株可引起出现体温升高、腹泻、粘膜病等典型的BVD/MD症状,表明该毒株为1株BVD强毒株。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2016,(12)
为确定牛呼吸道传染病的病原,本研究对2014年从黑龙江省发生牛呼吸道传染病的某肉牛场采集的40份鼻拭子进行了病毒分离,结果分离到一株牛病毒性腹泻病毒(BVDV),命名为LJ36/14株。病毒鉴定结果表明,分离株在单层MDBK细胞中不产生细胞病变;利用BVDV p80蛋白的单克隆抗体(MAb)进行的间接免疫荧光试验表明接种LJ36/14株的细胞结果显示阳性。分离株的TCID_(50)为10~(5.9)/0.1 mL。对该分离株的5'端非编码区(5'UTR)和Npro基因进化树分析表明该分离株为国内首次分离并鉴定的基因亚型,即BVDV1v亚型。本研究为了解BVDV地理分布和流行情况及BVDV疫苗的制发奠定了基础。 相似文献
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河南某地区牛场部分牛出现呼吸道症状,伴随有怀孕母牛的流产,本研究使用细胞培养的方法于病死牛脾脏中分离得到1株BVDV病毒,命名为BVDV-HEN01。该病毒在MDBK细胞上生长,未发生固缩、拉网等病变,可确定该毒株为1株非致细胞病变毒株;下载若干条BVDV全基因序列,经MegaAlign软件比对在同源性较高的区域设计全基因组扩增引物10对,经鉴定该毒株为BVDV-2型毒株,并扩增出该毒株的全基因组;直接免疫荧光法测得病毒TCID50为10-4.1/0.1 mL。使用电镜观察病毒颗粒,颗粒的直径为50 nm左右。对分离株进行同源性分析并绘制系统进化树,发现HEN01株与我国SD1301株进化关系密切。本实验所分离的毒株为1株新的BVDV-2b亚型毒株,全基因组序列测定的完成对于反向遗传工程与疫苗的研发有重大意义。 相似文献
10.
为对上海某猪场送检的一份猪瘟疫苗进行牛病毒性腹泻病毒(BVDV)检测,本研究将猪瘟疫苗样品接种于MDBK细胞,盲传15代后仍无致细胞病变效应,但间接免疫荧光试验表明接种该疫苗后的MDBK细胞能够被单克隆抗体BZ-53(BVDV-2)识别。采用BVDV-1和BVDV-2的5’-UTR的通用检测引物和针对BVDV E2的引物,对样品RNA进行RT-PCR检测,结果显示,样品能够扩增出约288 bp的BVDV特异性片段;此外,5’-UTR和E2基因片段的测序分析结果表明分离株属于BVDV-2,并且其E2基因与牛源XJ-04株(BVDV-2)的E2基因同源性最高(92.3%),而与猪源ZM-95株(BVDV-1)的E2基因同源性较低(64.5%)。由此证明,该猪瘟疫苗中的确污染有一株BVDV-2株。 相似文献
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1株猪源牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定 总被引：2，自引：1，他引：1
从BVDV阳性仔猪病料中分离病毒,为开展猪源BVDV病原学研究奠定基础。将处理后BVDV阳性仔猪组织样品接种MDBK细胞,分离到1株猪源BVDV,命名为SD0803株。通过细胞培养、直接免疫荧光、5′-UTR与Npro PCR扩增、电镜观察、TCID50测定及对其分子进化特征加以分析。结果表明,该毒株在MDBK细胞上盲传至13代未出现细胞病变。在直接免疫荧光试验中呈阳性荧光信号。PCR扩增分别获得5′-UTR与Npro预期大小DNA片段。电镜观察,病毒粒子略呈圆形,有囊膜,直径约50nm。病毒滴度为10-6.5 TCID50.0.2 mL-1。SD0803 5′-UTR、Npro序列进化分析显示,该分离株属于BVDV-1,与已知BVDV-1各亚型之间同源性较低,单独成一分支。结果表明,成功分离鉴定1株猪源BVDV SD0803,该毒株为非致病变型BVDV-1,极有可能为BVDV-1新的亚型。 相似文献
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为了解新疆地区部分规模奶牛场牛病毒性腹泻病（BVD）的流行情况,优化防控措施,以达到建设防控净化场的目的,自2020年11月到2021年7月累计采集新疆5 个地区16 个奶牛场共计26 997 份血清、3 843 份犊牛耳组织进行全群普检。通过使用IDEXX公司牛病毒性腹泻病毒（BVDV）抗原检测试剂盒检测及RT-PCR复检结合测序等方法,淘汰阳性牛,同源性分析流行毒株情况。BVDV血清抗原检测结果为：沙湾某奶牛场BVD阳性率为1.63%（38/2 326）;乌鲁木齐某奶牛场BVD阳性率为0.35%（4/1 132）;其余奶牛场均为阴性。犊牛耳组织抗原检测结果为：乌鲁木齐某牛场BVDV阳性率为1.17%（4/342）;其余奶牛场均为阴性。研究结果揭示,奶牛场通过淘汰BVDV阳性牛,调整免疫程序、制定消毒程序等方法,可有效净化BVD。 相似文献
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Genetic comparison of ovine and bovine pestiviruses 总被引：1，自引：0，他引：1
C L Kelling J E Kennedy L C Stine K K Rump P S Paul J E Partridge 《American journal of veterinary research》1990,51(12):2019-2024
Viral RNA oligonucleotide fingerprinting was used to compare genetic relationship among pestiviruses originating from ovine or bovine host species. Ovine pestiviruses, including reference border disease virus and 2 border disease isolates originating from natural pestivirus infections of sheep, appeared to have a more distant genetic relationship among themselves than with certain bovine pestiviruses. A closer genetic relatedness was evident between border disease virus and 3 noncytopathic bovine pestiviruses, including Draper bovine viral diarrhea virus (BVDV), a BVDV isolate that originated from aborted bovine fetuses, and a virus that was isolated from the serum of a calf that had a chronic BVDV infection. Four noncytopathic bovine viruses, including Draper BVDV and 3 field isolates, were closely related. Reference Oregon C24V BVDV, a cytopathic virus, was closely related to only 1 of the 7 noncytopathic viruses in this study. 相似文献
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R G Hess C O Coulibaly I Greiser-Wilke V Moennig B Liess 《Veterinary microbiology》1988,16(4):315-321
A collection of 90 field isolates of hog cholera virus (HCV) was used to test the specificity of four hybridoma cell lines secreting monoclonal antibodies against pestiviruses. Reaction of virus isolates and monoclonal antibodies was controlled by an indirect immunofluorescence assay (IFA). Two monoclonal antibodies which had been generated against HC virus strain "Alfort 187" were reactive only with HCV field isolates and an HCV reference strain but not with bovine viral diarrhoea virus (BVDV) reference strains. Two other monoclonal antibodies (generated against BVDV, strain NADL) reacted only with BVDV reference strains but not with HCV field isolates, although with 3 of these strains focal reactions involving only a few cells were detected. The ability to discriminate between both viruses is a diagnostic need which may be fulfilled by these monoclonal antibodies. 相似文献
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Nested reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) for typing ruminant pestiviruses: bovine viral diarrhea viruses and border disease virus. 总被引：1，自引：1，他引：0 
下载免费PDF全文
下载免费PDF全文 R W Fulton J M d'Offay J T Saliki L J Burge R G Helman A W Confer S R Bolin J F Ridpath 《Canadian journal of veterinary research》1999,63(4):276-281
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猪源牛病毒性腹泻病毒JLS-01株的分离鉴定及致病性研究 总被引：1，自引：1，他引：0
为了解猪源牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的分子特征及致病性,本研究利用RT-PCR从吉林省某猪场出现严重腹泻症状的仔猪病料中检测到BVDV核酸阳性,将处理后的BVDV阳性样品接种于MDBK细胞,分离到1株病毒,命名为BVDV JLS-01。通过免疫荧光检测、5′UTR与Npro RT-PCR扩增对其分子进化特征进行分析。结果显示,该分离毒株在MDBK细胞上盲传至8代未出现细胞病变,在免疫荧光试验中呈阳性荧光信号。RT-PCR扩增获得大小分别为280和735bp的5′UTR和Npro片段。BVDV JLS-01株5′UTR与Npro序列遗传进化分析表明,其与LN-1和ZM-95亲缘性最近,与牛源毒株LN-1基因同源性达99.3%,提示该毒株可能来源于牛源毒株。将BVDV JLS-01株F8代细胞培养液人工感染BVDV和猪瘟病毒(CSFV)抗体阴性猪,感染猪未表现出明显的体温升高,但白细胞数量下降,并在感染猪的白细胞提取物中分离到该毒株,表明该毒株具有一定的致病性。该毒株的成功分离对进一步开展BVDV流行病学调查及致病机理等方面的研究具有重要意义。 相似文献
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Attempts to characterize bovine viral diarrhea virus isolated from cattle after immunization with a contaminated vaccine 总被引：1，自引：0，他引：1
H A Kreeft I Greiser-Wilke V Moennig M C Horzinek 《DTW. Deutsche tier?rztliche Wochenschrift》1990,97(2):63-65
Bovine viral diarrhea virus (BVDV) was isolated from 28 animals with a history of immunization against respiratory disease with a vaccine contaminated with BVDV. The vaccine-derived parental virus strain and the 28 isolates were analyzed using 10 monoclonal antibodies (MAbs) directed against different epitopes and antigenic domains on the major envelope glycoprotein of BVDV. None of the isolates displayed a reaction pattern identical with the parental virus. Instead, seven different reaction patterns (#A-G) emerged. Circumstantial evidence indicated that six of these were vaccine related whereas in one case (pattern #F) the origin of the isolate was unclear. The results indicated that BVDV rapidly changed during animal passages and that the tracing of the vaccine contaminant using Mabs was impossible. 相似文献
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G Castrucci F Frigeri B I Osburn M Ferrari M M Sawyer V Aldrovandi 《Comparative immunology, microbiology and infectious diseases》1990,13(1):41-49
The cytopathic (CP) TVM-2 strain of bovine viral diarrhea virus (BVDV) induced in calves a severe disease, characterized by the clinical picture which is usually reported for the acute primary infection observed under natural conditions. In contrast, the calves inoculated with a different biotype of BVDV, the non-cytopathic (NCP) New York-1 strain, remained clinically normal with the only evidence of virus replication in these calves being the recovery of the virus from their pharyngeal swabbings and blood and also the detection of specific neutralizing antibody in their serums. When calves were immunosuppressed with dexamethasone (DMS), they underwent an overt systemic disease of such a severity that in most of the cases it ended with the death of the animals. This result was obtained with either the CP and the NCP strain of BVDV. Finally, the mixed infection that was obtained in the calves with the CP and the NCP BVDV did not result in any particular unexpected pathological situation. It was speculated that the immunosuppressive activity of BVDV could be a property peculiar to certain isolates of the virus. 相似文献