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1.
取人羊水标本进行羊水干细胞原代,分离培养,并探讨人羊水标本性状等因素对原代分离培养的影响.结果表明,分离的羊水干细胞表达Oct-4等胚胎干细胞和CD29等成体干细胞的特异基因,细胞生长迅速,增殖能力较强,并可分化为Nestin阳性的神经细胞和α-actia阳性的心肌细胞.同时,在羊水干细胞原代培养时,羊水标本性状在一定程度上影响细胞的贴壁数量及贴壁时间.羊水标本细胞的贴壁时间孕中期(4.7±0.6)d与孕晚期(6±0.5)d有明显差异(P<0.05),孕晚期贴壁时间较长.羊水中血液污染程度对贴壁时间有明显影响,重度污染组(10.8±0.3)d与无污染组(6±0.5)d、轻度污染组(6.3±0.6)d贴壁时间差异均显著(P<0.05).羊水体积对原代细胞的贴壁数量和细胞贴壁时间有一定影响,羊水体积增大贴壁时间延长,但差异不显著,而贴壁细胞数量随羊水体积增加而增加,各组之间差异显著(P<0.05).实验系统地检测了羊水干细胞原代培养的影响因素,为羊水干细胞研究提供了可以借鉴的资料,同时分离得到的羊水干细胞,具有分化为神经细胞和心肌细胞的潜能,有望作为种子细胞进行临床应用. 相似文献
2.
目的：获得转EGFP基因猪羊水干细胞并监测其自我更新、增殖和多向分化潜能。方法：利用羊水干细胞培养技术体系,从胎龄30 d猪胎儿羊水中分离培养羊水干细胞,通过脂质体介导转染技术,将EGFP基因导入羊水干细胞,诱导转基因羊水干细胞贴壁分化,观察其体外增殖、分化特点。采用RT-PCR技术检测干细胞和分化细胞表面标志或相关基因。结果：成功分离培养出羊水干细胞,获得转EGFP基因羊水干细胞,羊水干细胞在表达EGFP的同时仍具有多向分化潜能。羊水干细胞中β-Actin、NogoA、DCX、CyclinD2、CD133、Hes1、Oct4、Desmin、CD-90、Nanog和Sox2表达阳性;体外诱导的羊水干细胞可以分化为星形胶质细胞(表达GFAP)、少突胶质细胞(表达GalC)和神经元细胞(表达NF、NSE和MAP2);能分化为脂肪细胞（表达LPL和PPARγ-D）、成骨细胞（表达Osteonectin和Osteocalcin）、肌细胞（表达myf-6和myoD）和内皮细胞（表达CD31、CD34、CD144 和eNOS）。结论：从猪胎儿羊水分离羊水干细胞具有可行性和有效性,转EGFP基因羊水干细胞具有自我更新、增殖和多向分化潜能,可以用EGFP对羊水干细胞进行标记、追踪。 相似文献
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羊水干细胞是一种存在于胎儿羊水中Oct4阳性的多能性干细胞.该细胞具有增殖能力强、分化潜能高和免疫原性低等特点,在生物学和医学研究上具有广泛的应用前景.本实验从不同胎龄的猪胎儿标本中分离猪羊水干细胞,并通过诱导其向脂肪细胞分化来检测其多向分化潜能.结果表明,从胎龄为30～70 d的猪胎儿羊水中分离出的羊水干细胞贴壁率高,增殖能力强,活性好,并建立了两株猪羊水干细胞系.经流式细胞仪和RT-PCR检测,猪羊水干细胞表达CD117、CD44、CD166和CD90表面抗原,不表达CD45、CD54和CD34;稳定表达Oct4、Nanog、C-myc和HLA-abc干细胞特异标志基因;转染报告基因载体pOct4-EGFP和pNanog-EGFP后表达绿色荧光;此外,猪羊水干细胞还能够在体外诱导分化为脂肪细胞.研究结果为大动物羊水干细胞的研究提供了可借鉴的材料. 相似文献
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比较胚胎的不同处理方法,不同饲养层对兔胚胎内细胞团(ICM)贴壁和增殖的影响。结果显示:消化掉外层粘蛋白和部分透明带的胚胎96 h贴壁率(85.29%,29/34)较高,内细胞团生长良好;超排组胚胎的贴壁率和内细胞团(ICM)原代克隆率与自然发情组差异不显著(85.71%vs 88.06%,21.43%vs19.40%,P>0.05);与对照组(12.5%,3.13%)相比,在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层(M EF)和兔胚胎成纤维细胞饲养层(REF)上培养获得的呈聚集状生长ICM及ICM原代克隆率较高(P<0.01),M EF组和REF组差异不显著(54.1%,22.95%vs 51.92%,17.31%,P>0.05),但REF饲养层培养效果不稳定。研究结果表明,兔早期胚胎消化掉外层粘蛋白和部分透明带有利于胚胎内细胞团贴壁和增殖;超排处理不影响从兔胚中分离胚胎干细胞(ES);小鼠胚胎成纤维细胞饲养层能有效支持兔胚内细胞团的贴壁和增殖。 相似文献
5.
小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)作为胚胎干细胞培养的饲养层细胞,受到细胞代次等因素限制,需要长期反复制备,消耗大量的实验动物。寻找可替代小鼠胚胎成纤维细胞支持干细胞生长增殖的稳定细胞系,对于降低干细胞的培养成本和减少工作量具有重要意义。L-Wnt3a细胞是一个能够稳定向细胞外分泌Wnt3A蛋白的永生细胞系,目前尚不清楚其是否支持小鼠胚胎干细胞的培养。本研究探讨L-Wnt3a作为饲养层细胞对于小鼠(Mus musculus)胚胎干细胞系的建立以及该细胞条件培养液对无饲养层培养小鼠胚胎干细胞的影响。实验结果表明,丝裂霉素C浓度为10μg/mL,作用4 h时,可显著抑制L-Wnt3a细胞的体外生长而不影响细胞的活力。用该细胞制备饲养层,原代分离、培养小鼠胚胎干细胞,成功建立小鼠胚胎干细胞系。利用L-Wnt3a细胞制备条件培养液进行胚胎干细胞的培养,结果显示,L-Wnt3a条件培养液可支持小鼠胚胎干细胞在无饲养层条件下自我增殖,该条件下培养的胚胎干细胞表达碱性磷酸酶、Oct4、Sox2、Nanog、E-cadherin(E-CAD)和SSEA-1多能性因子,并能够在体内、外分化为3个胚层,形成嵌合体后代。L-Wnt3a细胞作为饲养层细胞,能够成功分离获得小鼠胚胎干细胞,可以避免小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层细胞存在的代数限制、制备繁琐等问题;并且LWnt3a条件培养液可以在无饲养层条件下维持小鼠胚胎干细胞的自我更新,能够在一定程度上有效避免饲养层细胞对胚胎干细胞造成的不利影响。 相似文献
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摘要：比较四种原代角膜内皮细胞分离培养方法,并对分离培养的山羊角膜内皮细胞生长特性进行初步研究。取屠宰1～2月龄关中奶山羊角膜,无菌分离角膜内皮层和Descemet’s membrane,分别用组织块法、胰蛋白酶法、dispase法和dispase加胰蛋白酶法分离培养原代角膜内皮细胞,比较这四种方法处理后细胞离散和贴壁情况。结果显示,dispase加胰蛋白酶法为最佳分离纯化角膜内皮细胞的方法。分离的细胞经形态学观察、免疫组化染色、Giemsa染色、扫描电镜和透射电镜等方法鉴定为角膜内皮细胞。说明dispase加胰蛋白酶法为角膜内皮细胞分离培养的理想方法,该方法可为哺乳动物角膜内皮细胞的理论研究和构建组织工程化人工角膜内皮提供种子细胞。 相似文献
7.
猪胚胎干细胞培养、分离和传代 总被引：4，自引：0，他引：4
摘要:利用五指山小型猪近交系不同发育阶段的早期胚胎为材料，探索猪胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES)培养、分离、传代的影响因素，以选择猪胚胎干细胞建系的适宜条件。收集五指山猪第5～10 d胚胎(配种当天记为0 d)，以 STO细胞[STO细胞是来自SIM小鼠(S)胚胎对硫代鸟嘌呤(thioguanine,T)和乌本苷(ouabain,O)有抗性的成纤维细胞系]为饲养层，分别采用两种培养液: 杜氏培养液(Dulbecco's modified eagle medium ，DMEM) + 10%胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）+ 10 %新生牛血清（newborn bovine serum，NBS）+1 000 IU/mL白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor，LIF）+ 30 ng/mL干细胞生长因子（stem cell growth factor , SCF）+20 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor ，bFGF)或DMEM + 10% NBS + 10% FBS + 1 000 IU/mL LIF + 30 ng/mL SCF。比较发现，培养液中是否加入bFGF对胚胎干细胞的培养无显著影响；实验共收集胚胎124枚，其中D5～6胚胎18枚，胚胎贴壁率为68.8% ，内细胞团出现率为6.3% ，未能传代；收集D7孵化囊胚27枚，贴壁率为100% ，内细胞团出现率为38.9% ，传代1次失败；D9胚胎18枚，贴壁率为100%，传代后ES细胞生长较缓慢；收集D10胚胎52枚，胚胎贴壁率为100%，传代率为100%，传代后可出现ES细胞克隆点；实验过程中比较了胚径对干细胞培养的影响，发现胚径越大，培养效果越好，胚径大于100μm,分离ICM后出现干细胞集落成功率达100%，并得到了AP染色呈阳性的传4代的ES细胞集落。 相似文献
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探讨兔(Lepus brachyurus)胚胎的不同处理方法对兔早期胚胎体外发育能力的影响,筛选出适合兔类胚胎干细胞(embryonic stem,ES)分离培养的兔胚胎的较佳处理方法。将兔胚胎用3种不同的方式进行处理,观察兔类ES细胞贴壁、克隆、生长情况,并对所得的兔类ES细胞进行碱性磷酸酶活性鉴定、干细胞转录因子的RT-PCR检测和体外分化能力的鉴定。结果显示,挑破透明带法和胚胎分割法较对照组得到的胚胎更容易贴壁和增殖,差异显著(P0.05),虽然离散胚组的胚胎贴壁率(88.9%)显著高于挑破透明带组(53.8%)(P0.05),但挑破透明带组的ICM形成率(48.8%)高于离散胚组(40.0%)(P0.05),挑破透明带组F1、F2代兔类ES细胞的克隆率分别为35.7%和33.9%,均显著高于其他两组(P0.05),最高传至30代。获得的兔类ES细胞经碱性磷酸酶染色检测呈阳性。提取兔类ES细胞集落的RNA,经RT-PCR检测,得到扩增多能基因GAPDH、Nanog和Sox2与预期大小一致的目的片段。体外分化形成具有3个胚层构成的类胚体(embryoidbodies,EBs)。结果表明,挑破透明带有利于提高从兔胚胎中分离胚胎干细胞的效率,能更好的支持兔类ES细胞的培养与增殖。 相似文献
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为提高昆明小鼠胚胎生殖细胞(embryonic germ cells, EG cells)建系效率，以怀孕8.5～12.5 d小鼠胎儿为材料，比较了胎儿后1/3部位的组织共培养、生殖嵴共培养、差速贴壁和穿刺生殖嵴4种分离胚胎原始生殖细胞(primordial germ cells，PGCs)的方法以及不同传代方式对EG细胞克隆的影响。结果表明：生殖嵴共培养和差速贴壁方式获得了较好分离EG细胞的效果，与其它两组比较差异显著；手工传代方式与连同成纤维细胞一起消化的传代方式相比获得了较高传代比率。对所分离EG细胞经形态观察、AKP染色和体外分化能力检测，证实其符合小鼠EG细胞的集落状生长、细胞未分化特性及细胞多能性等特征。 相似文献
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大鼠肌肉卫星细胞的分离、鉴定与诱导分化 总被引：1，自引：0，他引：1
肌肉卫星细胞是组织特异性干细胞,负责着骨骼肌的生长和再生.尽管发现卫星细胞的存在已经有50多年的历史了,但分离鉴定肌肉卫星细胞的方法仍然不稳定.本研究使用两步酶消化和差速贴壁相结合的方法分离大鼠(Rattus norve gicus)肌肉卫星细胞.免疫细胞化学染色显示,分离的大鼠肌肉卫星细胞高表达Desmin;通过RT-PCR鉴定所分离的细胞表达肌源性干细胞因子Myf5及Myod1;成肌诱导48h后,卫星细胞开始形成多核的肌管;成脂诱导1周后,细胞内开始出现脂滴,2周后充脂细胞明显增多.研究结果提示,分离的卫星细胞具有肌源性,有发育形成肌管和向成脂细胞分化的能力. 相似文献
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不同氮形态对铅胁迫下苏丹草根系形态及铅吸收富集特征的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
为进一步研究富营养化水体中不同氮形态和重金属对修复植物的交互作用,通过水培试验研究了水体中不同形态氮培养对铅胁迫下苏丹草根系形态及其对铅吸收富集的影响。结果表明,水体Pb(0.5mmol/L)污染时,不同氮形态培养虽然对苏丹草根系形态有一定的影响,但没达到显著性差异,然而对苏丹草根系中丙二醛(MDA)含量及其各器官生物量的影响达显著差异(p<0.05),NH4—N营养液培养的苏丹草根系MDA含量比NO3—N,NO2—N营养液培养的分别高出了4.6和1.6倍;NO3—N营养液培养的苏丹草根、茎、叶生物量比NH4—N营养液培养的分别高出了28.7%,19.6%和23.9%,比NO2—N营养液培养的高出37.6%,30.9%和36.7%。水体Pb(0.5 mmol/L)污染时,NO3—N营养液培养的苏丹草根中Pb浓度明显比NH4—N营养液培养的高出2倍多,且其地下富集系数最大;NO2—N营养液培养的苏丹草茎中Pb浓度明显比NH4—N营养液培养的高出近8倍,且其对铅的转运能力影响作用最强。这表明受重金属污染的富营养化水体中如存在不同形态氮,在一定程度上还有利于削弱重金属对修复植物的毒性作用,增大水体对某些重金属的环境容量。 相似文献
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摘要 目的 人胎儿骨髓间充质干细胞（BMMSCs）的群体倍增次数（70～80次）是成体BMMSCs (30～40次）的两倍,分化能力优于成体干细胞,尤其是前3月龄胎儿BMMSCs,最接近胚胎干细胞,端粒酶活性高,生长速度快,分化能力强,可能是组织工程和再生医学研究理想的种子细胞。本研究的目的是建立２～３月龄流产人胎儿BMMSCs体外分离方法, 筛选其体外培养体系,鉴定其生物学特性及安全性,为体外诱导分化和组织工程研究提供种子细胞。方法 实验于2005-04/12在国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心完成。采取纵向剪开骨髓腔涮洗细胞和全骨髓培养法分离２～３月龄流产胎儿BMMSCs, MTT法筛选基础培养液和血清浓度并制作生长曲线,流式细胞仪和免疫组织化学法鉴定细胞抗原标志,并通过核型分析和成瘤实验评估细胞的安全性。结果 沿长轴剪开骨髓腔涮洗细胞法是获得２～３月龄人流产胎儿四肢长骨骨髓的实用方法。在本实验范围内α-MEM+20%FBS是体外培养2～3月龄流产胎儿BMMSCs的最佳体系。分离的第３代BMMSCs除表达成体BMMSCs表面抗原标志外还表达Oct4、SSEA3和SSEA4,第6、12和24代细胞在对数增长期的群体倍增时间分别为34h、36h和40h,且均为二倍体核型、不成瘤。结论 2～3月龄人流产胎儿BMMSCs在体外容易分离和培养,表达部分胚胎干细胞抗原标志,生长速度快,传代次数多,安全性良好,可以成为人类组织工程和再生医学研究理想的种子细胞。 相似文献
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Fred H. Emmert 《Journal of plant nutrition》2013,36(10):1187-1196
Radiophosphorus solution under hydrostatic pressure was passed through the xylem of bean stem sections (Phaseolus vulgaris L., var. Red Wade), and the amount of isotope retained by the stem under various experimental situations noted. Retention of phosphorus followed a linear gradient with time, and was influenced by the physiological age of the plant. Rate of flow of the solution through the stem had no effect on retention. Neither did composition of the radiosolution with respect to pH, various mineral cations, and the water regulators phenylmercuric acetate and polyethylene glycol. Approximately 25 percent of the retained phosphorus was in the soluble state, and only a negligible amount in the exchangeable state. 相似文献
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再生水灌区地下水硝态氮空间变异性及污染成因分析 总被引：2，自引：1，他引：1
为了深入了解北京市再生水灌区地下水硝态氮空间分布规律及污染成因,该文基于地统计学理论、结合ArcGIS软件的地统计分析功能,绘制表达了该区域地下水硝态氮随机性和结构性的半变异函数图和空间分布图。结果表明,研究区域地下水硝态氮含量服从对数正态分布,且与1阶高斯克里格模型拟合最好,从获得的参数可知,地下水硝态氮的空间变程为9639.36m,为反应灌区硝态氮的分布特征,2个监测点的距离不应大于变程;其块金效应为0.43,表明地下水中的硝态氮含量的变化是结构性因素与人为因素共同作用的结果,同时还发现土地利用类型、地下水的开采强度与区域地下水是否容易遭受硝态氮的污染有很大的相关性,监测井深度越小、地下水位降幅越大,地下水硝态氮增幅越大,再生水蓄积区(坑塘水面)对应区域产生地下水硝态氮污染的风险较小。研究结果可为再生水的安全利用提供参考。 相似文献
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BRL饲细胞及血清浓度对体外小鼠精原干细胞的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
分别以大鼠肝细胞(BRL)或小鼠胚胎成纤维细胞(STO)为饲养层．采用含5％、10％及20％胎牛血清的培养液，培养6日龄小鼠生精上皮细胞，研究饲养层和血清浓度对精原干细胞生物学行为的影响。结果表明：在培养的第1周内，2个及4个连成串的精原细胞合胞体数量明显增加，同时大多数精原细胞逐渐退化。培养1周后，大多数精原细胞经短暂的存活及分裂活动后退化消失，培养体系中仅保留下少量单个及由细胞间桥相连的双个及4个成串或成团的A型精原细胞。这些细胞在随后的培养过程中，不表现明显的分裂活动，呈圆球形，表达碱性磷酸酶。不同条件培养体系中的精原细胞及精原干细胞的生物学行为无明显不同，培养20～30d时均有少量精原干细胞存活。这说明BRL细胞能用作饲养层促进精原干细胞存活，但对其更新性增殖没有明显作用；培养液中高浓度胎牛血清对精原干细胞存活和增殖无明显影响，但能促进睾丸体细胞增殖。 相似文献
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土壤重金属来源广泛,其污染风险受到多种因素综合影响,常与影响因素存在非线性关系。Logistic回归法可克服普通线性回归法的应用限制,对土壤污染风险的影响因素识别和污染风险预测中具有良好的应用潜力。以浙江某人类活动强烈影响区域土壤为研究对象,选择坡度、坡向、海拔、人口密度、道路距离、非矿工业加权距离和到矿区距离为自变量,以土壤Cu污染风险分类为因变量,采用二分类Logistic回归模型,识别土壤Cu污染风险影响因素并预测污染风险。结果表明:土壤Cu污染风险受到人口密度、矿点距离、道路距离和非矿工业加权距离的影响显著,但土壤Cu污染风险与人口密度、矿点距离和道路距离均无简单线性关系,密集矿点的叠加作用显著改变了距离对土壤污染风险的影响。区内土壤Cu污染高风险区主要位于铜矿采选及其尾矿库影响区域,中风险区位于破碎带金矿、铁矿区及交通运输影响范围内,低风险区位于低密度人口和高密度人口区域。 相似文献
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为研究胶乳分离机转鼓离心流场动力学特性,基于FLUENT二相流模型,模拟了胶乳的分离过程以及转速、橡胶粒径对分离效果的影响,以浓乳的干胶含量为综合特征参数进行模型验证试验,理论分析影响分离速度的因素、碟片内液流的流动状态及轨迹、浓缩极限等问题。模型中设置鲜胶乳体积分数初始值为0.330,浓乳黏度0.038 48 m Pa·s,表面张力系数0.034 N/m,橡胶粒径为5μm,胶清按水的属性设置,碟片间隙为0.5 mm。计算结果表明:转鼓转速为7 250 r/min时,胶乳进入转鼓10 s时橡胶粒子与胶清已呈现明显分离倾向;当转鼓分别为6 750、7 250和7 750 r/min时,浓乳中的干胶体积分数分别为0.588、0.613和0.636,转速越高,干胶体积分数越大,但转速超过7 250 r/min,干胶体积分数的增幅变缓,流体压力和结构应力也将明显增加;在7 250 r/min工作转速下,当胶乳粒径分别取1、2、3、4和5μm时,浓乳中干胶的体积分数分别为0.354、0.392、0.447、0.531和0.601,浓乳中干胶体积分数随粒径增大而增加,轻相出口处因流体涡漩体积分数有一定波动。浓乳干胶含量的仿真结果与实测值高度接近,相对误差为3.83%,由此验证了模型的可靠性。轻/重相分离速度与粒径、转速直接相关,因科氏力轻相/重相轨迹与碟片母线有偏离,胶乳浓缩存在上限,轻/重相出料路径合理,离心去除细微杂质的能力强。研究结果为揭示胶乳离心浓缩机理、优化分离工艺及结构提供了理论参考。 相似文献