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【目的】了解广西猪群中猪流感（SI）的流行情况,为科学防控广西SI提供参考依据。【方法】以猪流感病毒（SIV）H1N2亚型毒株为抗原,采用微量血凝抑制试验（HI）方法,对2009年7月~2011年3月在广西12个市采集的997份猪血清进行SIV的血清学调查。【结果】2009年的H1N2亚型抗体阳性率为33.4%,比2010年和2011年1～3月的高;广西各市的H1N2亚型抗体阳性率为0~83.1%,其中河池和百色两市的H1N2亚型抗体阳性率较高,分别为83.1%和51.1%,崇左市为零,其他市的H1N2亚型抗体阳性为4.0%~32.1%。【结论】广西地区猪群在2009～2011年均受到猪源H1N2亚型不同程度的感染。 相似文献
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从广东省9个地级市采集42个规模猪场种公猪、肉猪和母猪血清共1 371份,用酶联免疫吸附试验和微量血球凝集抑制试验检测H1、H3、H9亚型猪流感抗体。结果表明:所监测猪场大部分猪群存在H1、H3、H9亚型猪流感抗体,H1、H3和H9亚型流感抗体阳性率分别在3.5%～44.0%、1.6%～20.0%和4.5%～15.6%之间,总阳性率分别为27.9%、6.1%和9.5%;另外,H1、H3和H9亚型猪流感抗体均以珠三角地区感染最为普遍;H1和H3抗体具有明显的季节性特点,秋冬季节的阳性率明显高于春夏季节。 相似文献
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繁殖障碍型H3亚型猪流感病毒的分离与鉴定 总被引：3，自引：0，他引：3
于广东惠州市某猪场采集流产死胎的肺组织、胎衣及鼻棉拭子,病料处理后经SPF鸡胚绒毛尿囊腔接种获得1株有血凝(HA)活性的病毒,通过AGP试验初步确定为猪流感流感病毒;但此病毒的血凝现象不能被抗H1亚型猪流感单因子血清、抗H5亚型猪流感单因子血清、抗H7亚型猪流感单因子血清、抗H9亚型猪流感单因子血清抑制,而能被抗H3亚型猪流感单因子血清抑制;通过H3亚型猪流感病毒RT-PCR分子生物学诊断,最终确定该病毒为H3亚型猪流感病毒.动物回归试验结果显示,攻毒小鼠出现精神萎靡、厌食、嗜睡、被毛松乱、呼吸较急促,攻毒后7 d采集小鼠血清进行检测,HI效价为3log2～4log2;剖检发现病毒性肺炎,且能从病料中再次分离到H3亚型猪流感病毒. 相似文献
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广西猪流感病毒H1N2亚型的血清学调查 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】了解广西猪群中猪流感（SI）的流行情况,为科学防控广西SI提供参考依据。【方法】以猪流感病毒（SIV）HIN2亚型毒株为抗原,采用微量血凝抑制试验（HI）方法,对2009年7月～2011年3月在广西12个市采集的997份猪血清进行SIV的血清学调查。【结果】2009年的H1N2亚型抗体阳性率为33．4％,比2010年和2011年1-3月的高;广西各市的H1N2亚型抗体阳性率为0—83．1％,其中河池和百色两市的H1N2亚型抗体阳性率较高,分别为83．1％和51．1％,崇左市为零,其他市的H1N2亚型抗体阳性为4．0％～32．1％。【结论】广西地区猪群在2009～2011年均受到猪源H1N2亚型不同程度的感染。 相似文献
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为了给猪流感疫苗的研制做准备,试验将从某猪场现地采集疑似猪流感发病猪的鼻拭子样品,经过处理后接种至10~11日龄SPF鸡胚进行盲传,分离到1株具有血凝性的病毒。通过血清学、分子生物学鉴定、电镜观察、动物回归试验等方法对该病毒进行鉴定。结果发现:该病毒可与猪流感病毒H3亚型阳性血清特异性结合;通过分子生物学检测,该分离株出现猪流感病毒H3亚型和N2亚型目的片段;将该分离株液置于电镜下观察可见直径为80~120 nm且具有囊膜和纤突的病毒粒子,符合猪流感病毒粒子形态特征;用纯化后的病毒攻击4~6周龄阴性仔猪,攻毒组仔猪发病率可达80%。由此可见分离获得的病毒为H3N2亚型猪流感病毒。 相似文献
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[目的]了解广西H1N1和H3N2亚型猪流感病毒(SIV)的存在形势及其流行规律,为下一步有效监测和防控猪流感(SI)提供理论依据和原始溯源.[方法]对2009～2013年于广西11个地级市的屠宰场、规模化养猪场和个体养殖户采集的1170份猪血清进行血凝抑制(HI)试验检测,统计欧洲禽源H1N1 (EA-H1N1)亚型和新型人源重组H3N2(Hu-H3N2)亚型4株毒株(LB 144和BB2、NNXD和JGB4)的抗体阳性率,并分析H1N1和H3N2亚型毒株的存在形势及其流行规律.[结果]2009～2013年,EA-H1N1亚型LB144毒株的平均抗体阳性率高达20.68％,且保持稳定,是广西地区主要的流行毒株;Hu-H3N2亚型JGB4毒株从2010年开始流行,且呈逐渐蔓延的趋势,平均抗体阳性率为19.96％.广西北海、南宁、玉林、贺州、桂林、贵港和柳州市受到EA-H1N1和Hu-H3N2亚型毒株多重感染,且感染程度较严重;百色、河池和防城港市的感染程度相对较低.育肥猪最易感染SIV,尤其是BB2和JGB4毒株,其抗体阳性率分别达66.00％和40.00％.EA-H1N1亚型毒株间的交叉感染阳性率(21.52％)略低于Hu-H3N2亚型毒株间的交叉感染阳性率(27.45％),而两株不同亚型毒株交叉感染时以BB2与JGB4毒株的交叉感染阳性率最高(16.23％),3株交叉感染时以BB2、NNXD和JGB4毒株间的交叉感染阳性率最高(11.60％),4株同时交叉感染阳性率也有6.96％.[结论]广西猪群已普遍存在EA-H1N1和Hu-H3N2亚型毒株混合感染的现象,尤其是地处两省边界上的地级市感染更严重,并以育肥猪和保育猪较易感.因此在SI防控工作中,除做好哺乳仔猪和种猪的日常管理外,还应减少保育猪的外来应激,适当调整育肥猪的饲养密度,以减少新型SIV重组毒株的产生. 相似文献
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【目的】建立用于检测禽流感病毒（Avianinfluenzavirus,AIV）且能同时区分H1和H3亚型AIV的方法,为有效防控禽流感（Avianinfluenza,AI）奠定基础。【方法】根据H1亚型、H3亚型AIV-HA基因和M基因的保守核苷酸序列,分别设计3对特异性引物,以含有H1亚型AIV和H3亚型AIV的cDNA为模板,对三重PCR扩增条件进行优化,验证其特异性和敏感性,并对临床样品进行AIV检测。【结果】H1和H3亚型AIV混合模板经三重PCR扩增可获得3条特异性条带,其中302bp为H1亚型HA基因、453bp为M基因、626bp为H3亚型HA基因;含有H1或H3亚型AIV的模板均出现两条特异性条带,大小分别为302和453bp、453和626bp;含有其他亚型AIV的模板仅出现一条特异性条带（453bp）;而其他禽呼吸道疾病病毒均未扩增出任何条带。优化后的三重PCR最低能同时检测出7.00pg的H1亚型AIV、3.62pg的M基因和20.60pg的H3亚型AIV;对100个临床样品进行AIV检测,AIV总阳性率为36%,其中H1亚型阳性率4%、H3亚型阳性率9%、其他亚型阳性率23%。【结论】禽流感病毒H1、H3亚型和M基因三重PCR检测方法具有快速、敏感、特异等特点,适用于AIV的检测及H1和H3亚型AIV的分型检测。 相似文献
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为了评估家禽密切接触人群感染新城疫和禽流感病毒的风险,分别采集21份规模化养禽场和20份从事禽产品加工的屠宰场工作人员血清样品,采用微量中和试验检测人血清样品中新城疫和禽流感(H5和H9亚型)病毒抗体。结果发现,养禽场工作人员新城疫病毒抗体阳性率为33.3%,禽流感(H5和H9亚型)病毒抗体均为阴性;屠宰场工作人员新城疫病毒抗体阳性率为5%,禽流感(H5和H9亚型)病毒抗体均为阴性。结果表明新城疫病毒能够感染人,而目前国内流行的禽流感病毒感染人群的可能性较小。但是,由于禽流感病毒很容易发生变异和持续进化,有必要对家禽密切接触人群进行血清学监测。 相似文献
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H3亚型禽流感具有很强的宿主适应性,且发生继发感染或混合感染时危害较大,随着其感染性和毒力不断增强,加强H3亚型禽流感的流行病学调查具有重要的公共卫生学意义。为掌握江苏地区H3亚型禽流感的发生及流行情况提供依据,针对江苏部分地区疑似H3亚型禽流感发病情况,在盐城市和南通市两地各选择1个具有一定规模,且经临床诊断发现疑似H3亚型禽流感发病的蛋鸡养殖场为调查点,对其正常鸡群血清样本的H5、H7、H9、H3亚型禽流感病毒抗体滴度进行检测。结果表明：盐城市调查点正常鸡群的H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体滴度平均值分别为6.9、7.0、7.2,南通市调查点正常鸡群的同类型抗体滴度平均值分别为9.2、9.2、9.0,二者正常鸡群H5、H7、H9亚型禽流感病毒的平均抗体水平较正常。在无疫苗免疫情况下,两个蛋鸡养殖场正常鸡群的H3亚型禽流感病毒抗体滴度平均值分别为4.5、4.3,且变异系数较大,分别为39.9%、46.8%。结合对病死鸡的临床观察及解剖结果表明,两个蛋鸡养殖场可能存在H3亚型禽流感病毒感染并导致蛋鸡发病死亡。 相似文献
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【目的】探讨H9N2亚型流感病毒在野鸟中的存在与传播,为广西流感疫情动态监测和防控及人流感预防监测提供重要依据。【方法】采集广西野鸟肺脏组织,将病料接种于9~11日龄SPF鸡胚尿囊腔进行分离培养,血清学试验鉴定HA和NA亚型,并克隆扩增其HA和NA基因。【结果】该分离株能被H9亚型阳性血清抑制,神经氨酸酶抑制（NI）试验结果将其鉴定为N2亚型,判断该病毒属于H9N2亚型流感病毒,命名为A/wildbird/Guangxi/H2/07,对HA和NA基因进行序列分析,发现与流感病毒H9亚型和N2亚型同源性最高,分别达到82.4%~99.0%和83.1%~99.9%。【结论】H9N2亚型流感病毒已在广西野鸟中存在,该结论为广西流感疫情动态监测和防控提供了重要依据。 相似文献
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【目的】了解H1N1猪流感病毒广西分离株的分子特征,为广西猪流感疫情监控提供参考依据。【方法】采用RT-PCR对2011年分离获得的H1N1猪流感病毒广西分离株（A/swine/Guangxi/1/2011）的HA基因进行扩增,然后利用DNASTAR分析软件对测序基因片段进行整个阅读框架的核苷酸序列及其推导氨基酸序列同源性比对分析,并用MEGA4.0绘制遗传进化树。【结果】广西分离株HA基因长1701bp,编码566个氨基酸,核苷酸序列与经典SIV的同源性为88.0%~99.6%,与季节性H1N1人流感病毒的同源性为76.3%~77.3%,与欧洲类禽SIV分离株的同源性为72.9%~75.4%,与2009甲型H1N1流感病毒的同源性为99.2%~99.6%;从核苷酸遗传进化树可知,广西分离株与类禽H1N1流感病毒和人H1N1流感病毒分离株的亲缘关系较远,而与2009甲型H1N1流感病毒分离株的亲缘关系最近。广西分离毒株HA基因的裂解位点序列为IPSIQSR↓G,具有典型低致病性流感病毒的分子生物学特征;共有8个糖基化位点,其中6个位于HAl区,两个位于HA2区;广西分离株HA蛋白RBS位点的氨基酸同时具有人和猪流感病毒的特点。【结论】广西分离株（A/swine/Guangxi/1/2011）属于2009甲型H1N1流感病毒。 相似文献
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[目的]了解广西猪源H9N2亚型流感病毒的来源及变异情况,为有效防控广西猪源H9N2亚型流感病毒奠定基础.[方法]运用RT-PCR对广西分离株A/SW/GX/S11/05( H9N2)进行全基因组扩增,并克隆测序及对比分析.[结果]扩增获得的HA、NA、NP、M、NS、PB1、PB2和PA基因片段长度分别为1683、1401、1497、1027、890、2233、2280和2151 bp,其推导氨基酸分别为561、467、499、349、338、744、760和717 aa.经过序列分析,发现各基因片段的核苷酸及其推导氨基酸与A/Bird/GX/62/05株的同源性最高,分别为96.2%~ 100.0%和98.5%~99.6%;系统进化分析也表明A/SW/GX/S11/05株与A/Bird/GX/62/05株的亲缘关系最近.[结论]广西猪源H9N2亚型流感病毒属于欧亚谱系的北京亚系,且在一定时间内不同宿主间均有感染,在今后的流感病毒防治工作中,跨种属传播是一个不可忽视的问题. 相似文献
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Development of a cELISA for effective detection of the antibody against H7 subtype of avian influenza virus 
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下载免费PDF全文 WANG Cong-cong WANG Si-wen ZHANG Ying SHI Jian-zhong YIN Xin LI Cheng-jun WANG Xiu-rong 《农业科学学报》2022,21(1):199-207
H7 avian influenza viruses (AIVs) normally circulated among birds before. From 1996 to 2012, human infections with H7 AIVs (H7N2, H7N3, and H7N7) were reported in Canada, Italy, Mexico, the Netherlands, the United Kingdom and the USA. Until March 2013, human infections with H7N9 AIVs were reported in China. Since then, H7N9 AIVs have continued to circulate in both humans and birds. Therefore, the detection of antibodies against the H7 subtype of AIVs has become an important topic. In this study, a competitive enzyme-linked immunosorbent assay (cELISA) method for the detection of antibody against H7 AIVs was established. The optimal concentration of antigen coating was 5 μg mL–1, serum dilution was 1/10, and enzyme-labeled antibody was 1/3 000. To determine the cut-off value of cELISA, percent inhibition (PI) was determined by using receiver operating characteristic (ROC) curve analysis in 178 AIVs negative samples and 368 AIVs positive serum samples (n=546). When PI was set at 40%, the specificity and sensitivity of cELISA were 99.4 and 98.9%, respectively. This method could detect the antibodies against H7Nx (N1–N4, N7–N9) AIVs, and showed no reaction with AIVs of H1–H6 and H8–H15 subtypes or common avian viruses such as Newcastle disease virus (NDV), Infectious bronchitis virus (IBV) and Infectious bursal disease virus (IBDV), exhibiting good specificity. This method showed a coincidence rate of 98.56% with hemagglutinin inhibition (HI) test. And the repeatability experiment revealed that the coefficients of variation (CV) of intra- and inter-batch repetition were all less than 12%. The data indicated that the cELISA antibody-detection method established in this study provided a simple and accurate technical support for the detection of a large number of antibody samples of H7-AIV. 相似文献
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H9亚型AIV型特异性电化学发光免疫检测方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
【目的】H9亚型禽流感是重要的人兽共患性传染病,该亚型病毒为H7N9亚型和H10N8亚型流感病毒提供了6个内部基因（PB2、PB1、PA、NP、M、NS）,并且一直处于动态重组过程中。因此,建立针对H9亚型禽流感的型特异性电化学发光免疫的高通量快速检测方法,加强H9亚型流感的监测,具有重要意义。【方法】用钌联吡啶标记H9亚型AIV的单克隆抗体,用MPI-E型电致化学发光分析系统评价钌标单抗标记效率;用生物素标记H9亚型AIV的多克隆抗体,HABA法检测抗体生物素化的效率;待测抗原与钌标单抗作用1 h后,将此抗原-抗体复合物与通过生物素-链霉亲和素系统固定在磁微球表面的多克隆抗体反应,最后加入反应底物三丙胺后即可在电化学分析系统进行发光检测。优化生物素化多抗和钌标单抗最佳工作浓度,确定临界值和反应谱,对所建立的方法进行敏感性、特异性和重复性试验。攻毒后3 d和5 d,采集攻毒组和空白对照组鸡只的88份咽拭子和肛拭子,分别用电化学发光免疫检测方法和鸡胚病毒分离法进行检测和比较。【结果】钌标抗H9亚型AIV单克隆抗体的标记效率为每个单抗IgG分子上结合21个Ru2+,且间接免疫荧光方法证明其仍具有生物活性;生物素化兔抗H9N2亚型AIV多克隆抗体的标记效率为每个IgG分子上结合了6个生物素分子,且Western blotting试验证明其仍保持生物活性;该方法的检测临界值为28.3,可疑区间为23.4-33.2;阴性和阳性变异系数均小于10%;检测限为5×104EID50,能够特异性地检测H9亚型AIV,不与其他亚型流感病毒（H1、H3、H4、H5和H6亚型）和其他类型的禽源病毒（NDV、IBV和IBDV）反应。3 h内即可完成检测,与鸡胚病毒分离法的符合率为86.4%。【结论】所建立的H9亚型AIV型特异性电化学发光免疫检测方法可以用于临床样品检测,对H9亚型禽流感的监测和防控具有重要意义。 相似文献