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《中国兽医杂志》2017,(12)
为了建立同时检测肉制品中猪、鸡、鸭3种动物源性成分的多重Taqman-LNA荧光PCR,给打击肉制品掺假提供技术手段。针对动物线粒体基因组的保守序列,设计特异性引物和Taqman-LNA探针,建立同时检测肉制品中猪、鸡、鸭源性成分的多重荧光PCR方法,并应用于市售肉制品的检测。建立的多重Taqman-LNA荧光PCR方法可同时检测肉制品中上述动物源性成分,与牛、羊、驴、兔、鹅等动物源性成分无交叉反应,其检测限均达到肉含量的0.001%。对170份市售肉制品检测发现,有42份样品检出与标签标示成分不符的肉种成分,样品不合格率为24.7%。本研究建立的多重Taqman-LNA荧光PCR方法可同时检测肉制品中猪、鸡、鸭3种动物源性成分,具有特异、快速、经济、高效等优点,可适应于肉制品中多种肉源性成分的高通量检测。 相似文献
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二重实时荧光PCR方法检测山羊和绵羊源性成分 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究根据山羊、绵羊线粒体中的cyt b基因序列,利用ABI primer express 3.0和DNAStar软件设计了特异性引物和探针.通过对引物和探针浓度、Mg2 浓度、dNTP浓度和Taq酶用量以及反应条件等因素的优化筛选,建立了能同时鉴别山羊和绵羊源性成分的二重实时荧光PCR方法.所建方法灵敏性高、特异性好,对17种不同源性的动物DNA和50份不同来源的样品DNA进行实时荧光PCR检测,结果表明引物与探针能特异地鉴别检测出山羊和绵羊源性成分.实验结果表明该检测方法适用于饲料、肉制品、奶制品和生皮等动物源性产品的山羊和绵羊源性成分鉴定. 相似文献
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肉类食品真伪鉴定是目前食品安全检测领域的重点研究内容之一。为准确定量检测食品中的鸡源性成分,根据现行检验检疫标准(SN/T 2727—2010)合成引物及探针,并拓展了特异性、灵敏度、检出限和定量分析等试验。结果显示:特异性试验中,仅鸡成分检测出现特异性扩增,其他动物组织均未出现特异性扩增;梯度稀释鸡源性DNA模板原液进行灵敏度评价,发现引物和探针灵敏度较高,可以检测到100 fg级的鸡组分模板DNA,且建立的标准曲线具有良好的线性关系,R2达0.99以上,定量准确;加工制品中的验证试验结果显示,合成的引物及探针具有良好的适用性和定量检测能力。以上研究结果均说明,此引物和探针适用于市场食品中鸡源性成分的定性、定量检测。本研究为今后TaqMan实时荧光PCR法不同动物源性引物和探针的自主研发奠定了基础。 相似文献
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为快速鉴别牛羊肉中是否掺杂了鸡肉、鸭肉等其他肉类,基于Genie II等温扩增荧光检测系统,建立了检测鸡鸭源性成分的荧光LAMP检测方法。同时,优化了反应体系和条件,进行了特异性和灵敏度试验,以及市场检测应用。结果显示:鸡鸭源性成分荧光LAMP检测方法具有很强的特异性,除了相对应的动物源性成分外,其他13种动物源性成分均呈阴性;该方法检测鸡、鸭源性成分的灵敏度分别为0.88、3.32 pg/μL,均高于普通PCR 10倍;加入双加速引物,该方法的反应时间仅为15~20 min,10 min左右时就可进行实时初判;市场应用检测结果与普通PCR的符合率为100%。结果表明,本方法特异、灵敏,所需时间短,可用于鸡鸭源性成分的市场快速检测。 相似文献
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SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测鉴定狮制品 总被引：1，自引：0，他引：1
为建立SYBR Green I实时荧光PCR检测鉴定狮（Panthera Leo）制品的方法,本文在豹属动物线粒体细胞色素b基因上设计狮特异性引物,建立并优化了SYBR Green I实时荧光PCR检测鉴定体系,采用17种血液、组织和骨粉类样品的DNA,通过扩增曲线和融解曲线分析检测的特异性和灵敏度,并用狮肉粉和牛肉骨粉系列百分比混合物进行抗干扰能力分析。结果显示,狮血液和组织DNA样品均出现特异性的实时扩增曲线,平均熔解温度在84±0.2℃。虎、豹、熊等14种哺乳动物DNA样本的检测结果均为阴性。灵敏度检测显示,本实验所建立的SYBRGreen I实时荧光PCR方法能够检测出10 pg/μL的狮组分DNA。抗干扰能力显示在骨粉中狮的成分最低检出含量为0.1%。这些结果说明,本文建立的SYBR Green I实时定量PCR方法具有方便、经济、灵敏度高和重复好等特性,可用于狮源性制品的检测鉴定。 相似文献
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《中国畜牧杂志》2017,(1)
实验旨在建立快速检测驴、马和狐狸源性成分的方法。以驴、马和狐狸的线粒体保守序列16S r RNA基因为靶基因,设计通用引物和以不同荧光素标记的特异Taq Man探针,构建与通用引物共用的阳性扩增内标(Internal Amplification Control,IAC)作为PCR监控反应体系。通过优化PCR反应体系和条件,建立能同时检测驴、马和狐狸源性成分的四重实时荧光PCR方法。结果表明:利用驴、马、狐狸、牛、猪、羊、水貂、狗、鸡、鸭、大豆、小麦、玉米等物种检测没有交叉反应,证明该方法特异性高,准确性好。该方法模板DNA检测灵敏度为0.01 ng。本研究建立的驴、马和狐狸源性四重荧光实时PCR检测体系灵敏度高、特异性强,能有效鉴别动物产品中驴、马和狐狸的源性成分,也可用作相关动物皮张真伪的鉴别方法。 相似文献
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为了快速准确地检测饲料中牛、羊源性成分,试验采用实时荧光PCR方法,分别以牛、羊各自物种特异性基因为研究对象,设计实时荧光PCR扩增的特异性引物及探针,建立饲料中牛、羊源性成分的实时荧光PCR检测方法。结果表明:该检测方法特异性强、灵敏度高(达到0. 01%),可以作为饲料中牛、羊源性成分检测的常规方法。通过对15种市售饲料样品进行检验,结果 2种饲料骨粉未标明含有羊源性成分,但检出;1种饲料骨粉标签中未标明成分,但检出牛源性成分,证实该方法操作简便快捷,可以快速、准确、大批量地开展饲料的日常检测工作。 相似文献
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为鉴定和区分饲料及动物产品中牛、山羊、绵羊源性成分,根据线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)种间保守序列,设计合成了3对特异性引物与TaqMan探针,通过对荧光PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了三重荧光PCR方法,在同一个荧光PCR反应中完成3种动物源性成分的检测。用该方法对16种不同源性的动物DNA进行检测,结果表明能特异地鉴别检测出牛、山羊和绵羊源性成分,且敏感性比现行国标PCR法高100倍。该方法适用于饲料、肉制品、奶制品等动物源性产品的检测。 相似文献
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Taqman-LNA荧光PCR快速检测肉制品中马源性成分的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]建立快速检测肉制品中马源性成分的Taqman-LNA荧光PCR方法。[方法]基于马的种属保守序列,设计特异性引物和Taqman-LNA探针,建立可快速检测肉制品中马源性成分的Taqman-LNA荧光PCR检测方法。通过对特异性、灵敏度、重复性的检测,对建立的方法进行评价。[结果]建立的Taqman-LNA荧光PCR方法灵敏,可检测到马肉DNA最低限为1.4 pg;特异,与猪、牛、羊、鹿、驴、兔、鸡、鸭、鹅、虾无非特异性反应;可重复,批内和批间的变异系数均小于2%;准确,应用该法检测人为掺入马肉的肉制品,检测结果与预期相符。[结论]本研究建立的方法具有灵敏度高,特异性强,重复性好等优点,适合于肉制品中马源性成分检测。 相似文献
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实时荧光定量PCR检测畜禽肉制品中鸭源性成分 总被引：3，自引：0，他引：3
根据鸭mtDNA COX基因上的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立实时荧光定量PCR用于检测畜禽肉制品中的鸭源性成分。结果表明,建立的方法特异性强,与鹅、鸡、羊、牛等15种动物DNA无非特异性扩增;灵敏度高,可检测1.0pg/μL鸭源DNA的存在;重复性好,同DNA浓度所测得Ct值的变异系数均小于3%;应用该法对模拟混合样品进行检测,结果与预期相符,且常见肉类DNA的存在并不影响该法对鸭源性成分检测的灵敏度。说明本试验建立的鸭源性成分实时荧光定量PCR法特异、敏感、稳定,可快速准确检测畜禽肉制品中含有的鸭源性成分。 相似文献
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根据GenBank中的鹌鹑线粒体DNA(mtDNA)12S RNA基因保守序列,用Primer5.0软件设计了1对针对鹌鹑的特异性扩增引物,建立了一种检测鹌鹑动物源性成分的SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR方法.通过SYBRGreen Ⅰ实时荧光PCR反应,同时进行溶解曲线和Tm值分析.结果表明:只有鹌鹑样品在Tm值为82℃下有特异的溶解曲线峰,而参考物种鸽子、鸡、鸭、鹅、鸵鸟、鹧鸪、牛、羊、猪、马、驴、鱼和空白对照,则无特异的溶解曲线峰,说明该引物只对鹌鹑有特异性.测序结果表明,鹌鹑组织SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR产物的核苷酸序列与GenBank中检索到的相应序列相吻合;该方法的检测灵敏度为0.001%. 相似文献
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目的建立一种能同时检测饲料及动物性食品中的山羊和绵羊源性成分的双重荧光PCR方法,应用于动物源性饲料及动物性食品的快速检验.方法分别根据山羊、绵羊线粒体种间保守序列,设计合成针对山羊和绵羊的特异性引物及TaqMan探针,通过荧光PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立可同时检测饲料及动物性食品中的山羊和绵羊源性成分的双重荧光PCR方法.结果本研究所建立的双重荧光PCR检测方法可同时快速检测饲料及动物性食品中的山羊和绵羊源性成分,应用本方法检测山羊肉和绵羊肉模板的检出限均为10-5,与相应的单重荧光PCR方法的检出限一致,比国标法(GB/T20190-2006)的灵敏性高100倍.结论本研究建立的双重荧光PCR检测方法特异性好、敏感性强,适用于饲料、肉制品、乳制品等动物源性食品的快速检测 相似文献
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目的:建立鸡胚致死孤儿病毒CELO的荧光定量PCR检测方法,实现该病毒在鸡胚及禽源性生物制品中的快速检测.方法根据CELO L5纤突1序列设计引物和探针,建立荧光定量PCR检测方法,并对其线性、特异性、精密性、灵敏度进行考察.运用建立的方法对40份SPF鸡胚尿囊液和16株流感疫苗主种子批毒种进行CELO检测.结果:建立的荧光定量PCR其最佳线性范围为1x109~1x104拷贝/μl,R2值达0.99以上,特异性良好,与其他种属的腺病毒及流感病毒间均无交叉反应,灵敏度为102拷贝/μl;荧光定量PCR方法检测40份SPF鸡胚尿囊液和16株流感毒种结果为阴性.结论:本研究所建立的鸡胚致死孤儿病毒荧光定量PCR检测方法,特异性好,敏感性高,为鸡胚及禽源性生物制品中的快速检测提供了技术支撑. 相似文献
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动物产品中猪源性和牛源性成分双重荧光PCR检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]建立双重荧光PCR法,检测动物产品中猪、牛源性成分。[方法]分别针对猪、牛线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）种间保守基因,设计特异性引物与探针,通过对反应体系和反应条件的优化筛选,建立了双重荧光PCR方法,在同一个荧光PCR反应中完成2种动物源性成分的检测。并对该方法的特异性、敏感性进行评估。[结果]对16种不同的动物DNA进行检测．仅猪、牛源性成分收集到相应的典型的S型扩增曲线,对猪、牛二联模板的检测,可同时收集到相应模板的扩增曲线．其余14种动物源性成分未发现扩增曲线。双重荧光PCR对猪肉、牛肉模板的最低检出限均为10^-5,与相应的单重荧光PCR方法的检出限一致。[结论]该方法特异性强,敏感性高,适用于肉制品、奶制品、饲料等动物源性产品的检测。 相似文献
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《中国畜牧杂志》2010,(17)
根据GenBank中的鹌鹑线粒体DNA(mtDNA)12S RNA基因保守序列,用Primer5.0软件设计了1对针对鹌鹑的特异性扩增引物,建立了一种检测鹌鹑动物源性成分的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法。通过SYBRGreenⅠ实时荧光PCR反应,同时进行溶解曲线和Tm值分析。结果表明:只有鹌鹑样品在Tm值为82℃下有特异的溶解曲线峰,而参考物种鸽子、鸡、鸭、鹅、鸵鸟、鹧鸪、牛、羊、猪、马、驴、鱼和空白对照,则无特异的溶解曲线峰,说明该引物只对鹌鹑有特异性。测序结果表明,鹌鹑组织SYBR GreenⅠ实时荧光PCR产物的核苷酸序列与GenBank中检索到的相应序列相吻合;该方法的检测灵敏度为0.001%。 相似文献
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根据线粒体基因的特异性鉴别检测饲料中的动物源性成分 总被引：8，自引：1，他引：8
为了防止海绵状脑病疫区和痒病疫区的反刍动物源性饲料入手动物食物链，继而进入人类消费的食物链，因而，非常用必要对贸易往来中的肉骨粉品种来源进行鉴定检测。我们运用聚合酶链反应技术（Polymerase Chain Reaction,PCR），以检测不同种动物特异性线粒体基因片段为目标，分别建立了从动物源性饲料中鉴别检测猪、鸡、马成分的方法。该方法具有灵敏度高、快速和特异性强的优点，可作为动物源性饲料中猪、鸡、马源性成份鉴别检测的常规方法之一。 相似文献