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《中国家禽》2021,(8)
为构建鸡RAC1基因真核表达载体并观察该载体是否在鸡卵泡颗粒细胞中表达,试验采用PAS方法合成RAC1基因,先将其克隆至pUC57-simple载体中,然后再亚克隆至表达载体pYr-adshuttle-4上,将重组载体瞬时转染至鸡卵泡颗粒细胞中,通过荧光定量PCR和Western Blot进行验证。结果表明,RAC1基因正确地插入到了载体pYr-adshuttle-4的多克隆位点,且重组载体转染成功。试验成功构建了鸡源pYr-adshuttle-4-RAC1真核表达载体,并成功将其转入到鸡卵泡颗粒细胞中。该载体的构建为进一步研究RAC1的生物学功能提供了重要工具。 相似文献
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哺乳动物STE20样激酶1(Mammalian Sterile 20-like Kinase 1,MST1)和Yes相关蛋白1(Yes AssociatedProtein1,YAP1)作为Hippo信号通路的主要成员，在哺乳动物胚胎发育、细胞增殖与凋亡、调节器官体积以及维持内环境的稳态等过程中发挥生理学效应。为探讨MST1和YAP1对牦牛卵泡发育产生的影响，本实验采集健康牦牛的卵巢，按照卵泡直径大小将其分为小卵泡（2～4 mm）、中卵泡（4～6 mm）、大卵泡（6～8 mm）和超大卵泡（>8 mm），采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western Blotting、免疫组织化学技术，对不同大小卵泡中MST1基因和YAP1基因及其蛋白表达情况进行分析研究。结果显示，MST1和YAP1基因及其蛋白在牦牛各个发育阶段卵泡中均有表达，其表达量在不同大小卵泡中存在一定差异。尤其处于优势化选择阶段时中卵泡的表达量显著高于其他3个期。YAP1在牦牛各发育阶段卵泡中的表达变化与MST1基本一致。从表达部位来看，MST1和YAP1蛋白主要分布于卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞中。结果表明，MST... 相似文献
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《甘肃畜牧兽医》2021,51(5)
旨在探索CYP19A1在牦牛卵泡发育过程及不同成熟阶段卵母细胞中的表达水平。采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测CYP19A1在牦牛不同级别卵泡(≤3 mm、3～5 mm、5～8 mm及≥8 mm)和卵丘—卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complex,COCs)体外成熟的不同阶段(成熟0 h、12 h、18 h及24 h)中的表达水平,免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)检测CYP19A1蛋白在COCs中的表达定位。结果显示:CYP19A1基因在不同级别的卵泡中均有表达,在卵泡发育早期表达量最高,随卵泡发育呈低水平表达;CYP19A1基因在COCs中的相对表达量显示,未成熟(0 h)COCs的表达量最低,成熟18 h的COCs表达水平达到最高值,之后呈下降趋势。通过免疫荧光技术发现COCs中CYP19A1蛋白的表达主要集中在卵丘细胞上。推测CYP19A1在卵巢颗粒细胞中的表达有助于卵泡发育和卵母细胞成熟雌二醇(Estradiol,E_2)的分泌,对卵泡和卵母细胞早期发育有积极的调控作用,为进一步探索CYP19A1在牦牛雌性生殖中的作用机制提供了理论支撑。 相似文献
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《中国家禽》2020,(10)
为探讨矮小型品系S3系和苏禽3号不同等级卵泡的膜层和颗粒层中生长分化因子9(Growth differentiation factor9,GDF9)的表达差异和表达模式,分别于24和43周龄采集两个品系母鸡的大白卵泡(Large white follicle,LWF,4～6 mm)、小黄卵泡(Small yellow follicle,SYF,6～8 mm)以及等级卵泡F_1、F_2、F_3、F_4、F_5的膜层和颗粒层,每个组织5个重复;采取荧光定量PCR法检测两个品种各级卵泡中GDF9 mRNA的表达量。结果显示:GDF9 mRNA在2个鸡种卵泡膜层和颗粒层的表达均呈"低-高-低"趋势,表达高峰在SYF期,且明显高于其他卵泡期(P0.05),在F_1和F_2期几乎不表达;同一等级卵泡的膜层和颗粒层在不同时期表达模式十分相似,均为24周龄高于43周龄(P0.05);不同品种鸡卵泡颗粒层和膜层GDF9 mRNA的表达规律为苏禽3号略高于S3系(P0.05)。研究结果提示,GDF9基因在鸡卵泡中的表达存在组织、时间及品种差异,GDF9主要影响鸡的分级前卵泡,其高表达可能对维持大量卵泡生长有重要作用。 相似文献
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《中国畜牧杂志》2021,(5)
本研究旨在探究Smad9在牛卵巢卵泡中的表达模式,为研究Smad9的功能奠定基础。从屠宰场获取牛卵巢,分离得到小卵泡(2 mm≤直径≤4 mm)、中卵泡(4 mm直径8 mm)、大卵泡(直径≥8 mm),用免疫组织化学技术对不同直径卵泡的Smad9蛋白进行定位分析;通过机械分离法分离卵泡颗粒细胞,用qPCR和Westernblotting技术检测Smad9在小卵泡、中卵泡、大卵泡颗粒细胞中的相对表达量。结果显示:在牛的卵泡中,Smad9在颗粒细胞和膜细胞层中表达;小卵泡和中卵泡颗粒细胞中Smad9mRNA转录本相对丰度低于大卵泡颗粒细胞(P0.01),而中卵泡颗粒细胞内Smad9 mRNA转录本相对丰度低于小卵泡(P0.05);中卵泡和小卵泡颗粒细胞中Smad9蛋白的表达量低于大卵泡(P0.01),中卵泡颗粒细胞中Smad9蛋白表达量是小卵泡的0.9倍(P0.05)。综上,Smad9主要在牛卵泡颗粒细胞层中表达,且大卵泡表达量极显著高于小卵泡和中卵泡。 相似文献
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《甘肃畜牧兽医》2021,51(4)
目的:本研究旨在探索CYP11A1在牦牛卵泡发育过程及不同成熟阶段卵母细胞中的表达情况。方法:采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)检测CYP11A1在不同级别卵泡(0～3 mm、3～5 mm、5～8 mm及大于8 mm)和不同阶段(未成熟、成熟12 h、成熟18 h及成熟24 h)体外成熟卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complex,COCs)中的表达定位。结果:CYP11A1基因在不同级别的卵泡中均有表达,卵泡大小为3～5 mm时,表达量最高,随卵泡不断扩张呈低水平表达,卵泡大小大于8 mm时,基因的表达量降为最低;在未成熟的COCs中相对表达量最低,成熟12 h的COCs中表达水平达到最高值,之后又呈现先下降后升高的趋势。IF检测结果显示CYP11A1在卵丘、卵母细胞中均有表达。结论:CYP11A1参与牦牛卵泡的扩张和卵母细胞的成熟过程,该结果有助于进一步研究CYP11A1在牦牛雌性生殖中的作用机制。 相似文献
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《中国家禽》2016,(13)
研究旨在分析YY1和EED基因与鸡性成熟启动的关联。测定5~17周龄文昌鸡母鸡卵巢重量、最大卵泡直径、输卵管长度及冠大小的发育性变化,并采用q RT-PCR检测了YY1和EED基因在性成熟启动前后下丘脑中的表达。结果表明,在发育早期,文昌鸡性腺组织发育缓慢,卵泡保持原始状态。12周龄后,性腺组织进入快速发育期,13周龄母鸡的卵巢重量和输卵管长度与12周龄测量值相比分别增加了125%和120%,同时出现等级前小白卵泡或大白卵泡,基于此确定了12~13周龄为文昌鸡母鸡的性成熟启动关键时机。q RT-PCR检测表明YY1和EED基因在文昌鸡性成熟启动时下丘脑组织中的表达水平显著降低(P0.01),15周龄后又恢复至较高水平。结果提示YY1和EED基因参与了鸡性成熟启动调节。 相似文献
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本研究旨在探究Fox O1在绵羊卵巢卵泡的表达模式。屠宰场取卵巢获得卵泡,分为小卵泡(直径≤3 mm)、中卵泡(3 mm<直径<5 mm)、大卵泡(直径≥5 mm)3组。利用免疫组化技术对不同直径卵泡的FoxO1进行定位分析,通过机械分离法分离卵泡颗粒细胞,qRT-PCR和Western blotting技术检测FoxO1在小、中、大卵泡颗粒细胞的表达量。结果显示:在绵羊卵泡中,FoxO1表达于颗粒细胞层;中卵泡的FoxO1 mRNA表达量高于小卵泡和大卵泡(P<0.01),小卵泡FoxO1mRNA表达量高于大卵泡(P<0.01);FoxO1蛋白在大卵泡的表达量低于小卵泡和中卵泡(P<0.01),但小卵泡和中卵泡表达量差异不显著。综上表明,FoxO1在绵羊卵泡颗粒细胞层表达,且在大卵泡中的表达量极显著低于小卵泡和中卵泡。 相似文献
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为研究促性腺激素抑制激素(Gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH)基因表达与鹅卵泡发育间的关系,对鹅GnIH基因的CDS区序列进行了克隆与分析,并采用荧光定量PCR检测了该基因在产蛋高峰期鹅的不同大小卵泡中的表达量.序列分析结果表明,所获得的鹅GnIH基因CDS区长471 bp,编码157个氨基酸,与已知的其它鸟类GnIH相似性达87％.鹅GnIH前体包括3个“LPLRF”,具有典型的“LPXRF-酰胺”基序.荧光定量结果表明,鹅GnIH在所有不同大小的卵泡中均有表达,其表达量在卵泡发育过程中呈现规律性变化,总趋势是先增高后降低,且在直径4～5 mm的卵泡中表达量最高.研究结果显示,鹅卵泡GnIH基因的表达与卵泡选择性发育有关,且该选择过程可能发生在直径为4～5mm的卵泡.这一研究可为探讨季节性繁殖禽类卵泡发育的调控机理奠定基础. 相似文献
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《中国家禽》2021,(6)
为探明不同产蛋阶段鹅等级前卵泡中FOXO3基因与凋亡和自噬相关基因的mRNA表达情况,采用荧光定量PCR方法检测开产前、产蛋初期和产蛋高峰期鹅等级前卵泡中FOXO3基因及Bcl-2、Bax、Caspase3、Fas、Fasl、LC3、Beclin1等凋亡和自噬相关基因mRNA的表达情况。结果显示:凋亡和自噬相关基因在鹅产蛋周期不同阶段等级前卵泡中均有表达;产蛋高峰期FOXO3、Bcl2、Bax、Caspase3、Fas和Fasl的mRNA表达量随卵泡直径变大呈增加趋势,LC3和Beclin1的表达量随卵泡直径变大呈减少趋势;产蛋初期各基因的表达变化不一致。由此可见,鹅等级前卵泡中FOXO3基因的表达随着卵泡的发育而增加,且其表达变化趋势与凋亡相关基因基本一致,但与自噬相关基因的变化趋势相反,推测FOXO3基因可能与鹅卵泡颗粒细胞的凋亡和自噬有一定关联。 相似文献
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《畜牧与兽医》2017,(11):5-9
为研究精胺、亚精胺和腐胺对鹅等级前卵泡发育的作用,通过荧光定量PCR对其合成代谢关键酶亚精胺合成酶(spermidine synthase,SRM),精胺合成酶(spermine synthas,SMS)和精胺氧化酶(spermine oxidase,SMOX)基因mRNA在鹅等级前卵泡中的表达情况进行检测分析。结果发现:SMS,SRM和SMOX基因mRNA在鹅等级前卵泡中均有表达,通过差异分析发现SMS基因mRNA在PE等级卵泡中的表达量最高,且表达量显著高于其他4个等级卵泡(P0.05);而在SY,L,M和S这4个等级卵泡中表达量差异不显著(P0.05)。SRM基因mRNA在PE和L等级卵泡中的表达量较高,差异不显著(P0.05),但显著高于其他3个等级卵泡(P0.05);而在SY,M和S等级卵泡中SRM基因mRNA的表达量差异不显著(P0.05)。SMOX基因mRNA在5个等级卵泡中表达差异显著(P0.05)。 相似文献
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《中国畜牧杂志》2019,(4)
本实验旨在探究circRNA在猪卵泡发育过程中的作用,通过生物信息学分析预测其可能的调控机制,为进一步探索circRNA对卵泡发育的调控机制奠定基础。采用RNA-Seq技术对卵泡中差异性表达的circRNA进行筛选,用Real-time PCR进行组织表达谱分析,并分析其在梅山猪和杜洛克猪卵泡中的表达情况。结果表明:circ0001651在肌肉、脂肪、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、卵巢、输卵管、子宫、子宫角、垂体、下丘脑中均有不同程度表达,其中在下丘脑、垂体、输卵管、卵巢表达量相对较高;circ0001651在梅山猪M2卵泡(M2卵泡直径:5.1～7.0 mm)中的表达量极显著高于杜洛克猪(P <0.01),在杜洛克猪M1卵泡(M1卵泡直径:3.1～5.0 mm)中的表达量极显著高于梅山猪(P<0.01);其潜在靶基因CCR2、EGFL7、TNFRSF12A、CFL1、EGR1、GADD45G、SLIT2等与猪的卵泡发育相关。生物信息学分析显示,circ0001651部分靶标基因参与细胞周期、细胞增殖凋亡及卵巢发育等相关信号通路,提示其可能通过对靶基因的调控作用间接参与卵泡发育过程。 相似文献
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《中国畜牧杂志》2018,(12)
为探讨FAR1在不同等级卵泡和不同就巢时期卵泡中的表达规律,实验通过RT-PCR、RACE技术克隆FAR1基因mRNA序列,并用RT-qPCR检测浙东白鹅不同等级卵泡以及不同就巢时期卵泡的FAR1表达。结果表明:FAR1 mRNA包含83 bp的5'UTR,1 557 bp的开放阅读框(ORF)和229 bp的3'UTR,共编码518个氨基酸;系统进化树分析显示,浙东白鹅与鸭、鸡三者聚为一类;RT-qPCR检测显示,等级卵泡中FAR1表达量显著高于等级前卵泡(P0.05),但F4、F5等级卵泡低于卵巢组织表达量,产蛋期FAR1表达量显著高于就巢期(P0.05)。因此推测,FAR1基因与鹅生殖调控密切相关,不仅参与了鹅卵泡发育,且在产蛋期高表达。 相似文献
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旨在基于生物信息学方法分析太行鸡卵泡抑素基因（follistatin，FST），并研究其在不同组织及卵泡不同发育时期表达差异，解析FST对太行鸡产蛋性能的影响。本研究使用RT-PCR对43周龄健康太行鸡FST基因编码区序列进行克隆和测序，运用生物信息学软件对其功能结构进行预测，荧光定量PCR技术对43周龄健康麻羽太行鸡FST在不同组织及不同发育时期卵泡中的表达差异进行分析，每组设3个重复，进行3次平行试验。结果显示，太行鸡FST基因编码区为1 032 bp，编码343个氨基酸，太行鸡FST蛋白与日原鸡同源性最高（100.0%），存在Sec信号肽，成熟蛋白具有FOLN和KAZAL_FS 2个保守结构域。该蛋白为亲水蛋白，蛋白分子式为C1619H2567N459O520S44，分子量为38.192 6 ku，理论等电点为5.59，其中含量最高的是Cys （C），为10.50%；蛋白质二级结构含有α-螺旋、延伸链、β转角、无规卷曲，占比分别为16.33%、16.62%、5.25%、61.81%。FST基因在不同组织中均有表达，在肝中表达量最高。FST基因在各级卵泡表达量存在差异，其中，在大白卵泡中表达量最高（P<0.01），在卵泡选择前后表达量存在1.6倍表达差异。上述结果为研究太行鸡FST基因结构和功能提供了重要的基础数据，也为进一步挖掘太行鸡产蛋性能候选高产基因提供了参考。 相似文献
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旨在探讨ZP3基因在海兰褐蛋鸡中的表达特性，为后期研究ZP3基因在蛋鸡卵泡发育中的作用提供理论支撑。本研究以产蛋期50周龄（50 W）海兰褐蛋鸡为试验对象，利用RACE技术克隆ZP3基因全长，并对编码区进行生物信息学分析。选择健康、体重相近的海兰褐蛋鸡6只，分别取心、肝、肺、肾、卵巢、胸肌、腿肌和不同等级卵泡构建表达谱。卵巢颗粒细胞经不同浓度（PBS、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1）促卵泡素（follicle-stimulating hormone，FSH）处理后，提取总RNA，采用实时荧光定量检测ZP3基因在各个样品的表达水平。结果表明，鸡ZP3基因全长1 415 bp，其中编码区1 341 bp，共编码446个氨基酸，位于10号染色体上，包含9个外显子；其亲缘关系与猪最远；跨膜结构预测表示，其含有一个跨膜结构域和一个信号肽区域；对其亲疏水性进行分析，预测该蛋白为弱的疏水性蛋白，蛋白质结构主要由无规则卷曲构成。组织表达谱显示，ZP3基因在鸡的卵巢中相对表达量最高。各等级卵泡ZP3表达分析显示，随着卵泡发育，ZP3基因在成熟卵泡（F1）颗粒细胞层表达量最高；在使用FSH处理等级颗粒细胞后，发现ZP3表达量显著上调（P<0.05），暗示ZP3基因在颗粒细胞中受到FSH激素调节。本试验对ZP3基因的结构进行了分析并预测该基因存在跨膜结构和信号肽区域。基因表达谱分析结果显示，ZP3基因在卵泡发育过程中表达量逐渐升高且主要在颗粒细胞中表达，可能受到FSH的调节作用，因此预测，ZP3基因可能与海兰褐蛋鸡繁殖功能相关。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2016,(4)
本研究旨在分析c-Myc/LIN28B/let-7a调节通路与鸡性成熟启动的关联。测定5~17周龄文昌鸡母鸡卵巢重量、最大卵泡直径、输卵管长度及冠大小的发育性变化,并采用qRT-PCR检测c-Myc/LIN28B/let-7a基因在性成熟启动前后下丘脑中的表达。结果表明,在发育早期,文昌鸡性腺组织发育缓慢,卵泡保持原始状态。12周龄后,性腺组织进入快速发育期,13周龄母鸡的卵巢重量(1.35g)和输卵管长度(15.68cm)与12周龄测量值(0.60g,7.16cm)相比分别增加了125%和120%,同时出现等级前小白卵泡(SWF,直径1.0~2.0 mm)或大白卵泡(LWF,直径3.0~5.0mm),由此确定,12~13周龄为文昌鸡母鸡的性成熟启动关键时机。qRT-PCR检测表明,c-Myc、LIN28B基因在文昌鸡性成熟启动时,下丘脑组织中的表达水平显著降低(P0.05,P0.01),且c-Myc基因的低表达能够持续到开产,而LIN28B基因表达水平在开产前(15周龄)又恢复至较高水平;性成熟启动后let-7a表达水平显著升高(P0.01),并持续至开产。综上表明,c-Myc→LIN28B┤let-7a通路参与鸡性成熟启动调节。 相似文献