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研究了外源性胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对体外培养的奶牛成骨细胞增殖、分化及矿化的影响。应用组织块移行法分离奶牛成骨细胞,姬姆萨染色及碱性磷酸酶(ALP)染色进行鉴定。MTT法检测不同质量浓度IGF-1对成骨细胞增殖的影响,比色法检测及放射免疫法(RIA)分别测定细胞基质ALP活性及骨钙素(OC)水平,评价细胞分化功能。结果显示,1～200μg/LIGF-1均能促进奶牛成骨细胞增殖,100μg/L组具有最大刺激效应,且IGF-1干预组细胞光密度值(D值)从第1天到第5天逐渐增加,第7天降低。与对照组相比,10μg/L与100μg/LIGF-1均可显著增强ALP活性及OC水平,增幅达20%～180%(P0.05或者P0.01)。结果表明,IGF-1是奶牛成骨细胞增殖和分化代谢促进剂,因此推测IGF-1可以成为动物骨代谢性疾病潜在治疗手段。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2018,(12)
成骨细胞在骨代谢过程中发挥成骨作用,笔者制备羊骨髓肽钙螯合物(MP-Ca),探究其对体外培养成骨细胞的增殖及活性的影响,并将其效果同羊骨髓肽(MP)进行比较。制备的MP-Ca经傅里叶红外光谱仪进行扫描鉴定;从新生SD大鼠颅骨中分离纯化的成骨细胞经碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色鉴定;在培养液中添加不同浓度的受试物,CCK-8法确定最佳作用浓度。以17-β雌二醇(10~2μg·mL~(-1))为阳性对照,通过测定各组细胞OD_(450 nm)和ALP、骨钙素(BGP)的含量,考察MP、MP-Ca在最适作用浓度(10~3μg·mL~(-1))下对成骨细胞增殖和活性的影响。结果表明,MP和MP-Ca的红外光谱图未完全重叠,吸收峰发生了明显的位移变化,说明MP与CaCl_2反应形成了MP-Ca。分离的成骨细胞经ALP染色呈阳性,胞内可见大量黑褐色颗粒;茜素红染色后细胞呈深红色,并形成钙化结节。MP-Ca处理组的OD_(450 nm)和ALP、BGP水平均显著(P 0. 05或P 0. 01)高于MP处理组,但均显著(P 0.05或P 0. 01)低于雌激素组。综上,尽管效果不及雌激素,MP-Ca和MP均可促进体外培养成骨细胞的增殖并增强其成骨活性,效果MP-Ca优于MP。 相似文献
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骨是镉毒性作用的主要靶器官之一,但其对鸡骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)增殖和成骨分化的毒性作用仍不清楚。本研究利用差速贴壁纯化法获得鸡BMSCs,加入不同浓度镉处理不同时间,采用CCK-8法检测细胞增殖,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和茜素红染色鉴定成骨分化,RT-PCR检测成骨相关基因(COL1、OSX、RUNX2、ALP、OCN、OPG、OPN、RANKL)表达变化。结果显示,1~10μmol/L的镉显著促进BMSCs增殖,20μmol/L的镉显著抑制其增殖(P<0.05);5μmol/L以上的镉可显著抑制ALP活性,并以浓度依赖方式极显著抑制成骨相关基因(COL1、OSX、RUNX2、ALP、OCN、OPG、OPN)mRNA表达,上调RANKL mRNA表达(P<0.01)。表明,一定浓度镉可抑制鸡BMSCs体外增殖及其向成骨细胞(OB)的分化。 相似文献
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骨碎补水提液对大鼠成骨细胞的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
为观察骨碎补水提液对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化的影响,用体外培养新生SD大鼠颅盖骨分离的成骨细胞,将不同浓度的骨碎补水提液分别与第3代大鼠成骨细胞进行体外共同培养,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力,对硝基苯磷酸盐法(PNPP法)测定细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性.结果显示,与对照组相比,作用48 h、72 h,骨碎补水提液均能显著促进大鼠成骨细胞的增殖,且与时效有关;作用48 h ,10-3、10-2 mg/mL骨碎补水提液浓度组可显著升高细胞ALP活性(P<0.05).表明骨碎补水提液中存在较高活性的促大鼠成骨细胞增殖和分化的物质. 相似文献
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旨在分离绵羊骨髓间充质干细胞(sheep bone marrow mesenchymal stem cells, SBMSC),建立绵羊骨髓间充质干细胞系,为相关研究提供种子细胞。取新生健康绵羊肋骨为试验材料,利用贴壁法分离获得SBMSC;取生长良好的P3代细胞通过免疫荧光,进行CD73、CD90、CD105、CD106表型鉴定;取生长良好的P3代细胞分别进行成软骨、成脂、成骨方向的诱导,对诱导结果分别进行阿利新蓝、油红O和茜素红染色,鉴定分化结果。SBMSC呈成纤维样贴壁生长;体外培养P3代细胞表面标记物CD73、CD90、CD105和CD106完全符合标准;P3代细胞经软骨、脂肪、骨方向诱导3周后,经阿利新蓝染色,细胞呈亮蓝色;经油红O染色,细胞质内出现橙红色脂滴;茜素红染色表明聚集的细胞团中央能形成钙化结节。说明SBMSC经体外诱导培养后可向软骨细胞、脂肪细胞和成骨细胞分化,并具有明显的成软骨、成脂和成骨表型,表明SBMSC具有多向分化潜能。通过贴壁培养法建立了SBMSC完整的体外培养体系,为绵羊育种等方面提供种子细胞。 相似文献
7.
《中国畜牧兽医》2020,(7)
试验旨在探讨褪黑素对体外培养的鹿茸软骨细胞增殖、周期及凋亡的影响。利用甲苯胺蓝、茜素红S、阿利新蓝染色鉴定软骨细胞,采用外源添加褪黑素的方法,用不同浓度(0、400、800、1 200、1 600和2 000 pg/mL)、不同时间(24、48和72 h)处理鹿茸软骨细胞,CCK-8法检测细胞增殖。选取800 pg/mL褪黑素处理软骨细胞24 h,利用流式细胞仪检测细胞周期的分布及细胞凋亡情况,采用ELISA试剂盒检测细胞培养液中睾酮含量。结果显示,经不同浓度的褪黑素处理鹿茸软骨细胞不同时间后,800 pg/mL褪黑素处理鹿茸软骨细胞24 h细胞活力极显著增加(P0.01)。软骨细胞经褪黑素处理后,与对照组相比,褪黑素处理组细胞G1期比例显著降低(P0.05);G2期比例极显著增加(P0.01),细胞被阻滞在G2期;褪黑素处理组细胞早期凋亡率无显著变化(P0.05),晚期凋亡率显著下降(P0.05);ELISA检测睾酮分泌水平均显著上升(P0.05)。综上,外源添加800 pg/mL褪黑素可以促进鹿茸软骨细胞的增殖,抑制软骨细胞的晚期凋亡,促进睾酮的分泌;以上结果可为阐明褪黑素参与鹿茸生长发育机制提供参考。 相似文献
8.
探讨反相微乳液法制备的β-纳米磷酸三钙/明胶/鹿茸多肽复合材料(简称纳米复合材料)对人成骨细胞功能的影响.利用反相微乳液法制备纳米复合材料,扫描电镜观察其形态,EDX与SELDI-TOF-MS分析对复合材料进行表征.采用MTT比色法、茜素红染色法检测纳米复合材料对体外培养的人成骨细胞hFOB1.19的增殖、矿化结节形成的影响;采用全自动生化分析仪检测hFOB细胞碱性磷酸酶活性(ALP).结果表明该纳米复合材料可促进人成骨细胞增殖,提高ALP活性并增加矿化结节形成的数量,可促进人成骨细胞的增殖、分化成熟及矿化. 相似文献
9.
《中国兽医学报》2020,(2)
脂联素受体激动剂(AdipoRon)是人工合成的与脂联素(ADPN)有相似作用的口服活性小分子,研究显示ADPN可调节成骨细胞生长和分化,但AdipoRon是否具有类似的功能目前鲜见报道。本试验主要研究AdipoRon对鸡成骨细胞的影响。从14日龄鸡胚额骨中分离获得成骨细胞,细胞培养第4日,分别添加100,200 mg/L AdipoRon处理成骨细胞,处理72 h后,MTT法检测细胞增殖活性,并进行碱性磷酸酶(ALP)染色。Real-time PCR检测脂联素受体1(AdipoR1)、脂联素受体2(AdipoR2)、成骨细胞成熟标志基因骨钙素(osteocalcin,OC)、Ⅰ型胶原α2链(alpa2 of type I collegen,COL1A2)、细胞凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2及Bax的基因表达量,计算Bcl-2与Bax基因表达量的比值。结果显示,100,200 mg/L AdipoRon处理后的成骨细胞正常形态消失,细胞数量减少,体积变小,细胞核明显固缩,细胞存活率极显著降低(P<0.01)。AdipoRon可增加成骨细胞中AdipoR1、AdipoR2、OC、Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达量(P<0.05),并呈剂量依赖性,但对COL1A2和Bcl-2/Bax的表达无显著性影响。结果表明,100,200 mg/L AdipoRon均可促进鸡成骨细胞AdipoR1/2的表达,且能抑制成骨细胞的增殖,促进成骨细胞的成熟及凋亡。 相似文献
10.
鸡精原干细胞定向诱导分化特性的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
取孵化18～20d的鸡胚睾丸，分离精原干细胞（SSCs），培养传代3次后，用特异性化学物质定向诱导分化，以研究鸡培养传代后SSCs保持多向分化的潜能。①用特异的化学物质地塞米松、β-磷酸甘油钠、维生素C诱导鸡SSCs向成骨细胞分化，用Von Kossa＇s法、改良的钙钴法及免疫组化法进行成骨细胞鉴定；②用维甲酸（RA）、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（IBMX）诱导SSCs向神经元样细胞分化，甲苯胺蓝特异染色和组织化学鉴定。③用地塞米松、胰岛素、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（IBMX）诱导SSCs向脂肪细胞分化，特异性的油红O染色和脂肪细胞标志基因PPAR7检测。结果显示，SSCs被诱导15～21d后分化为成骨细胞，诱导形成率为80％；Von Kossa＇s染色细胞间布满黑色颗粒，具有矿化基质沉积；改良钙钴法碱性磷酸酶染色胞浆呈深棕色或深黑色，免疫组化染色细胞呈阳性。SSCs被诱导3～7d后分化为神经元样细胞，甲苯胺蓝染色阳性率为85％。SSCs被诱导7～21d后，分化成脂肪细胞，分化率为85％。诱导的脂肪细胞经特异性的油红O染色为阳性，并高表达脂肪细胞标志基因PPARγ。结论：在不同的诱导条件下，SSCs可被定向诱导分化为3种成体细胞，证明其培养传代后仍具有多向分化能力。 相似文献
11.
取新生奶牛肋骨,剪成1 mm3大小骨片,胰蛋白酶消化5次,D-Hank's液彻底冲洗后,骨片置于含15?S的DMEM中培养,获取单层细胞.采用倒置显微镜下观察细胞形态,改良钙-钴法染色,检测碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(OC)mRNA丰度及骨钙素蛋白浓度等方法,对细胞进行鉴定.通过MTT法绘制生长曲线,研究细胞增殖特性,茜素红染色观察细胞钙化功能.结果显示,采用本法所获得的细胞具有典型的成骨细胞形态和特性:ALP染色呈阳性,活性水平较高;培养7 d后可检测到骨钙素mRNA表达,12 d后细胞上清液中可检测到骨钙素蛋白;诱导培养2周后细胞可形成钙化结节.提示采用胰蛋白酶消化,组织块移行法所培养的细胞具有成骨细胞特性.本方法可获得高纯度、高活性的奶牛成骨细胞. 相似文献
12.
山羊成骨细胞的体外培养和鉴定 总被引：3，自引：0，他引：3
采用初生山羊羔股骨骨膜，通过植块培养法、完全消化法和半消化植块法分离、培养成骨细胞。结果表明，植块培养法、完全消化法和半消化植块培养法的贴壁时间分别为4、24、4h；培养4d时的细胞数量分别为少量细胞、少量细胞、大量细胞，细胞汇合时间分别为21、19、10d。传代后第7d即可汇合，第14d出现矿化结节，茜素红染色呈橘红色，Von Kossa染色呈黑色；姬姆萨和HE染色后可见体外培养的细胞呈三角形、多角形，胞质丰富，胞核卵圆形，单核，有1～3个核仁；碱性磷酸酶染色后胞质呈黑色颗粒或块状沉淀；扫描电镜观察胞突发达，伸出的突起与临近细胞的突起相连。体外培养传至15代时细胞的生物学性状未发生变化。试验结果显示，半消化植块培养周期短，细胞损害小，有利于细胞贴壁，是一种可行的骨组织工程研究方法。 相似文献
13.
利用不同浓度的醋酸铅溶液(0、20、40、80μmol/L)作用成骨细胞24 h,研究醋酸铅对体外培养新生SD大鼠成骨细胞增殖分化和钙调蛋白(Calmodulin,CaM)的影响。结果表明,成骨细胞的增殖功能和ALP活性随着醋酸铅浓度的增加而显著降低(P<0.05或P<0.01),呈现一定的剂量-效应关系;与对照组相比,染铅组成骨细胞ALP活性显著下降(P<0.05),而钙调蛋白mRNA和蛋白的表达逐渐增加,当铅浓度为40μmol/L时,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01)。表明醋酸铅通过影响成骨细胞的增殖分化活力、ALP活性和钙调蛋白的表达,发挥其毒性损伤作用。 相似文献
14.
本研究旨在观察不同代次骨髓间充质干细胞(BMSCs)和脂肪间充质干细胞(ADSCs)体外培养的生长特点和体外诱导成骨能力。通过密度梯度离心和贴壁培养法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞和脂肪间充质干细胞,用含地塞米松、抗坏血酸、β-甘油磷酸钠的培养液定向诱导传代细胞向成骨细胞分化,并利用茜素红染色、碱性磷酸酶染色及PCR方法检测成骨细胞。结果表明骨髓及脂肪间充质干细胞呈成纤维细胞样生长,增殖能力强,生长迅速。第5、10、15、20代BMSCs及ADSCs经诱导培养后茜素红染色呈阳性并且出现"矿化"、碱性磷酸酶活性强,随着细胞代次的递增,诱导后细胞碱性磷酸酶活性呈递减趋势;诱导后的两类细胞传代后细胞仍能继续分化,并形成正常的"矿化"结节,且碱性磷酸酶染色均弱于初次诱导。结果提示,BMSCs及ADSCs易于分离培养及体外扩增,诱导条件下成骨能力强且成骨细胞传代培养仍具有成骨能力,适合作为再生医学骨组织工程的种子细胞。 相似文献
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钙对体外培养大鼠成骨细胞增殖分化及细胞周期的影响 总被引：1，自引：1，他引：0
在体外培养大鼠成骨细胞的过程中,添加不同剂量的钙(0、1、2、4 mmol/L),通过检测细胞周期、细胞增殖能力、碱性磷酸酶(ALP)活性及骨桥蛋白表达,探讨了钙对成骨细胞增殖分化及细胞周期的影响.结果表明,2、4 mmol/L钙组在1～8 d均显著或极显著地促进成骨细胞增殖(P<0.05或P<0.01),1 mmol/L钙组则在5、6、8 d有显著或极显著的差异(P<0.05或P<0.01);添加不同浓度的钙除1 mmol/L组第2天外的不同时间均极显著地抑制细胞内ALP活性(P<0.01);1 mmol/L钙能极显著的使成骨细胞滞留在S期(P<0.01);添加不同浓度的钙均能使G2期显著或极显著的增加(P<0.05或P<0.01),G1期极显著的下降(P<0.01),并能极显著地诱导细胞内骨桥蛋白的表达(P<0.01).表明添加不同浓度的钙均能抑制其早期分化,促进成骨细胞的增殖,使细胞滞留在S期或G2期,诱导细胞在基质成熟期分化,有利于细胞的钙化. 相似文献
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试验旨在探讨褪黑素对体外培养的鹿茸软骨细胞增殖、周期及凋亡的影响。利用甲苯胺蓝、茜素红S、阿利新蓝染色鉴定软骨细胞,采用外源添加褪黑素的方法,用不同浓度（0、400、800、1 200、1 600和2 000 pg/mL）、不同时间（24、48和72 h）处理鹿茸软骨细胞,CCK-8法检测细胞增殖。选取800 pg/mL褪黑素处理软骨细胞24 h,利用流式细胞仪检测细胞周期的分布及细胞凋亡情况,采用ELISA试剂盒检测细胞培养液中睾酮含量。结果显示,经不同浓度的褪黑素处理鹿茸软骨细胞不同时间后,800 pg/mL褪黑素处理鹿茸软骨细胞24 h细胞活力极显著增加（P<0.01）。软骨细胞经褪黑素处理后,与对照组相比,褪黑素处理组细胞G1期比例显著降低（P<0.05）;G2期比例极显著增加（P<0.01）,细胞被阻滞在G2期;褪黑素处理组细胞早期凋亡率无显著变化（P>0.05）,晚期凋亡率显著下降（P<0.05）;ELISA检测睾酮分泌水平均显著上升（P<0.05）。综上,外源添加800 pg/mL褪黑素可以促进鹿茸软骨细胞的增殖,抑制软骨细胞的晚期凋亡,促进睾酮的分泌;以上结果可为阐明褪黑素参与鹿茸生长发育机制提供参考。 相似文献
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试验旨在研究野生盘羊脐带间充质干细胞（umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs）的分离、培养及体外多向分化潜能等生物学特性。取盘羊分娩后的新生雄性胎儿脐带,采用组织块培养法分离盘羊UC-MSCs后进行体外培养,并对UC-MSCs进行成骨、成软骨和成脂诱导分化,检测其多向分化潜能。结果显示,应用组织块培养法获得的盘羊UC-MSCs具有UC-MSCs特有的呈簇、成纤维状的特性,细胞呈"S"型曲线生长,细胞的倍增时间平均为33.50 h,且可以向成骨细胞、成软骨细胞和成脂细胞分化。诱导分化特异性染色结果表明,野生盘羊UC-MSCs经诱导后的成骨细胞经茜素红S染色呈现典型的橙红色钙沉积物聚集,成软骨细胞经阿利新蓝染色呈现蓝色的软骨基质,成脂细胞经油红O染色呈现深红色的脂滴。实时荧光定量PCR检测结果发现,随着诱导时间的延长,成骨分化的细胞中骨内γ-羧基谷氨酸蛋白（BGLAP）、骨桥蛋白基因（OPN）、Runt相关转录因子2（RUNX2）基因的相对表达量极显著升高（P<0.01）;成软骨分化的细胞中光蛋白聚糖（LUM）基因的表达量明显增加,而双糖链蛋白多糖（BGN）和Y染色体性别决定区基因盒9（SOX9）基因表达量极显著提高（P<0.01）;成脂分化的细胞中脂蛋白酶（LPL）和过氧化物酶体增殖因子活化受体γ（PPAR-γ）基因的相对表达量极显著上升（P<0.01）。试验结果表明,用盘羊胎盘附带的脐带组织可以分离到盘羊UC-MSCs,且分离到的UC-MSCs具有分化为成骨细胞、成软骨细胞及成脂细胞等多向分化潜能。 相似文献
18.
旨在探索鸡胚胎干细胞(ES细胞)体外定向诱导的多向分化潜能.分离鸡X期胚盘细胞,体外培养传代,经鉴定后,采用地塞米松(DEX)、β-甘油磷酸钠(β-GP)和维生素C(VitC)诱导ES细胞向成骨细胞分化;采用维甲酸(RA)、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)诱导ES细胞向神经元样细胞分化;采用DEX、胰岛素、IBMX诱导ES细胞向脂肪细胞分化,比较不同浓度组合诱导剂的诱导效果,分别用Von Kossa's染色法、甲苯胺蓝染色法、免疫组化法、油红O染色法和RT-PCR鉴定诱导产生的细胞.结果显示,ES细胞被诱导3～21 d后,分化为成骨细胞,诱导率为40％～72％;被诱导4～7 d后,分化为神经元样细胞,诱导率为71％～84％;被诱导2～21 d后,分化为脂肪细胞,油红O染色阳性,并表达PPARγ基因.结果表明,在体外条件下,ES细胞可被特异的化学物质定向诱导分化为成骨细胞、神经元样细胞和脂肪细胞,具有多向分化潜能. 相似文献
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为研究1α,25-（OH）2D3影响体外培养成骨细胞（Osteoblasts,OB）增殖分化是否存在L-型钙离子通道机制。在体外培养SD大鼠0B基础上,添加不同浓度的1α,,25-（OH）2D。（0、10^-9、10、10^-7mol／I。）或和10mol／OB硝苯地平（NIF）作用24、48、72h。采用MTT法测定0B增殖率,PNPP法测定碱性磷酸酶（AI。P）活性。结果显示,1α,25-（OH）2D。卉13量依赖性地抑制oB增殖、促进ALP活性;10^-8mol／LNIF单独作用亦能抑制OB增殖、促进ALP活性;并且在培养早期（24、48h）能消除10mol／L 1α,25-（OH）2D3对OB增殖的抑制效应及对ALP活性的促进效应。结果表明,1α,,25-（0H）2D3能够抑制0B增殖、促进其分化;并且此过程涉及L-型钙离子通道机制。 相似文献
20.
为研究1α,25-（OH）2D3影响体外培养成骨细胞（Osteoblasts,OB）增殖分化是否存在L-型钙离子通道机制。在体外培养SD大鼠0B基础上,添加不同浓度的1α,,25-（OH）2D。（0、10^-9、10、10^-7mol／I。）或和10mol／OB硝苯地平（NIF）作用24、48、72h。采用MTT法测定0B增殖率,PNPP法测定碱性磷酸酶（AI。P）活性。结果显示,1α,25-（OH）2D。卉13量依赖性地抑制oB增殖、促进ALP活性;10^-8mol／LNIF单独作用亦能抑制OB增殖、促进ALP活性;并且在培养早期（24、48h）能消除10mol／L 1α,25-（OH）2D3对OB增殖的抑制效应及对ALP活性的促进效应。结果表明,1α,,25-（0H）2D3能够抑制0B增殖、促进其分化;并且此过程涉及L-型钙离子通道机制。 相似文献