杉木 SRAP-PCR 反应体系优化与建立     

侯娜  ;毛红  ;王港  ;龙倩  ;石扬文  ;陈波涛 《云南林业科技》2014,(6):85-90

采用L16（45）正交实验设计,对杉木SRAP-PCR反应体系中Mg^2＋、 dNTPs、 Taq DNA聚合酶用量、引物浓度及模板DNA用量等5个因素进行了优化,并确立了适宜杉木的最佳SRAP-PCR反应体系。杉木的SRAP-PCR最佳反应体系为：反应体系总体积为25μL,含2.0 mmol／L Mg^2＋、0.3 mmol／L dNTPs 、0.3μmol／L引物,1.0 U Taq DNA聚合酶、50 ng模板DNA及1×PCR buffer。各因素对杉木基因组DNA SRAP-PCR扩增结果的影响程度不同,其中dNTPs浓度影响最大, Mg^2＋浓度的影响最小。运用杉木单株基因组DNA对优化SRAP-PCR反应体系进行验证,均获得多态性丰富、条带清晰的扩增图谱,表明所确立的杉木SRAP-PCR反应体系稳定可靠。  相似文献   

红松SRAP-PCR反应体系的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

冯健  王骞春  于世河  杨鹤  李秀玲  吴树成 《辽宁林业科技》2010,(6):6-8

通过单因素试验,对红松SRAP—PCR反应体系的主要影响因子（Taq DNA聚合酶、Mg^2＋、模板DNA、dNTPs、引物浓度）进行了优化筛选,得出红松SRAP—PCR反应的最佳体系：20μL反应体系中,模板90ng,Mg^2＋1．0mmol／L,dNTPs0．15mmol／L,Taq DNA聚合酶1．5 U,引物0．3～0．4μmol／L。  相似文献   

普陀樟SRAP-PCR反应体系的建立     

吕昕谣  赵颖  赵国淼  曾燕如  宋绪忠  杨华 《浙江林业科技》2014,(3)

以舟山群岛的普陀樟（Cinnamomum japonicum var.chenii）新鲜叶片为实验材料,采用L16（45）正交试验设计,对影响普陀樟SRAP-PCR反应的Mg2+浓度、dNTPS、Taq DNA聚合酶、引物和模板DNA用量5因素组合进行了筛选。结果表明：适于普陀樟的SRAP-PCR反应体系（20μL）为2.5 mmol/L Mg2+、0.2 mmol/L dNTPs、1.5 U Taq DNA聚合酶、0.4μmol/L引物、10 ng模板DNA、2μL 10×PCR buffer,该体系位点清晰,扩增稳定;利用该反应体系从100对SRAP引物组合中筛选出多态性好的引物24对。  相似文献   

西伯利亚杏SRAP-PCR反应体系的优化研究     

李爽  董胜君  吴月亮  余海滨  刘明国 《辽宁林业科技》2014,(4):9-11

以西伯利亚杏为试验材料,进行基因组DNA的提取、扩增及电泳试验。通过L16(45)正交试验,确定西伯利亚杏SRAP-PCR优化反应体系(反应体系总体积20μL):Mg2+2.0 mmol·L-1、dNTPs0.25 mmol·L-1、引物浓度1.2μmol·L-1、Taq聚合酶1.0 U、DNA模板20 ng。采用SRAP引物组合ME5/EM10,对优化的SRAP-PCR反应体系进行初步验证,24个西伯利亚杏无性系SRAP分子标记试验共扩增出谱带431条,引物扩增出23条谱带,其中338条为多态性谱带,多态百分率为78.42%。  相似文献   

赤松外生菌根ITS-PCR体系的建立及优化     

马大龙  杨国亭  穆立蔷  李淳 《林业科技》2010,35(5):25-28

以CTAB法提取的赤松外生菌根DNA为模板,应用单因子试验及L16（4^5）正交试验,系统的分析了DNA模板、Mg^2＋、dNTPs、引物和Taq酶对ITS-PCR扩增结果的影响,并建立了赤松外生菌根rDNA ITS扩增反应的优化体系,最优反应体系为：20μL体系中,1×PCR buffer 2μL、DNA模板30 ng、Mg^2＋2.0 mmol/L、dNTPs0.2 mmol/L、引物0.2μmol/L、Taq酶0.5 U。  相似文献   

班克松SRAP-PCR反应体系的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

陆爱君  王骞春  郭芳  冯健  陈罡  于世河  曲艺 《辽宁林业科技》2011,(5):11-14

以班克松幼叶为试材,采用L16（45）正交设计对SRAP-PCR反应体系进行优化,结果表明：班克松SRAP-PCR最佳反应体系为：1.5 mmol/L Mg2＋、0.1 mmol/L dNTPs、0.2μmol/L引物、1.5 UTaq酶和30 ng模板DNA。运用优化的反应体系对班克松进行验证,电泳结果显示扩增条带清晰,多态性高,证明该体系稳定可靠。这一优化体系的建立为今后利用SRAP标记技术,对班克松分子生物学研究提供了技术参考。  相似文献   

刨花润楠SRAP-PCR体系建立与优化     

周鹏  林玮  周祥斌  陈晓阳 《广东林业科技》2017,33(4):29-33

以刨花润楠(Machilus pauhoi)1.5 a生小苗幼嫩叶片为试材,对影响刨花润楠SRAP-PCR扩增的模板DNA量、引物、dNTP和Mg2+体积摩尔浓度、Taq DNA聚合酶、退火温度6个主要因素进行优化.结果表明,SRAP-PCR的最佳反应体系为:25μL的SRAP-PCR反应体系中,2.5μL 10×PCR buffer、模板DNA量60 ng、Mg2+2.0 mmol/L、dNTP 0.225 mmol/L、引物0.3μmol/L和Taq DNA聚合酶1.25 U.对优化的反应体系和扩增程序的验证结果表明,优化的刨花润楠SRAP-PCR反应体系和扩增程序是稳定可行的.  相似文献   

白桦SRAP-PCR反应体系的优化     

陆爱君  陈罡  顾宇书  韩友志  高英旭  刘红民 《辽宁林业科技》2015,(2):16-19

采用单因素试验对白桦SRAP-PCR反应体系中的5个因素(Mg2+、d NTP、引物、Taq DNA聚合酶和模板DNA)进行优化,结果表明:在25μL反应体系中Mg2+浓度2.0 mmol·L-1、Taq DNA聚合酶1.5 U、d NTPs 0.15 mmol·L-1、引物浓度0.4μmol·L-1、模板DNA 30 ng,该体系能够很好地满足白桦SRAP扩增的要求。优化体系的建立将为今后利用SRAP标记技术对白桦进行分子遗传育种研究奠定基础。  相似文献   

湿地松、加勒比松SRAP反应体系的优化及引物筛选     

李义良 《广东林业科技》2011,27(3):8-13

采用正交设计L9(34)对影响湿地松、加勒比松SRAP反应体系的DNA浓度、dNTPs浓度、引物用量、Taq DNA聚合酶浓度4个因素进行了优化试验,结果表明:扩增反应体系5优于其他体系,即25μL体系中含有DNA 40 ng、dNTPs 1mmol/L、引物10 μmol/L、DNA聚合酶1.0U.在此基础上,通过单...  相似文献   

麻疯树ISSR-PCR反应体系的建立和优化     

黄勇  肖祥希  万泉  王志洁  林阿平 《林业科技开发》2010,24(4):119-122

以2年生的麻疯树嫩叶提取的DNA作为模板,固定ISSR-PCR扩增程序,对影响PCR扩增的模板DNA、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶以及Mg^2＋浓度等5因素（不同水平）进行单因素设计优化,得到适合于麻疯树ISSR-PCR扩增的体系为：25μL反应体系中,含模板DNA300 ng、dNTP 0.15 mmol/L、引物0.20μmol/L、TaqDNA聚合酶1.0 U及Mg^2＋3.0 mmol/L。  相似文献   

金樱子SRAP-PCR反应体系的建立与优化     

杨晨希  王国良 《林业科技开发》2012,26(3):99-103

以广西南宁产的金樱子叶片为材料,采用L16(45)正交试验设计,对SRAP-PCR反应体系中的Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物和模板DNA用量5因素进行了优化。结果表明:适用于金樱子SRAP-PCR的最佳反应体系为:反应总体积10μL,包含2.0 mmol/L Mg2+、0.4 mmol/L dNTPs、0.5 UTaqDNA聚合酶、3μmol/L引物、25ng DNA及10×PCR Buffer;各因素对PCR反应影响由大到小依次为:Mg2+、DNA、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶。用7份不同来源的金樱子材料对优化的SRAP-PCR反应体系进行验证,均获得了条带清晰、多态性丰富的扩增图谱,证实了该体系的稳定可靠。  相似文献   

龙眼SRAP-PCR反应体系的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

姜帆  高慧颖  陈秀萍  郑少泉 《福建林业科技》2007,34(4):20-23,45

为建立龙眼的SRAP-PCR体系,对影响SRAP-PCR的退火温度、引物浓度、dNTP、模板DNA、Mg2+等因素进行优化。确定优化的龙眼SRAP-PCR反应体系为:10×buffer(Mg free)2.5μl,dNTP mixture(10 mmol.L-1)2.0μl,primer(10μmol.L-1)(0.7+0.7)μl,Mg2+(25 mmol.L-1)1.0μl,模板DNA 40 ng,Taq DNA聚合酶1.5 U,以双蒸水补足至25μl。退火温度51℃。利用该优化的体系对来自中国、泰国、印度尼西亚的16份龙眼种质进行SRAP扩增,电泳显示获得了清晰、稳定的扩增结果。  相似文献   

乌桕SRAP-PCR体系优化与引物筛选     

彭婵  张新叶  李振芳  王瑞文  王晓光 《湖北林业科技》2011,(1):13-17

乌桕是我国重要木本油料树种,目前有关乌桕SRAP-PCR相关研究罕有报道.笔者以乌桕优树总基因组DNA为模板,建立了乌桕的SRAP最佳反应体系:20μLPCR反应体积系中,2μL10×PCR buffer、0.2mmol/L dNTPs、0.25mmol/L引物、1.5U Taq聚合酶和40ng模板DNA.并从100个...  相似文献   

鸭梨ISSR-PCR反应体系的初步建立     

支婷  杜克久  崔建州  刘春琴 《河北林果研究》2011,26(1):65-68

以沧州泊头市鸭梨为试验材料,对鸭梨ISSR-PCR反应体系中的模板DNA用量、dNTPs浓度、引物浓度以及Taq酶浓度进行了探索,初步建立适合鸭梨ISSR-PCR反应体系为：在20μL反应体系中,含1×Taq PCR Buffer[1.5 mmol/L Mg2＋]0、.15 mmol/L dNTPs、0.40μmol/L引物、40 ng DNA和1 U Taq酶。  相似文献   

适用于厚朴的SRAP反应体系的建立与优化     

郑志雷  李洪光  孔玲  肖永太  荣俊冬  马水旺  郑郁善 《福建林业科技》2010,37(3)

利用正交试验L16(45),结合单因素试验对厚朴相关序列扩增多态性(Sequence-related amplified polymorphism,SRAP)标记反应体系的5个因素(Mg2+,dNTPs,引物,Taq酶和模板DNA)进行优化试验,结果表明:各因素水平变化对PCR反应的影响从大到小依次为:dNTPsTaq酶模板DNAMg2+引物;筛选出各反应因素的最佳水平,建立厚朴SRAP-PCR反应的最佳体系(25μL)为:Taq酶1.5 U,Mg2+1.8 mmol.L-1,模板DNA100 ng,dNTP 0.24 mmol.L-1,引物0.40μL。试验表明,该体系重复性好、稳定性强。  相似文献   

台湾水青冈ISSR-PCR体系的优化     

宋文静  金则新  李钧敏  李建辉 《福建林业科技》2009,36(2)

分析了ISSR-PCR体系中Mg2+、dNTP和BSA浓度,以及模板DNA、引物和TaqDNA聚合酶用量等6个因素对反应结果的影响,建立了适合于台湾水青冈ISSR-PCR扩增的反应体系:10μL PCR反应液中,含10 ng DNA,1.5 mmol.L-1Mg2+,0.125 mmol.L-14×dNTP,1×TaqDNA聚合酶配套缓冲液(10 mmol.L-1Tris-HCl,pH值9.0,50 mmol.L-1KCl,0.1%Triton X-100),0.6 UTaqDNA聚合酶,2 mg.mL-1BSA和3pmol引物。应用优化的ISSR-PCR体系从100个ISSR引物中筛选出12个稳定性好,重复性高的引物,对22株台湾水青冈个体的DNA进行扩增,结果表明优化的ISSR-PCR体系完全适合于台湾水青冈的ISSR分析。  相似文献