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本研究针对一类虫体膨大,体壁硬化,革质化或木质化的球蚧类蚧虫开展了全基因组提取方法的探讨,特别是在材料的选择和前处理过程两个关键环节进行了新的尝试,并通过目前文献报道的SDS、CTAB、TES、NaCl和TNES法进行了随后的基因组提取,运用1%琼脂糖凝胶电泳、DNA OD值测定和特定基因的PCR扩增对基因组的提取效果进行了检测,结果表明,无论是冷冻保存还是75%酒精固定液-4℃保存的球蚧样本均可用于DNA提取,选择球蚧体壁作为提取材料要比整头虫体效果好,前处理采用在少量提取缓冲液中剪碎样品的方法获得的基因组机率大,纯度高、条带整齐无拖尾,同时也证实CTAB法更适合该类蚧虫基因组的提取。 相似文献
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蚜虫内共生菌基因组DNA提取方法的比较和优化 总被引：3，自引：3，他引：0
为探究蚜虫共生菌基因组DNA的提取方案,以桃蚜为试验材料,比较了目前较为常用的4种蚜虫基因组DNA提取方法,从DNA纯度、完整性、PCR扩增效率及稳定性等方面进行了比较和评价,并通过调整蛋白酶K用量和水浴温度及时间对STE法进行了优化。结果表明,4种方法提取的蚜虫共生菌基因组DNA均可用于共生菌的PCR扩增检测;CTAB法和SDS法提取的DNA纯度较高,条带较完整,稳定性相对较高,不易降解,而STE法和PCR缓冲液法操作简便,适于快速提取单头蚜虫共生菌的基因组DNA,但纯度相对较低;可根据试验条件和要求进行选择。STE法优化条件为:用30 μL STE缓冲液将蚜虫匀浆,加入1.5 μL 20 mg/mL蛋白酶K,于56 ℃水浴1.5 h;再加入0.1 μL 10 mg/L RNA酶,于37 ℃培养1 h,95 ℃下处理5 min,5 000 r/min离心3 min,将提取到的DNA于-20 ℃保存或直接用于PCR扩增。优化后的STE法可作为提取蚜虫共生菌基因组DNA经济而快捷有效的方法。 相似文献
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美国白蛾基因组DNA提取及RAPD反应条件优化 总被引：1，自引：0，他引：1
用改进的SDS法从无水乙醇浸泡美国白蛾幼虫标本中提取到高分子量的可用于RAPD扩增的基因组DNA。用正交试验对影响RAPD扩增的条件进行优化得到最佳反应体系：20 μL反应体系中,模板浓度1.25 ng/μL、引物浓度1.2 ng/μL、dNTP浓度 0.2 mmol/L、Mg2+浓度 3.0 mmol/L、TaqDNA聚合酶用量2.5 U。确定最佳退火温度为38 ℃。PCR反应条件：94 ℃ 30 s、38 ℃ 60 s、72 ℃ 60 s 35个循环后,72 ℃延伸5 min。为在分子水平上讨论美国白蛾种群的遗传分化提供基础。 相似文献
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苜蓿假盘菌基因组DNA提取方法 总被引：1，自引：0，他引：1
以保定苜蓿上分离的苜蓿假盘菌为试验材料,采用SDS、SDS-CTAB及氯化苄3种方法提取基因组DNA,并进行比较。结果表明:3种方法均能提取到DNA,其中氯化苄法效果最佳,获得的DNA纯度高,此法操作简单、经济;其次是SDS-CTAB法,但DNA有所降解;而SDS法效果最差。此外还较详细地研究了采用氯化苄法提取缓冲液pH值、液氮和蛋白酶K对DNA提取效果的影响。 相似文献
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针对蚜虫体型微小,体表有外骨骼等特点对改进的醋酸钾（KAC）法作了优化,优化后的方法可在常温条件下更加简易和有效地提取高质量的单头蚜虫基因组DNA,结果表明,DNA样品的A260/280值普遍在1.6～1.9之间,电泳检测基因组DNA纯度和完整性较好。同时在20 μL的反应体系中将PCR的5个主要成分分别设定10个浓度梯度,研究了适合桃蚜SSR分子标记的优化体系,结果表明,最适宜的优化浓度分别为：1.5 mmol/L Mg2+,0.25 mmol/L dNTP,1.0U Taq酶,40 ng/μL模板DNA,25 ng/μL引物。利用甘肃省酒泉地区马铃薯桃蚜来验证此优化体系,30%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物大多在100～300 bp,多态性高,且反应体系的稳定性和可重复性好。 相似文献
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荒漠刺叶墙藓DNA的提取及PCR扩增反应条件 总被引：1，自引：0，他引：1
采用改进CTAB法、NaOH法和直接PCR法(direct PCR amplification)提取藓类生物结皮中刺叶墙藓(Tortula desertorumBroth.)基因组DNA,比较其分离效果以及ISSR扩增效果。结果表明:改进CTAB法提取的基因组DNA质量好、纯度高,ISSR扩增反应效果好。直接PCR法一旦体系建立,则是最简易快速、经济高效的模板制备方法,适于植株矮小、生物量很小的荒漠藓类植物个体模板DNA的制备。利用改进CTAB法获得的基因组DNA作为模板,对ISSR反应组分浓度及反应程序中的一些重要参数进行摸索和优化实验,建立了刺叶墙藓最优ISSR反应体系。反应总体积为20μL,各反应组分终浓度为:2μL10×Buffer,2 mM Mg2 ,0.1 mM dNTPs,0.2μM引物,10~40 ng模板DNA,1U Taq酶。扩增程序为:94℃4 min,1个循环;94℃45 s,退火温度(Tm)45 s,72℃1 min,35个循环;72℃7 min,1个循环;4℃保存。刺叶墙藓是组成古尔班通古特沙漠藓类生物结皮的优势种,研究结果为进一步开展刺叶墙藓遗传多样性的研究奠定了基础。 相似文献
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单条线虫DNA提取方法 总被引：8，自引：0，他引：8
大量线虫DNA的提取可能因线虫不纯而受到污染,溶液多次转移造成DNA损失,并且在提取过程中加入过多的溶质离子也可能对PCR扩增有干扰,从而影响下一步的研究。本研究用液氮快速冷冻单条线虫,继以85℃快速变温,用温度的剧烈变化使线虫裂解,再以蛋白酶K降解蛋白质,提高了获得的DNA的纯度和数量。通过多种线虫的验证试验表明,该方法高效、快速、稳定。该试验方法有如下优点:(1)使用Taq酶附带的PCR Buffer代替WLB裂解液和SDS裂解液,减少了配置的不确定性和外来离子的影响。(2)整个提取过程在一个PCR管中完成,并可直接用于PCR扩增,没有溶液的转移和过多的溶质添加,减少污染和对后续PCR的影响。(3)使用变温处理代替其他手工破碎方法,减少了外界污染物的掺入,不需要手工操作技巧。与另外2种提取线虫DNA的蛋白酶K方法相比,本研究提取单条线虫DNA的时间短,效率高,PCR扩增结果稳定可靠,符合快速检测的需求;此外,本研究所使用的方法降解单条线虫蛋白质彻底,提取DNA数量多,稀释32倍仍能扩增出明显的条带,可进行多次分子试验研究。 相似文献
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为实现多尺度东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis生境动态监测并分析其生境变化驱动因素,本研究结合遥感与地理信息系统技术,采用多时相遥感卫星影像提取天津市大港水库2002、2006及2013年东亚飞蝗生境空间分布信息,从整体景观尺度(面积变化)、像元尺度(多时相信息二进制编码)以及斑块尺度(景观指数)定量分析东亚飞蝗生境的时空变异特征。结果显示,2002—2013年适宜东亚飞蝗孳生的区域面积呈下降趋势,由2002年的329.98 km2降至2013年的146.34 km2;2002—2013年东亚飞蝗生境斑块数呈现降低趋势,斑块形状指数和平均斑块面积先减少后增加,而景观破碎度指数先增加后下降,说明2002—2006年东亚飞蝗生境景观破碎化程度较高,2006—2013年东亚飞蝗生境景观破碎化程度较低。表明基于多时相遥感影像能快速获取东亚飞蝗生境的时空变异特征,有助于东亚飞蝗监测预警及科学防控。 相似文献
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J. J. De Wijs Frieda Suda-Bachmann 《European journal of plant pathology / European Foundation for Plant Pathology》1979,85(1):23-29
Samples of watermelon mosaic virus (WMMV), consisting of clarified sap of diseased squash plants, were found to be very infective after more than 4 years of storage if the samples had been deep frozen at –18°C, and to have lost most of their infectivity within 4 years of preservation by freeze drying and subsequent storage of the samples at 4°C.Potato virus Y (PVY) inocula, consisting of samples of clarified sap of diseased red peppers, lost their infectivity in less than 4 years if the samples had been deep frozen at –18°C but retained their infectivity for more than 4 years if the samples had been freeze dried and stored at 4°C.A decrease in infectivity of both viruses in the deep frozen at –18°C and freeze dried inocula could be observed even during the first months of storage. However, samples of clarified sap stored in or over liquid nitrogen maintained their activity for at least 22 months for WMMV and 32 months for PVY with no indication of a decrease in infectivity of the viruses. Storage in or over liquid nitrogen seems therefore a very promising long-term preservation method for plant viruses.Samenvatting Watermeloenmozaïekvirus inocula, bestaande uit helder gecentrifugeerd sap van zieke squashplanten, bleken hun infectievermogen zeer goed te hebben behouden na meer dan vier jaar bewaring bij –18°C, maar binnen vier jaar grotendeels te hebben verloren na droogvriezen en bewaren bij 4°C.Overeenkomstig bereide aardappelvirus Y inocula uit zieke paprikaplanten hadden hun infectievermogen binnen vier jaar verloren na bewaring bij –18°C, maar konden hun infectievermogen grotendeels behouden gedurende meer dan vier jaar na droogvriezen en bewaring bij 4°C.Binnen enkele maanden na het begin der bewaringsperiode kon al een afname van het infectievermogen van beide virussen in de diepgevroren (–18°C) en drooggevroren inocula worden gevonden. Helder gecentrifugeerde sapmonsters die in of boven vloeibare stikstof bewaard waren, hadden gedurende tenminste 22 maanden voor het watermeloenmozaïekvirus en 32 maanden voor het aardappelvirus Y hun volle infectievermogen behouden. Bewaring in of boven vloeibare stikstof is daarom de beste van de drie getoetste bewaarmethodes voor opslag op lange termijn van beide virussen. Deze methode lijkt ook veelbelovend voor een groot aantal andere virussen. 相似文献
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The change of freeze-thaw pattern of the Tibetan Plateau under climate warming is bound to have a profound impact on the soil process of alpine grassland ecosystem;however,the research on the impact of the freeze-thaw action on nitrogen processes of the alpine grassland ecosystem on the Tibetan Plateau has not yet attracted much attention.In this study,the impact of the freezing strength on the soil nitrogen components of alpine grassland on the Tibetan Plateau was studied through laboratory freeze-thaw simulation experiments.The 0–10 cm topsoil was collected from the alpine marsh meadow and alpine meadow in the permafrost region of Beilu River.In the experiment,the soil samples were cultivated at –10°C,–7°C,–5°C,–3°C and –1°C,respectively for three days and then thawed at 2°C for one day.The results showed that after the freeze-thaw process,the soil microbial biomass nitrogen significantly decreased while the dissolved organic nitrogen and inorganic nitrogen significantly increased.When the freezing temperature was below –7°C,there was no significant difference between the content of nitrogen components,which implied a change of each nitrogen component might have a response threshold toward the freezing temperature.As the freeze-thaw process can lead to the risk of nitrogen loss in the alpine grassland ecosystem,more attention should be paid to the response of the soil nitrogen cycle of alpine grasslands on the Tibetan Plateau to the freeze-thaw process. 相似文献
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The distribution and metabolic fate of [14C]maleic hydrazide in white ash and black locust seedlings were studied using high-performance liquid chromatography in conjunction with thin-layer chromatography and liquid scintillation spectrometry. Most of the maleic hydrazide was translocated to the leaves and stems of the black locust seedlings within 1 day after treatment but in the case of the white ash seedlings it remained in the stem tissue. After 30 days, the 14C was concentrated in the leaves of the black locust seedlings, but only in the stem and at the injection point of the white ash seedlings. Approximately 40 and 10% of the applied 14C was found at the injection points of the white ash and black locust seedlings, respectively. Chromatographic analysis of extracts showed no detectable metabolite in the black locust seedlings but two metabolites were detected in the white ash seedlings. 相似文献
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使用浸渍法测定了泽漆乳浆及乙醇提取物对桃蚜的室内杀虫作用和拒食作用。结果表明其乳浆物浓度在9.77g/L对桃蚜24h后校正致死率为75.39%,48h后校正致死率为86.08%;其乙醇提取物浓度20g/L24h的校正致死率为60.29%,48h后桃蚜校正致死率为63.06%。通过对泽漆乳浆和乙醇提取物杀虫效果和拒食作用的回归分析,表明不同浓度泽漆乳浆与提取物的触杀作用和拒食作用呈线性关系,且在浓度较大时,乳浆对桃蚜的致死率高于提取物,表明乳浆中对蚜虫致死物质的含量高于乙醇提取物,泽漆中对桃蚜具有致死和拒食作用的物质可能主要存在其乳浆中。 相似文献
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Joana M. S. Cardoso Luís Fonseca Isabel Abrantes 《European journal of plant pathology / European Foundation for Plant Pathology》2012,133(2):419-425
The pinewood nematode (PWN), Bursaphelenchus xylophilus, is the causal agent of pine wilt disease. The international economic impact of the introduction of the PWN into new areas
has highlighted the need for the development of accurate and reliable detection methods of B. xylophilus, which are essential to define aspects of its control and management. In the present study, a methodology was developed for
the direct detection of PWN by conventional PCR assay, with a species specific set of primers based on PWN satellite DNA,
using total DNA extracted directly from maritime pine, Pinus pinaster, wood and bark samples, and from the insect vector, Monochamus galloprovincialis. This methodology involves homogenisation of wood, bark and insects using liquid nitrogen, DNA extraction and one or two
PCR amplification steps, which permit the rapid and direct detection of one single nematode present in 100 mg of wood and
bark and in one entire insect without the preliminary steps of nematode extraction. 相似文献
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土壤冻融温度影响下棉田水盐运移规律 总被引：4，自引：0，他引：4
以新疆北部常年膜下滴灌棉田为研究对象,探讨整个冻融过程中温度对土壤水盐运移规律的影响。研究结果表明：气温对土壤温度的影响随着土壤深度的增加而不断减小,滞后时间不断延长,并且气温对冻土的消融速度远远快于冻结速度,上层冻土消融速度快于下层。土壤水分受温度的影响较大,在冻结期,土壤水分从非冻结层向冻结层缓慢运移;在消融期,下层土壤水分在蒸发作用下不断向上运移。通过监测分析得知,温度间接影响盐分运移,在冻结期,土壤水分运移缓慢,土壤盐分运移变化较小;在消融期,土壤水分运移较为活跃,土壤盐分运移变化较大。在温度快速上升的情况下,土壤水分不断上移, 120～150 cm土壤盐分迅速向上扩散,上层土壤盐分不断增加,威胁膜下滴灌棉田可持续种植。 相似文献
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利用内蒙古赛罕乌拉森林生态系统国家野外观测研究站试验地的森林小气候观测塔,根据2015—2016年冻融期野外观测的气温、降水量、土壤温度和水分数据,对该区季节性冻土的冻融过程和特点进行分析,研究土壤冻结和解冻过程中各土壤层的垂直温度和水分的变化,以及对气温和降水量的响应。结果表明:①季节性冻土的土壤温度随着土层深度增加,土壤冻结和融化滞后天数也会增加,同时与气温的相关性也逐渐减小;②季节性冻土解冻的速度要快于冻结的速度;③在进入解冻期前,3月中旬到5月中旬,各层土壤温度始终保持在-1～1℃之间,不随气温波动;④降水量并不大的解冻期,土壤未冻水含量会迅速增加,说明冻融过程确实能够保存土壤水分,这将有利于植被应对春季干旱。 相似文献
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施用生物炭后土壤生物活性与土壤肥力的关系 总被引：4，自引：0，他引：4
分析了生物炭不同用量条件下土生物活性与土壤主要肥力指标之间的关系。相关分析表明,除蔗糖酶活性和微生物量碳外,土壤其它生物活性指标与土壤容重间呈显著负相关。土壤脲酶和过氧化氢酶活性、微生物量氮和三大类微生物与土壤主要肥力指标间呈显著或极显著正相关。除蔗糖酶外,酶活性与三类微生物数量间显著相关,但蔗糖酶、土壤脲酶、碱性磷酸酶、过氧化氢酶的活性间并不完全显著相关。通径分析表明,脲酶和微生物量氮对土壤肥力影响以直接作用为主,而过氧化氢酶则以间接作用为主。主成分分析结果表明,可以用微生物因子、酶活性因子和速效磷因子进行综合描述土壤肥力特征。其中,各处理综合得分在玉米季大于小麦季,且随生物炭用量的增加而增加,表明高用量生物炭对土壤肥力的提高作用明显。 相似文献
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东北地区春播期土壤水分预测方法研究 总被引：1，自引：0，他引：1
根据东北五个土壤湿度分区春播期土壤相对湿度与气象因子、环流因子相关关系,甄选土壤相对湿度主要影响因子,构建多元线性回归模型以预测4、5月土壤相对湿度。结果表明:(1)五个分区土壤相对湿度与封冻雨、降水量呈正相关,与透雨日期、气温及日照时数呈负相关,且4月份土壤相对湿度与封冻雨及透雨日期的相关性较5月更显著;(2)各分区春播期土壤相对湿度与多项环流因子关系较密切,相关系数绝对值大于0.4且通过信度为0.05的显著性检验,并且这些影响因子主要集中在前一年11、12月;(3)基于关键气象因子和环流指数构建的4、5月土壤相对湿度多元线性回归模型均通过F显著性检验,复相关系数达0.5以上,且模型预测准确率基本在80%以上,精度较高。 相似文献