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1.
哺乳动物腔前卵泡的体内和体外发育 总被引：4，自引：0，他引：4
对哺乳动物包括啮齿类和家畜等卵巢腔前卵泡体内和体外发育,近几年的研究结果进行分析,认为哺乳动物卵巢腔前卵泡体内的发育模式基本相似,但不同动物又具有各自的特点。腔前卵泡在合适的培养条件下能在体外发育并成熟,促性腺激素和生长因子等在其体外发育过程中具有调节作用。发育过程中卵泡质量的鉴定和卵母细胞标准的确定及培养体系的建立是该领域需要解决的问题。 相似文献
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小鼠腔前卵泡体外发育和体外排卵的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
为探明小鼠腔前卵泡体外发育及体外排卵的特征和规律性 ,为利用卵巢资源奠定基础 ,采用机械方法分离未成熟小鼠腔前卵泡进行体外培养 .以 α- MEM加亚硒酸钠、维生素 C,L-谷氨酰胺、丙酮酸钠为基础培养液 ,分组添加 10 %的 2种不同来源的血清和 1μg/ m L FSH.在多卵泡培养体系中 ,培养 9～ 10 d,每天观察其体外发育情况 ,测定卵泡和卵母细胞大小 .培养结束时 ,用 h CG进行体外诱导排卵 .结果表明 :体外培养过程中 ,腔前卵泡贴附培养皿底 ,相互聚集粘附形成团状结构 ,在细胞铺层微滴培养中 ,卵泡呈单个生长 ,并发育形成卵泡腔或腔样结构 ;经9d体外培养 ,小鼠腔前卵泡达到排卵前大小 (>40 0 μm) ,卵母细胞从开始时的 5 3.2 μm生长到 6 8.0～ 70 .8μm,总存活率为 6 1.0 % ;卵母细胞的大小及存活率在不同的血清添加组间差异不显著 ;用 h CG可诱导体外排卵 ,发生卵泡破裂 ,卵母细胞排出 ,卵丘细胞扩展 ,卵母细胞生化泡破裂 ,放出第一极体 .总排卵率达 5 9.5 % .因此 ,采用多卵泡培养体系 ,小鼠腔前卵泡能够发育至成熟排卵 . 相似文献
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为探讨FSH对牛腔前卵泡体外发育的影响,在McCoy’s 5a基础无血清培养液中,分别加入浓度为0、1、10、50及100 ng/mL FSH,观察培养不同时间腔前卵泡的生长和存活情况。结果显示,在培养6 d后添加50及100 ng/mL FSH组腔前卵泡及其卵母细胞直径都较对照组及其他处理组有较大幅度的增长(P<0.01);添加10 ng/mL以上FSH组腔前卵泡在培养后期的体外存活率也有明显提高(P<0.05),表明适宜浓度的FSH对培养后期腔前卵泡体外发育具有显著的促进作用。 相似文献
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表皮生长因子对胎鼠卵巢卵泡体外发育和类固醇激素分泌的影响 总被引：3，自引：0，他引：3
表皮生长因子（EGF）是参与卵巢功能调节的一个重要肽类因子，关于EGF对小鼠胚胎期卵巢卵泡发育和类固醇激素发育的 今未见报道。本研究以单个卵巢的放泡数、生长卵泡数和5个最大卵母 平均直径为卵泡发育优劣的衡量指标，利用我们早期研究建立的无血清培养体系研究了EGF对胎鼠卵巢卵泡发育和类固醇激素分泌的作用。结果发现：①EGF处理组胎鼠卵巢总卵泡数、生长卵九和卵巢内5个最大卵母细胞平均直径从培养第7天起即显著高于ITS对照组直至培养结束；②EGF在培养后期显著促进胎鼠卵巢分泌睾酮，但对雌二醇的基础分泌无影响；③EGF处理组胎鼠卵巢在培养过程的后期引起贴壁的卵巢边缘脱离培养板底壁发生卷边现象，丧失卵母细胞皮持－髓质生长模式。结果提示：EGF在胎鼠卵巢原始卵泡生长起始中起重要作用， 同时EGF促进胎鼠卵巢小腔前卵泡／卵母细胞进一步生长、发育和体外存活；EGF促卵泡发作用与雌二醇的作用无关。 相似文献
5.
【目的】主要探讨水牛腔前卵泡体外培养的影响因素。【方法】采用梳刮法从沼泽型水牛的卵巢中回收得到腔前卵泡，而后用McCoy's5a培养液在96孔培养板中体外培养5～10 d，在显微镜下观测腔前卵泡的形态与增长情况，并用台盼蓝染色鉴定腔前卵泡的存活情况。【结果】在培养液中添加100 µg•L-1的FSH能显著提高腔前卵泡培养5和10 d后的增长幅度，当同时添加50 mg•L-1的维生素C时增长幅度进一步加强；添加50 mg•L-1的维生素C能提高腔前卵泡培养10 d后的形态正常率，但对卵泡增长及存活没有影响；添加50 µg•L-1的EGF能提高腔前卵泡培养5 d的增长幅度，但对培养10 d后腔前卵泡的作用不显著。随着卵泡的直径增加，体外存活率升高，增长的幅度上升，异常率下降。60～100 µm的腔前卵泡用三维培养法（琼脂糖包埋）体外培养10 d的直径增长幅度显著高于二维培养法（琼脂糖铺底）和普通培养法，且形态异常显著低于二维培养法和普通培养法；100～140 µm卵泡用二维培养法培养的增长幅度最大，培养成活率最高。【结论】FSH能促进水牛卵泡的体外增长，维生素C能维持卵泡的正常形态结构，且两者的协同作用显著；水牛卵泡体外发育能力随其体积的增大而增强；三维培养法适宜于培养60～100 µm的卵泡，而二维培养法有利于100～140 µm卵泡的体外发育。 相似文献
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牛小腔前卵泡体外生长发育的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
在添加有ITS、丙酮酸钠、次黄嘌呤、血清、FSH、LH、E2的α-MEM基础液中加入表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维生长因子(bFGF)及氢化可的松（HC），对直径＜100 ?m（平均直径61～70?m）的牛小腔前卵泡进行体外培养。结果表明，试验I，在FSH、LH、E2浓度分别为0.25 ?g·ml-1、5 iu·ml-1、0.5 ?g·ml-1时，卵泡体外培养7 d， EGF和bFGF联合存在好于分别单独存在时的培养效果，当bFGF（25 ng或50 ng）剂量保持不变，提高EGF含量（25 ng,50 ng）有抑制卵泡发育的作用；增加bFGF的剂量有助于腔前卵泡的发育。 试验II，当FSH、LH、E2分别调整到4 ?g·ml-1、10 iu·ml-1、0.1 ?g·ml-1，并添加了氢化可的松（40 ng·ml-1），卵泡体外培养13 d，在试验3组（EGF 25ng）和试验4组（EGF 25 ng+ bFGF 50 ng），卵泡发育率和卵泡平均增长直径均显著好于试验1组（未添加EGF、bFGF、氢化可的松）和试验2组（只添加氢化可的松）。体外培养第20 d，试验3组和试验4组卵泡发育率分别为15.79 %和25.58 %，卵泡最大增长直径分别为300和320 ?m，并形成小的卵泡腔（成腔率分别为7.69 %和17.65 %），而试验1组和试验2组其卵泡发育率均为0。表明体外培养腔前卵泡时，不同的培养体系对其生长发育有十分重要的影响，各种成分之间存在互作的关系。 相似文献
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小鼠腔前卵泡的分离采集和体外成熟研究 总被引：3，自引：0，他引：3
采用机械法和酶法结合机械法分离采集小鼠卵巢 ,每只小鼠可获腔前卵泡 5 3 2 5和 5 7 2 9枚 (P <0 0 5 )。成年小鼠腔前卵泡在体外培养 9d ,换用成熟培养液继续培养 2 4～ 2 8h后 ,3种不同培养系统中卵泡的成熟分裂率分别为 5 47%、3 85 %和 9 31%。表明EMEM +5 %FCS +0 2 3mmol/mL丙酮酸钠 +2 0 μg/mLFSH +0 0 5mmol/mL次黄嘌呤 +2 0 0IU/mL青 -链霉素培养系统可以使小鼠腔前卵泡卵母细胞在体外发育达到成熟 相似文献
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在哺乳动物卵泡发育过程中,卵泡腔的形成和扩张、排卵、黄体化以及闭锁等伴随明显的组织重塑。卵泡膜细胞和颗粒细胞的细胞外基质及卵泡液中含有大量的明胶蛋白、纤维蛋白和Ⅳ型胶原蛋白等,这些活性蛋白为卵泡膜细胞和颗粒细胞的迁移、增殖和分化提供了必要条件。基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases 2,MMP2)和酶-9(MMP9)在其他MMPs、雌激素、凋亡和自噬信号通路的协同作用下,分解细胞外基质和卵泡液中的明胶蛋白、纤维蛋白和Ⅳ型胶原蛋白等,促进细胞凋亡和血管生成,使卵巢组织发生降解和重塑,进而影响卵泡膜细胞和颗粒细胞的功能、卵泡腔的形成及扩张,调控卵泡的生长发育。针对MMP2和MMP9调节卵泡生长、排卵、黄体化及闭锁的研究进展进行综述。 相似文献
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本实验把牛卵母细胞的整个发育过程分为4个阶段,对每个阶段卵母细胞的细胞核微细结构进行了研究。静止期卵母细胞的核仁是由颗粒性染色丝缠绕形成。卵泡腔形成时,核仁中出现纤维中心。直径2毫米以上卵泡中的卵母细胞核仁变得致密、均质,在一端形成纤维帽。体外培养24小时的卵泡卵母细胞已经成熟,生发泡崩解。在卵母细胞的发育过程中,核孔越来越明显,密度增加,而核周隙则越来越难以分辨。 相似文献
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介绍了哺乳动物小腔卵泡卵母细胞体外成熟的研究现状,对小腔卵泡卵母细胞体外成熟的采集方法、培养时间、血清、激素等影响因素进行了分析,指出了存在的问题及解决办法. 相似文献
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猪腔前卵泡的体外培养 总被引：1，自引：0，他引：1
为确定不同基础培养液和培养方法对猪腔前卵泡体外培养的影响,试验采用了M199和NCSU23两种基础培养液及96孔培养板法、凹窝培养法和颗粒细胞铺层培养法对猪腔前卵泡进行体外培养。结果表明:培养在M199的腔前卵泡生长显著快于培养在NCSU23的腔前卵泡,培养在该2组的猪腔前卵泡前5 d的生长速度都极显著地高于后5 d的生长速度,而腔前卵泡的成腔率和存活率没有明显差异;培养在凹窝培养体系的腔前卵泡生长速度显著低于96孔培养板法,但凹窝培养体系可以显著地增加腔前卵泡的存活率。同时证明,颗粒细胞铺层培养法对腔前卵泡生长没有显著影响。 相似文献
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小鼠腔前卵泡卵母细胞的采集、体外发育和体外成熟 总被引：1，自引：0，他引：1
采用机械法分离成年小鼠和１３日龄小鼠腔前卵泡，两组中每只小鼠平均回收率分别为４９２９±１０８１和７６８３±９１５个；腔前卵泡卵母细胞培养１０天后，两组恢复成熟分裂卵的比例分别为１９３％和２０９％。试验结果表明，小鼠腔前卵泡卵母细胞在培养后第５天开始发生ＧＶＢＤ，此后，ＧＶＢＤ和抛出ｐｂＩ的卵母细胞数量逐日增加。 相似文献
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Φ60~150μm牛腔前卵泡在有、无促性腺激素存在下,分别添加0、10%、15%、20%牛卵泡液(BFF)的McCoy′s 5 a无血清系统体外培养15 d,测定其雌二醇(E2)分泌量。结果显示:各添加卵泡液组在培养3、6、9、12 d的E2分泌量均显著高于对照组(0组)(P<0.01)。当培养液中有促性腺激素(FSH、LH)存在下,各添加卵泡液组的E2分泌量更高,其中添加10%牛卵泡液组中Φ>100μm腔前卵泡在培养6 d时E2分泌量达最高,为48.96±11.54 pg/mL。表明培养液中添加一定比例牛卵泡液(BFF)可显著刺激体外培养腔前卵泡E2的分泌,促性腺激素存在下更加强了卵泡液对E2分泌的刺激作用。 相似文献
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卵泡大小及卵泡液对牛卵母细胞体外受精后发育的影响 总被引：6，自引：2，他引：6
以屠宰场牛卵巢为材料，研究了卵泡大小和卵泡液对牛卵母细胞体外成熟、受精和培养后发育潜力的影响。试验1：按照卵泡大小将卵丘卵母细胞复合体（COCs）分为4个试验组：＞8 mm组、2～8 mm组、腔前卵泡（PF）卵母细胞组和混合（将前3种卵母细胞混合）组。结果表明，卵泡大小直接影响卵母细胞受精后的发育，同时，源自不同大小卵泡的卵母细胞混合培养，可以促进未成熟的腔前卵泡内卵母细胞的发育。试验2：将源自优势卵泡（＞8 mm）、小卵泡（2～8 mm）和混合（所有卵泡液混合）的牛卵泡液（BFF），按照10%添加到成熟培养液中，3个试验组的卵裂率和囊胚率均高于没有添加BFF的对照组(P<0.05)，但添加10%的优势卵泡液使卵母细胞和胚胎发生粘连，易于造成丢失。试验3：与未添加BFF的对照组相比，成熟培养液中分别加入10%、20%和40%的混合BFF，均可明显促进卵母细胞受精后的发育(P<0.05)，但20%组和40%组出现卵母细胞及胚胎粘连。因此，成熟培养液中添加10%的混合BFF较为适宜。 相似文献
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雌性生殖细胞印迹的获得发生于小鼠的卵子发生过程中,本研究以颗粒细胞分化前后的卵泡卵母细胞为研究对象,利用重亚硫酸盐测序法,对卵泡腔形成前后的卵母细胞中Igf2r和Peg3两个印迹基因的甲基化状况进行了分析。颗粒细胞分化前,卵母细胞Igf2r和Peg3两个印迹基因DMR区CpG位点的甲基化比率分别为80.67%和82.78%;颗粒细胞分化后的早期有腔卵泡卵母细胞中,卵母细胞Igf2r和Peg3两个印迹基因DMR区CpG位点的甲基化比率分别为82%和83.89%。可见,卵泡腔的形成对于直径相同的卵泡卵母细胞印迹基因甲基化的建立没有影响。 相似文献
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山羊腔前卵泡的分离 总被引：9，自引：0，他引：9
采用两种方法分离山羊卵巢腔前卵泡。方法１（Ｍ－１）：将卵巢剪成碎块（＜３ｍｍ）,用０１％胶原酶消化处理,吸管吹打,离心洗去胶原酶并置入网筛内过筛后检卵。方法２（Ｍ－２）：用组织切碎机将卵巢切成碎块,经吸管吹打制成的组织悬液置入网筛内过筛后检卵。将不同年龄山羊对称分成两组,Ｍ－１和Ｍ－２分离的腔前卵泡头均数分别为１１６４和１３８３个,其中正常卵泡比例分别为２９６％和２７４％,差异不显著（ｐ＞００５）。采用Ｍ－１分离初情期前山羊腔前卵泡效果最佳,平均每只羊可获得１６０８２个腔前卵泡,其中正常卵泡数平均为４９３６个;而在成年山羊则分别为３５００和６６７个（ｐ＜００１）。采用Ｍ－２分离成年山羊腔前卵泡头,其效果明显优于Ｍ－１（ｐ＜００５）。 相似文献