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RNAi技术(RNAinterference)即RNA干扰技术.是由一个双链RNA(dsRNA)来代替传统的反义核酸进行转录而产生的基因沉默现象。其特异性强、稳定性高、高效快捷,已在生物学研究领域得到广泛而有效地应用。本文主要介绍RNAi的作用机理以及RNAi技术在植物育种中的应用现状和前景。 相似文献
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RNA干扰技术(RNAinterference,简称RNAi)是指将双链RNA(即dsRNA)导入生物或细胞内,引起与其同源的mRNA特异性降解,因而抑制其相应基因表达的过程。它具有高效、快捷、特异性强等特点。目前,它的作用机制已基本清楚,有广阔的应用前景。本文从RNAi的发现、分子机制、作用特点和RNAi技术的应用等方面进行了综述。 相似文献
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RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由非编码的小分子双链RNA引发的序列特异性转录后基因沉默现象,普遍存在于线虫、真菌、昆虫和动植物等多种生物中。近年来,RNAi技术在昆虫中的成功应用为一系列新颖的、环境友好的害虫防治策略提供了理论依据。文章综述了RNAi技术的作用机制、dsRNA吸收机制及在害虫防治等领域的研究成果,并展望了该技术的应用前景。 相似文献
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RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种高度保守的、基于RNA水平的特异性降解机制,它通过特异性地抑制基因的表达来快速、简便以及大规模地鉴定基因的功能。虽然dsRNA不能应用于哺乳动物,但是小分子干扰型RNA(siRNA)的技术却证明RNAi可以成功应用于哺乳动物。近年来,RNAi技术在哺乳动物中得到了飞速发展和广泛应用,包括设计更加合理、更加有效的siRNA,在更多的已经分裂或者尚未分裂的细胞系中诱导RNAi,通过瞬时RNAi或转基因RNAi在活体动物中抑制基因的表达,建立时空调控或组织特异性的RNAi以及利用RNAi对哺乳动物基因组功能进行大规模的筛选和鉴定。本文对近几年RNAi在哺乳动物中的研究新发展进行综述。 相似文献
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水稻高效RNA干涉体系的建立及其在受体激酶基因功能研究中的应用 总被引:8,自引:0,他引:8
利用RNA干涉(RNAi)技术,可以特异性的抑制真核生物体中目标基因的表达。本研究构建了适合水稻转化的RNAi诱导载体pCADS1341。为检测其有效性,使用它构建了针对GUS基因的RNAi载体,并利用基因枪转化法导入GUS基因稳定表达的转基因水稻愈伤组织。GUS染色分析结果表明该载体中RNAi诱导元件的瞬时表达可显著抑制GUS基因的表达。为探讨影响水稻中转基因诱导的RNAi效率的因素,对针对某个目标水稻基因的水稻RNAi植株进行了详细的分析。通过Southern和Northern杂交检测了T0代RNAi植株中T-DNA插入的拷贝数和目标基因的表达量,筛选出T-DNA为单拷贝插入,且目标基因的表达被高效抑制的株系。对来源于该株系的T1代植株进行了半定量RT-PCR检测,结果表明RNAi效应可以遗传给后代转基因水稻植株,但是不同个体中的RNAi效率存在差异。RNAi系统的表达量可能是决定RNAi效率的最关键因素。我们建立的高效RNAi技术体系对于水稻功能基因组学研究具有重要意义,利用这个系统我们已经构建了60多个水稻受体激酶基因的RNAi载体,系统的研究正在进行中。 相似文献
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siRNA对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)复制的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
RNA干涉(RNAi)可以通过短双链RNA(siRNA)介导,特异地降解相应的mRNA,从而抑制基因表达,导致转录后水平的基因沉默(PTGS)。本研究利用这种技术,将鸡传染性支气管炎病毒(IBV)感染体外培养的Vero-E6,使其适应Vero-E6,然后用体外转录合成的针对IBV部分基因的siRNA,对其复制进行RNAi。结果显示,针对IBVM蛋白的siRNA能有效地抑制IBV在Vero-E6细胞中的复制。 相似文献
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Ancient pathways programmed by small RNAs 总被引:1,自引:0,他引:1
Zamore PD 《Science (New York, N.Y.)》2002,296(5571):1265-1269
Double-stranded RNA can now be used in a wide variety of eukaryotes to suppress the expression of virtually any gene, allowing the rapid analysis of that gene's function, a technique known as RNA interference. But how cells use the information in double-stranded RNA to suppress gene expression and why they contain the machinery to do so remain the subjects of intense scrutiny. Current evidence suggests that RNA interference and other "RNA silencing" phenomena reflect an elaborate cellular apparatus that eliminates abundant but defective messenger RNAs and defends against molecular parasites such as transposons and viruses. 相似文献
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siRNA对鸡胚成纤维细胞中GAPDH基因表达的抑制作用 总被引:3,自引:1,他引:2
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是通过短双链RNA(small interference RNA,siRNA)介导的特异性抑制相应基因表达的新技术。作为研究基因功能的有效手段,该技术已在线虫、果蝇、斑马鱼和鼠等动物中进行了应用。本研究利用体外转录合成的短双链干扰RNA(siRNA),针对鸡的管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH),在鸡胚成纤维细胞中对其表达进行干扰。结果显示siGAPDH能有效阻断GAPDH基因在鸡胚成纤维细胞中的表达,而不相关的siRNA则对该基因的表达没有影响,证明在鸡细胞中也存在RNA干扰现象,为利用RNAi技术对鸡的基因功能研究奠定了一定基础。 相似文献
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Domeier ME Morse DP Knight SW Portereiko M Bass BL Mango SE 《Science (New York, N.Y.)》2000,289(5486):1928-1931
Double-stranded RNA (dsRNA) inhibits expression of homologous genes by a process involving messenger RNA degradation. To gain insight into the mechanism of degradation, we examined how RNA interference is affected by mutations in the smg genes, which are required for nonsense-mediated decay. For three of six smg genes tested, mutations resulted in animals that were initially silenced by dsRNA but then recovered; wild-type animals remained silenced. The levels of target messenger RNAs were restored during recovery, and RNA editing and degradation of the dsRNA were identical to those of the wild type. We suggest that persistence of RNA interference relies on a subset of smg genes. 相似文献
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探讨了RNA干扰技术的分子机制及其在农业分子育种中的应用,随着研究的深入,RNA干扰必将成为遗传育种工作者改良作物品质,培养抗虫、抗病毒新品种的有力手段。 相似文献
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构建DjStag基因的RNA干扰表达载体,诱导表达产生dsRNA后喂食涡虫,观察DjStag表达变化及对涡虫再生的影响。本文以含有东亚三角涡虫DjStag基因的pcDNA3 DjStag重组质粒为模板,经PCR 扩增目的片段,将其克隆到干扰载体L4440 上,构建重组质粒L4440 DjStag后转化入大肠杆菌HT115感受态细胞中, IPTG 诱导表达dsRNA后喂食涡虫。显微观察涡虫再生过程中的表型变化,Real time PCR检测干扰后涡虫DjStag基因表达的变化。结果表明,成功构建了DjStag基因的RNA干扰表达载体;DjStag基因 RNA干扰后,涡虫不能正常再生,再生片段显示出明显的再生缺陷;涡虫体内DjStag基因的表达受到抑制,DjStag mRNA的表达水平显著下降。 相似文献
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RNA干涉及其应用 总被引:1,自引:0,他引:1
在各种各样的真核生物当中,双链RNA(dsRNA)促使了有效的同源mRNA分子降解,这个过程被称为RNA干扰(RNAi)。RNAi现象通过调控RNA抑制基因表达,它在植物、动物、真菌中广泛存在,被认为是一种抑制病毒性复制和转座子活动的抗御机制,而在此过程中,侵染型病毒为了能够不被这种机制干扰抑制,继续在寄主体内生存、繁殖,则产生了一种反抗御机制———即产生抑制蛋白来对付转录后基因沉默(PTGS)。对RNAi以及RNAi抑制物的作用机制、抑制物类型、特点及相关应用方面作了比较详尽的综述。dsRNA介导的PTGS将是分子生物学领域的研究热点之一,在研究基因功能,基因治疗,抗病毒基因工程,解剖和调控次生代谢途径等方面有着广泛的应用前景。 相似文献