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本试验用犊牛睾丸细胞制备猪瘟细胞活疫苗,结果表明,EDTA胰酶加0.4%粉红消化细胞的病毒收获液检测兔子体温效果最好。 相似文献
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为了寻找消化细胞温和且对细胞生长影响小的消化液,为生产疫苗提供更好细胞状态的PK15细胞,本试验使用0.25%胰酶A与0.25%胰酶B消化PK15细胞。两种胰酶均在常温中消化细胞且各分两组,一组消化完弃去消化液终止消化,另一组消化完不弃去消化液直接加入营养液终止,分种后进行培养观察。主要观察两种胰酶的消化终止时间、细胞分散效果、24 h细胞状态及两种胰酶消化时消化液弃去与不弃去的细胞状态。结果表明0.25%胰酶A消化PK15细胞,无论消化液弃去与不弃去,消化时间均为5~6 min,分散效果均较好且细胞状态都好。而0.25%胰酶B消化PK15细胞,消化时间均为1~2 min,消化液弃去,消化效果较好且细胞状态好;消化液不弃去,分散效果不好且细胞状态较差,生长较缓慢。消化PK15细胞时0.25%胰酶A较0.25%胰酶B更温和,0.25%胰酶A对细胞损伤较小。 相似文献
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为了研究猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞的分离培养体系,根据取样组织的不同,筛选出最佳的培养方法,试验以猪胎儿和耳皮肤为试验材料,用4种不同的培养分离方法,即胰酶热消化法、胰酶冷热结合消化法、胰酶室温消化法和组织块培养法,分离培养猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞,对比培养效果,筛选出最佳的培养方法。结果表明:胰酶室温消化法分离的猪胎儿成纤维细胞存活率显著高于胰酶热消化法和胰酶冷热结合消化法(P<0.05),细胞贴壁效果好,且操作简单;猪耳皮肤成纤维细胞原代培养中,胰酶热消化法和胰酶室温消化法分离的细胞数量少,组织块培养法所需的组织量少,且较胰酶冷热结合消化法操作简单。试验中培养的细胞呈典型的成纤维细胞形态,生长曲线呈"S"型,经冻存复苏后生长状态良好,说明胰酶室温消化法是猪胎儿成纤维细胞较好的培养方法,胰酶热消化法和胰酶室温消化法是猪耳皮肤成纤维细胞原代培养的理想培养方法。 相似文献
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在不利用冷冻保护剂的条件下,用犊牛血清对经胰酶消化分散的犊牛睾丸原代细胞进行超低温冷冻保存试验。结果表明,解冻后细胞成活率达75.73%以上,培养时可有效形成单层细胞,满足常规试验要求。复苏后的犊牛睾丸原代细胞于体外培养时存在贴壁迟缓,前期生长速度较慢等现象,且要求pH值低于7.0。 相似文献
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IBRS- 2传代细胞较常用的 BHK- 2 1传代细胞在工业化转瓶培养大生产中难培养。经过一段时间的传代实验 ,选择对其适应的营养液和对消化时间的掌握 ,使该细胞传代稳定 ,细胞形态清晰 ,2～ 3d形成致密单层 ,在大生产中可广泛采用。1 材 料1 .1 IBRS- 2细胞种 由中国兽药监察所提供。1 .2 MEM干粉 由美国 Hyclone公司提供。1 .3 血清 来源杭州、郑州 ,均为经滤过除菌的犊牛血清。1 .4 胰酶 - EDTA 由中国科学院新疆化学研究所生化试剂厂提供 ,并经钴 60辐射处理 ,本厂配制。1 .5 Na HCO3 溶液、抗生素、L -谷胺酰氨 … 相似文献
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本试验用半胚法制备鸡胚成纤维细胞,用胰酶对SPF鸡胚进行消化培养,并观察所得细胞的生长情况。在相同条件下设立两个对照组,观察胰酶在细胞制备过程中对试验的影响,并比较不同厂家(Gibco和Difco)生产的胰酶在相同条件下对鸡胚消化情况及所得细胞生长情况的影响。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2016,(1)
为了确定较好的小鼠脾细胞分离培养方法,在不同培养时间(培养当天、第3天、第6天、第9天)条件下,分别采用改良胰酶消化法、组织块直接培养法和机械分离培养法培养小鼠脾细胞,试验进行细胞形态学、增殖生长曲线和细胞活力曲线对比研究。结果表明:不同培养方法对小鼠脾细胞的细胞学形态和细胞活力均有影响。改良胰酶消化法培养的细胞其细胞活力比组织块直接培养法和机械分离培养法培养的细胞活力好,而在细胞形态学的比较中,改良胰酶消化法培养的原代小鼠脾细胞与其他两组相比,培养情况最好,数量较多,形态完整,贴壁较好。证明改良胰酶消化培养法能够较好地培养小鼠脾细胞,进一步完善了小鼠脾细胞原代培养的方法。 相似文献
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小鼠输卵管上皮细胞的原代培养及纯化方法研究 总被引：2，自引：0，他引：2
建立小鼠输卵管上皮细胞原代培养及纯化方法.小鼠输卵管上皮细胞原代培养采用组织块培养法和酶消化法.酶消化法于37℃分为4个处理组进行.处理1以2.5 g/L胰酶+0.4 g/L EDTA消化5、10、20 min;处理2以0.5 g/L胰酶+0.08 g/L EDTA消化35、50、75 min;处理3以0.3 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60、90、240 min;处理4以2.5 g/L胰酶+0.4 g/L EDTA和0.3 g/L Ⅰ型胶原酶(1∶2)消化60 min,150 min.原代细胞纯化采用差速贴壁和反复差速贴壁法.传代采用胰酶两步消化法进一步纯化输卵管上皮细胞.组织块法原代培养成纤维细胞生长优势明显,传代纯化细胞效果不佳.用酶消化法原代培养时,处理1效果不理想;处理2采用3个消化时间时均取得比较理想的结果;处理3消化240 min时结果较好;处理4消化150 min效果较好.原代细胞纯化,反复差速贴壁得到的上皮细胞较纯,进一步传代纯化细胞取得了理想的结果.小鼠输卵管上皮细胞原代培养采用酶消化法结合反复差速贴壁分离纯化细胞,传代采用两步消化法,可以成功地进行小鼠输卵管上皮细胞的分离纯化培养. 相似文献
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HS Ramesh PSP Gupta S Nandi BM Manjunatha V Girish Kumar JP Ravindra 《Reproduction in domestic animals》2008,43(5):520-524
The effect of co‐culture of buffalo preantral follicles (PFs) with different somatic cells, i.e, cumulus, granulosa, ovarian mesenchymal and oviductal epithelial cells was studied. Large PFs (250–450 μm) were isolated by microdissecting the trypsin (1%) digested ovarian cortical slices. Cumulus cells were isolated by repeated pipetting of oocytes, granulosa cells were isolated by aspirating from punctured PFs and ovarian mesenchymal cells were isolated from ovarian cortex by scraping the cortical slices and passing through 20 μm filter. Preantral follicles were cultured in standard culture medium without somatic cells or co‐cultured with cumulus cells, granulosa cells, ovarian mesenchymal cells and oviductal epithelial cells for 80 days. The growth rate (μm/day) of the PFs was monitored by measuring follicular diameter on day 0, 30, 60 and 80 days of culture. The viability of PFs was evaluated by trypan blue staining. The results indicated that PFs co‐cultured with cumulus, granulosa and ovarian mesenchymal cells had a better development and survivality compared with control and those co‐culture with oviductal epithelial cells. Maximum growth and survivality of PFs were achieved when cultured with cumulus cells. It is concluded that inclusion of somatic cells in PF culture media had beneficial effect on the growth of PFs and cumulus cells supported maximum growth and survivality of PFs in vitro of all somatic cells tested. 相似文献
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一株高度黏连的枯草芽孢杆菌的活菌计数 总被引：1，自引：0，他引：1
为了对1株自中草药中分离得到的菌落高度黏连的高产细菌素枯草芽孢杆菌进行有效的活菌计数,试验采用普通平板稀释法进行活菌计数,并对生理盐水、灭菌水、各种PBS、空白培养基等各种不同的稀释液进行比较研究。结果表明:生理盐水、灭菌水、各种PBS均无法将菌团分散,难以形成有效的活菌计数梯度,只有以该菌株的空白培养基作为稀释液时,才能使菌体分散均匀,稀释梯度明显,计数结果准确,重复性好。说明在活菌计数中,空白培养基可能是某些特殊菌株(如菌落高度黏连)的理想稀释液。 相似文献
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本研究旨在建立浏阳黑山羊瘤胃上皮细胞的体外培养模型,并对其周期分布、增殖和凋亡特点进行研究。试验采集60日龄浏阳黑山羊的瘤胃上皮组织,应用0.25%胰蛋白酶+0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)消化法对山羊瘤胃上皮组织进行消化,得到单个的山羊瘤胃上皮原代细胞进行体外培养。通过倒置显微镜对原代和传代培养阶段细胞形态进行观察,采用细胞计数法检测细胞的生长活性,应用细胞免疫组化学方法对传代细胞进行鉴定,并用流式细胞术检测山羊瘤胃上皮传代细胞周期分布情况和凋亡比率。结果显示:1)经0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA消化获得的山羊瘤胃上皮原代细胞,培养1 d开始贴壁生长,2 d开始生长较快(对数期),呈典型的"波峰"状生长,3~4 d生长最为迅速,7 d生长速度平稳(平台期)。2)经细胞免疫组化学方法的鉴定,细胞胞浆为黄褐色,即细胞角蛋白19呈阳性表达。3)膜联蛋白-V/碘化丙啶联合染色显示,随着培养时间的延长,细胞凋亡比率显著增加(P0.01)。结果表明,通过0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA的消化方法成功得到了浏阳黑山羊瘤胃上皮细胞,可为今后研究反刍动物瘤胃相关机制与功能提供模型。 相似文献
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本研究旨在确定猪流行性腹泻病毒（PEDV）变异株CH/GX/750A/2015株在Vero细胞上转瓶培养的最佳条件，为大规模生产高效PEDV变异株疫苗提供技术支撑。试验以10 L转瓶培养病毒，对接毒时细胞维持液中胰酶浓度（0、2、4、6、8和10 μg/mL）、细胞密度（40%、60%、80%、100%、200%）、接毒剂量（MOI分别为1、0.1、0.01和0.001）、吸附时间（0、30、60、90、120、240 min）、收毒时间（接毒后12、24、36、48、60、72 h）、维持培养温度（35、36、37和38 ℃）和转瓶转速（6、8、10、12、14、16 r/h）7个条件进行优化。结果显示，PEDV CH/GX/750A/2015株在10 L转瓶中的最佳培养条件为：细胞刚铺满单层时接毒，接毒量为MOI=0.01，维持液（无血清DMEM培养液）中胰酶质量浓度为6 μg/mL，不需吸附，维持培养温度为37 ℃，12 r/h 旋转培养48 h后收获病毒液可获得较高效价的病毒液，效价可稳定达到106.50 TCID50/0.1 mL。本试验为 PEDV 变异株大量培养提供了参考，为变异株疫苗研发奠定了基础。 相似文献
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用60Coγ射线对不同状态不同体积的鸡新城疫病毒(NDV)、H9N2亚型禽流感(H9N2 AIV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)进行辐照,研究60Coγ射线对灭活疫苗中病毒的灭活效果。结果表明,6.0 kGy 60Coγ射线辐照对冷冻和液态下5000和10000 mL的NDV、H9N2亚型AIV和PRRSV均不能灭活,辐照后NDV和H9N2亚型AIV冷冻尿囊液的HA效价降低而液态尿囊液的HA效价升高;液态下,60Coγ射线能够灭活250 mL细胞培养液中的PRRSV,不能灭活250、5000和10000 mL尿囊液中的NDV和H9N2 AIV,250 mL与5000、10000 mL的NDV HA效价间差异显著(P＜0.05)。60Coγ射线辐照对液态的PRRSV细胞培养液灭活效果良好,有望用于灭活苗的病毒灭活。 相似文献
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T Matsuzawa T Hoshino J Ibuki 《The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science》1992,54(5):1043-1046
The alteration of trypsin resistance in rat sperm head was investigated after the sperm were incubated in the culture media (199-Earele, 1% BSA) containing the inhibitors of protein synthesis. The head of non-incubated testicular sperm was easily digested by trypsin (1 mg/ml) while the head of the incubated sperm showed resistance to trypsin digestion after 3 hr-incubation. Trypsin resistance in epididymal sperm head did not change after the sperm was incubated. Neither cycloheximide (100 micrograms/ml) nor chloramphenicol (100 micrograms/ml) affected the trypsin resistance in the testicular sperm head. 相似文献
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Six culture media were evaluated for the optimization of β-toxin production by Clostridium haemolyticum (strain IRP-135) using both batch and dialysis culture techniques. The lethal component of β-toxin remained active for 13 days when maintained at 37°C but was inactivated by heating at 60° for 20 min. A 1 : 10,000 dilution of trypsin inactivated the toxin in 15 min. Preliminary data from electrophoresis in SDS acrylamide gel indicate the molecular weight of the β-toxin to be approximately 32,000. 相似文献
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探讨不同的灭菌条件,对实验动物配合颗粒饲料(鼠料)中营养成分的影响。采用不同时间的高压蒸汽(121℃、0.14 MPa)(蒸汽灭菌)和不同剂量的60 Co-γ射线照射(照射灭菌)对鼠料灭菌,依据国标做细菌培养,观察灭菌条件及效果,并对鼠料进行营养成分的测定。结果表明,20 min蒸汽灭菌和20.0 kGy剂量60 Co-γ射线照射时细菌培养为阴性;蒸汽灭菌比照射灭菌更容易造成营养成分的破坏,两种方法差异显著(P<0.05),且不同时间下水分、粗蛋白、粗脂肪、赖氨酸、蛋氨酸、胱氨酸、苏氨酸、异亮氨酸及维生素的损失都有显著差异(P<0.05),矿物质除铁外损失无显著差异(P>0.05);不同剂量照射下,各种营养成分的损失差异不显著(P>0.05)。鼠料消毒灭菌的适宜条件为20 min蒸汽灭菌或20.0 kGy照射灭菌;蒸汽灭菌对鼠料的营养成分影响较大,而照射灭菌则影响较小。 相似文献
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In vitro experiments were conducted with trypsin and Na-Benzoyl-l-arginine-p-nitroanilid (L-BAPA) as substrate. The aim of the work was to explore the influence of additional Cu2+, Zn2+, Co2+, Ni2+ and Fe3+ ions in the reaction mixtures on the trypsin activity at different enzyme-substrate ratios (E : S = 1 : 100; 1 : 50; 1 : 10; 1 : 5). The reaction conditions were chosen according to the steady-state conditions of the tryptic hydrolysis. The trypsin activity increased by adding small amounts (4.5 X 10(-7) mol Cu2+/l) and decreased by adding higher amounts of Cu2+ ions. There was no influence of the E : S ratio. The tryptic activity was only partly influenced by the substrate concentration when the other trace elements were added to the reaction mixtures. These results may explain in part the improved protein digestibility which is reported when 250 mg Cu/kg are added to pig feeds. 相似文献
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家蚕一种新的胰蛋白酶基因电子克隆和序列分析 总被引：5，自引：0，他引：5
以按蚊胰蛋白酶基因的氨基酸序列为信息探针,对家蚕EST数据库进行同源检索筛选,克隆了家蚕一种新的胰蛋白酶基因.该基因编码271个氨基酸,与按蚊胰蛋白酶的一致性为32%,含有典型的胰蛋白酶功能结构域Tryp-SPc,但在催化三联体中His不保守,被Tyr替代. 相似文献