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通过构建斜带石斑鱼垂体cDNA文库,克隆了其生长激素(GH)全长cDNA。斜带石斑鱼GH全长cDNA为955bp,编码的多肽为204aa。应用PCR方法把编码GH成熟肽的cDNA片段克隆到表达载体pET-15b,在大肠杆菌BL21(DE3)表达N端含6个组氨酸的融合多肽。SDS-PAGE结果表明,0.4mmol·L-1IPTG诱导表达的蛋白约为24kDa,主要为不溶性的包含体。细菌裂解液沉淀溶于6mol·L-1盐酸胍后,用Ni2+-NTA树脂进行亲和分离纯化,纯化产物在SDS-PAGE上表现为一条24kDa的蛋白带。在黑鲷GH放射免疫分析系统中,纯化产物能与黑鲷GH竞争结合GH抗体,表明大肠杆菌表达的斜带石斑鱼GH融合多肽具有GH免疫活性。 相似文献
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《水产科学》2021,(5)
钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)为参与细胞内pH及细胞增殖调控的关键因子。用RACE末端PCR方法得到黑鲷CHP2(AsCHP2)基因全长cDNA,并利用生物信息学方法分析该基因的序列特征与同源性;同时利用实时荧光定量PCR方法检测AsCHP2的mRNA在黑鲷整体仔鱼,90 d、180 d黑鲷,杂交F_2(真鲷♂×黑鲷♀)及回交F_1(黑鲷♂×杂交F_1♀)的脑、心脏、肌肉、肝脏和性腺等组织中的表达。研究结果表明:(1)AsCHP2 cDNA序列全长1722 bp, 5′-非编码区(UTR)长度69 bp, 3′-UTR长度1069 bp,开放阅读框长度为585 bp,编码194个氨基酸;其结构域包含2个EF-hand结构及1个核输出信号;其蛋白分子质量为21.87 ku,理论等电点为4.89;同源建模获得了CHP2的二级与三维结构。AsCHP2基因的核苷酸序列与其他鱼类的相似性为86%～81%,编码的氨基酸序列与其他鱼类的相似性为80%～72%。邻接系统树显示了黑鲷CHP2氨基酸序列与其他鱼类的进化关系。序列比对与结构分析表明,AsCHP2基因具有典型的CHP2基因结构。(2)AsCHP2的mRNA在黑鲷的仔鱼期(5～35 d)及大规格个体的脑、肝脏及肌肉组织中均有表达,在90 d个体各组织中的表达量均高于在180 d个体各组织中的表达量;在180 d黑鲷、杂交F_2及回交F_1的个体中,基因在脑、肝脏、肌肉及性腺等不同组织中均有表达,且均在心脏中高表达、在性腺中低表达。这些结果显示,CHP2基因在海水鱼类的生长、发育过程中发挥功能。 相似文献
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细胞色素P450(CYP)302a1是昆虫蜕皮激素合成通路中的关键酶,为了研究其在三疣梭子蟹蜕皮过程中的调控作用,实验采用反转录PCR(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(RACE)技术,克隆得到了三疣梭子蟹CYP302a1全长cDNA序列(GenBank登录号:KM596851).该序列全长为3 171 bp,包含一个长度为1 626 bp的开放阅读框,编码541个氨基酸;序列分析显示该氨基酸含helix-C、helix-K、helix-I、PERF及heme-binding共5个P450特征保守区域;系统进化树分析发现三疣梭子蟹CYP302a1与日本剑水蚤CYP302a1聚为一小支,再与其他物种CYP302a1聚为一支.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析了CYP302a1在不同组织和蜕皮过程中的表达水平变化.结果显示,CYP302a1的表达量在Y器中最高,而在其他组织中均极低(P＜0.05);蜕皮过程中,CYP302a1在蜕皮后期(A、B期)表达量最低,从蜕皮间期(C期)开始上升,至蜕皮前期的D1亚期达到最大值,随后下降.结果表明CYP302a1在三疣梭子蟹蜕皮调控中可能起着重要作用. 相似文献
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饲料维生素E水平对黑鲷鱼抗氧化能力和鱼肉货架期的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
探讨了饲料维生素E水平对黑鲷抗氧化酶活力和肉品质的影响.300尾平均初重为(350±12)g黑鲷随机分成3组,放入9个网箱.饲料中添加3个水平的维生素E(250、500和1 000 mg/kg α-生育酚乙酸酯),饲养8周.结果发现:(1)随着饲料中维生素E添加量的增加,黑鲷血清SOD、CAT酶活力明显上升,其中VE 1 000组最高,VE 1 000和VE 500组显著高于VE 250组(P＜0.05);(2)饲料维生素E含量对血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活力没有显著影响(P＞0.05);(3)鲜活黑鲷肌肉氧化代谢产物丙二醛(MDA)的含量3个组间没有显著差异(P＞0.05);(4)黑鲷冷藏第3、6、9天,高水平维生素E(VE 500和VE 1 000)组肌肉MDA含量显著低于低水平维生素E组(VE 250)(P＜0.05). 相似文献
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本文通过对真鲷、黑鲷及真鲷♀×黑鲷♂杂交的F1耐高温、低温的比较,杂交F1具有父母本优良性状,能安全度夏和过冬;通过二三者之间生长测量,真鲷和杂交F1的生长速度明显快于黑鲷,从体重增长比较杂交F．增重速度比黑鲷快30％以上,但低于真鲷。 相似文献
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选取同一种饵料设置4个饲喂频率水平(分别为1次/d、2次/d、4次/d、6次/d),采用静水连续充气养殖系统,在盐度为26.0~27.0、温度为26.8~24.5℃的条件下对黑鲷成鱼和鱼种进行为期40d的生长实验。结果表明:(1)摄食率不受饲喂频率的显著影响,饲喂频率影响黑鲷的生长是由饲料转化率的改变引起的。(2)黑鲷成鱼和鱼种的水分含量随饲喂频率的增高而增加,黑鲷成鱼脂肪含量随饲喂频率的增高而下降,黑鲷鱼种脂肪含量随饲喂频率的增高而增加。(3)在本试验条件下,适宜饲喂频率随着黑鲷鱼体重的增加而提高,黑鲷鱼种的适宜饲喂频率为2次/d,黑鲷成鱼的适宜饲喂频率为4次/d。 相似文献
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采用黑鲷生长激素(seabream growth
hormone,brGH)放射免疫测定法(brGHRIA)及黑鲷生长激素放射受体测定法(brGHRRA)，研究了不同季节(3月、6月、9月及12月)黑鲷血清GH水平及肝脏和性腺中生长激素
受体(growth hormone receptor,GHR)水平的变化，同时测定了黑鲷白肌及肝脏RNA-DNA比率及黑鲷肥满度
(condition factor,K)和性腺指数(gonadosomatic 相似文献
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Cytochrome P450 (CYP) 1A1 participates in the activation as well as detoxification of environmental pollutants such as aromatic
hydrocarbons. This CYP form is also efficiently induced by aromatic hydrocarbons. The presence of CYP 1A1 in the brain might
thus be of physiological and toxicological importance. In the present investigation on rainbow trout, the distribution of
7-ethoxyresorufin-O-deethylase (EROD) activity, a cytochrome CYP 1A1 catalyzed reaction, was measured in whole tissue homogenates
from brain parts. In control fish, a relatively high activity was found in the rainbow trout olfactory bulb compared to the
other brain parts. Although an EROD induction (3 to 7-fold) by β-naphthoflavone (BNF) was recorded in all brain parts from
the rainbow trout, the highest induced activity was measured in the olfactory bulbs. To ascertain the distribution of EROD
activity in cells, whole brain tissue was subfractionated by differential centrifugation. The fractionation scheme separated
mitochondria (P2 fraction) and microsomes (P3 fraction) as determined by marker enzymes and electron microscopy. In control
rainbow trout, a low EROD activity could be measured in the P2 fraction. BNF induced the EROD activity in both P2 and P3 fractions.
Western blotting showed the induction by BNF of a protein band in the P2 and P3 fractions with a molecular mass around 58,000
when highly specific anti-cod CYP 1A1 antibodies were used. ELISA measurements confirmed the induction of CYP 1A1 protein
in the rainbow trout brain subcellular fractions. 相似文献
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为建立十足目虹彩病毒1的快速检测方法,根据十足目虹彩病毒1的ATP酶基因(ORF114R)保守序列设计特异性引物,通过条件优化,建立基于重组酶聚合酶扩增技术的十足目虹彩病毒1检测方法。重组酶聚合酶扩增技术的最优扩增温度为30 ℃,恒温反应20 min内即可完成。特异性试验结果显示,该方法与其他常见虾类感染病毒无交叉反应。敏感性试验结果显示,该方法对十足目虹彩病毒1的最低检出限为7 拷贝/μL,低于传统的巢式PCR方法。利用已建立的重组酶聚合酶扩增技术方法和PCR方法对采集的509批临床样品进行检测,试验结果表明,重组酶聚合酶扩增技术能够有效检出PCR方法的弱阳性样品,表明重组酶聚合酶扩增技术可以用于临床检测。笔者建立的检测十足目虹彩病毒1的重组酶聚合酶扩增技术具有快速、简便、特异性强、灵敏度高的特点,适合基层实验室及现场检测。 相似文献
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分别对采集自防城港白龙的皱瘤海鞘(Styela plicata)和北海南汅的冠瘤海鞘(Styela canopus)样品的共附生真菌Purpureocillium sp. FBZ-1和Penicillium sp. BNG-1进行研究。通过显微镜观察鉴定其形态,并通过分析生物学特征鉴定其种属。通过对两种真菌的次级代谢产物进行分离和结构鉴定,共分离鉴定28个小分子化合物,从中未发现新的化合物,主要的化合物类型是芳香胺类、生物碱类和二酮哌嗪类,分别为:lumichrome、 1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、β-咔啉、环(异亮氨酸-脯氨酸)、环(亮氨酸-羟基脯氨酸)、环(色氨酸-缬氨酸)、环(亮氨酸-脯氨酸)、环(苯丙氨酸-脯氨酸)、环(异亮氨酸-丙氨酸)、环(色氨酸-亮氨酸)、苯乙胺、N-乙酰苯乙胺、吲哚乙胺、N-甲基色胺、N-(4-羟基)丁酰苯乙胺、对羟基苯乙胺、 5,7,4-三羟基异黄酮、 7,4-二羟基异黄酮、 5,7,3,4-三羟基异黄酮、邻苯二甲酸异辛酯、 2,4-N,N-dimethyl-lumichrome、 3,4-二氢-3-甲基-β-咔啉-1-酮、色氨酸、 2-羟基-3-吲哚丙酸、环(缬氨酸-脯氨酸)、环(亮氨酸-丙氨酸)、环(苯丙氨酸-5-甲基-3,4-脱氢脯氨酸)、环(色氨酸-天冬酰胺)。研究结果对利用我国丰富的海鞘及其共附生微生物资源并研究其次级代谢产物结构多样性,发现其中可能含有的结构新颖的化学物质以开发抗菌、抗病毒及抗肿瘤新药,具有十分重要的理论意义和潜在的应用价值。 相似文献
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A stripspawning methodology was evaluated for tilapia (oreochromid) species. This technique achieved an average hatching success of 68.6 ± 3.6% (N= 31). Female fecundity and spawning frequency were dependant on both genetical and husbandry factors. Egg yields for Oreochromis niloticus, O. mossambicus, and O. niloticus±O. mossambicus hybrids averaged 4.54, 10.86 and 10.36 eggs/g female/spawn, respectively. Female broodstock that were adapted to an intensive spawning regime exhibited a significant increase in fecundity. Additionally, egg survival was not affected by hydration for up to 15 minutes prior to fertilization. Results suggest that the strip spawning of tilapia species may be an efficient method of providing viable gametes for hatchery purposes. 相似文献
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