表达羊口疮病毒B2L蛋白重组小反刍兽疫病毒的拯救     

刘拂晓  孙成友  李岭  王志亮 《中国动物检疫》2019,36(10):71-77

羊口疮（传染性脓疱）和小反刍兽疫的病原体分别为羊口疮病毒（orf virus,ORFV）和小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus,PPRV）。如果通过反向遗传技术进行基因修饰,PPRV可成为表达外源蛋白的有效载体。ORFV含有1个具有高免疫原性的B2L蛋白。本研究首先构建了含B2L基因开放阅读框的重组PPRV cDNA clone,然后通过反向遗传技术,拯救了一株表达B2L蛋白的重组PPRV。试验表明,该重组病毒的生长动力学类似其母源病毒;Western blot和质谱分析表明,该重组PPRV可在细胞内表达B2L蛋白。该研究为羊口疮和小反刍兽疫二联疫苗的研制奠定了基础。  相似文献   

携带小反刍兽疫病毒H基因的重组山羊痘病毒构建和鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

南文金  王清华  赵永刚  吴晓东  包静月  王志亮 《中国动物检疫》2011,28(7):33-35,39

将小反刍兽疫病(PPRV)毒糖蛋白基因H插入到山羊痘病(GPV)毒通用转移载体PtkPgpt-egfpP启动子P7.5的下游,构建了重组山羊痘病毒转移载体PtkPgpt-egfpPpprv-H。该重组转移载体转染感染山羊痘病毒疫苗株的绵羊睾丸细胞中,通过同源重组获得小反刍兽疫病毒H基因重组山羊痘病毒,通过纯化和PCR鉴定,证明小反刍兽疫病毒H基因插入到山羊痘病毒基因组中。本研究为进一步研究PPRVH基因重组山羊痘病毒的免疫原性奠定了基础。  相似文献   

小反刍兽疫流行状况及分子诊断技术研究现状     

吴昊天  满初日嘎  王凤阳  李昌  金宁一  陈巧玲 《动物医学进展》2022,43(1):122-126

小反刍兽疫(PPR)是一种主要感染山羊和绵羊的传染病,病原为副黏病毒科麻疹病毒属的小反刍兽疫病毒(PPRV).PPRV基因组由6个基因组成,依据N和F基因可将PPRV分为4个谱系或者基因群,我国流行的PPRV属于谱系Ⅳ.2007年我国首次报道发生PPR疫情,在2014年大流行后,农业农村部加强了 PPR的防疫措施.目前...  相似文献   

小反刍兽疫病毒H、F基因转基因苜蓿表达载体的构建     

孙娟  杨国锋  刘霞 《黑龙江畜牧兽医》2012,(3):21-24

为了有效预防小反刍兽疫,试验以pBI121为载体,PPRV-H、PPRV-F为目的基因,并插入绿色荧光蛋白(GFP)基因、MAR序列,构建5种小反刍兽疫病毒(PPRV)苜蓿表达载体。结果表明:成功构建小反刍兽疫表达载体,再将表达载体转入苜蓿,饲喂动物,选择其中免疫效果最好的表达载体,为该病的预防工作提供有效的技术支持。  相似文献   

小反刍兽疫分子生物学研究进展   总被引：2，自引：1，他引：1  

董浩  段小波 《中国畜牧兽医》2011,38(10):135-138

小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)是由小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的一种急性、烈性、接触性传染病。山羊高度易感;牛、猪等动物也可以感染带毒,野生动物偶有发生。作者主要介绍了小反刍兽疫病毒各基因结构特点,6种结构蛋白的功能,以及小反刍兽疫的诊断技术等方面的最新研究进展。  相似文献   

小反刍兽疫病毒N基因的原核表达   总被引：1，自引：1，他引：0  

阮洋  秦峻岭  高玉伟  孙玮  张涛  杨玉姣  杨松涛  王承宇  王铁成  黄耕  夏咸柱 《动物医学进展》2011,32(3):21-25

目的是表达出小反刍兽疫病毒的核蛋白,并鉴定其活性.根据GenBank发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列,对其进行基因优化并合成.设计引物,利用PCR的方法扩增PPRV-N基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建原核表达栽体pET-28a-N.阳性质粒转化原核...  相似文献   

2014-2017年青海省小反刍兽疫流行及防控情况调查     

林元清  傅义娟  王谢忠  沈艳丽  李秀英  炊文婷  李静  潘丽贞  王云平 《中国兽医杂志》2019,(2):28-30

小反刍兽疫是由副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbillivirus)的小反刍兽疫病毒(Peste des perits rumimants virus,PPRV)引起的小反刍动物的一种急性接触性传染病。特征为发热、结膜炎、糜烂性口腔炎、胃肠炎和肺炎。  相似文献   

小反刍兽疫的诊断与纺控     

李金岭 《兽医导刊》2008,(3):19-20

小反刍兽疫(PPR)是由副粘病毒科、麻疹病毒属、小反刍兽疫病毒(PPRV)引起的一种急性接触性传染病.也称小反刍兽伪牛瘟、卡他、肺肠炎以及口肺肠炎综合症.  相似文献   

一步法RT-PCR检测小反刍兽疫病毒     

《当代畜牧》2016,(26)

为建立一步RT-PCR检测小反刍兽疫病毒(PPRV)方法,针对Gen Bank中PPRV F基因进行序列比较分析,设计一对特异性引物,通过优化RT-PCR反应条件,建立了一步RT-PCR检测PPRV方法。该方法最佳退火温度为60℃,最佳引物用量为8pmo L/μL。利用这种方法对小反刍兽疫临床阳性样本进行检测,获得了特异性的扩增目标条带,但不与口蹄疫病毒、羊口疮病毒、犬瘟热病毒等发生反应。本方法具有高度灵敏性,最低检测量为3.576×10-5g/L,可广泛应用于临床小反刍兽疫病毒核酸的检测。  相似文献   

小反刍兽疫研究进展     

徐琼  何宇乾  吴海燕 《动物医学进展》2012,(8):93-96

小反刍兽疫(PPR)是由小反刍兽疫病毒(PPRV)引起的急性或亚急性传染病,为世界动物卫生组织(OIE)法定报告的动物疫病,易感动物以山羊、绵羊等小反刍动物为主。目前,小反刍兽疫主要流行于西非、中非、中东、阿拉伯半岛及南亚等地区。敏感特异的检测方法和高效的预防性疫苗将为该病的防控奠定良好的基础。论文对小反刍兽疫全球流行现状、诊断技术及疫苗研究进展进行了综述。  相似文献   

小反刍兽疫病毒分离株China/Tib/07辅助质粒及微型基因组的构建和鉴定     

刘文华  王志亮  包静月  吴晓东  刘华雷  赵永刚  刘秀梵 《畜牧兽医学报》2011,42(10)

本研究旨在构建小反刍兽疫病毒(PPRV)的辅助质粒和微型基因组并验证其功能,为建立PPRV反向遗传操作平台奠定基础.首先构建表达PPRV分离株China/Tib/07的N、P和L蛋白的辅助质粒pCI-N、pCI-P和pCI-L.通过间接免疫荧光试验验证3个辅助质粒转染细胞后的蛋白表达情况,并从mRNA水平上验证蛋白表达的正确性;扩增PPRV基因组两末端序列和eGFP报告基因,三者通过overlap-PCR连接并克隆至转录载体pOL-TV5中构建微型基因组.将构建的微型基因组分别与辅助病毒和3个辅助质粒进行共转染.经鉴定各辅助质粒完全正确,构建的微型基因组不论与辅助病毒还是与3个辅助质粒共转染,报告基因均表达.本试验成功构建了PPRV分离株的表达N、P和L蛋白的3个辅助质粒以及微型基因组,并用微型基因组验证了3个辅助质粒可以作为PPRV反向遗传操作的辅助质粒,为该病毒感染性克隆的构建奠定了基础.  相似文献   

小反刍兽疫研究现状   总被引：1，自引：0，他引：1  

王谢忠  张茂华  李桂兰 《中国草食动物》2009,29(1)

小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的一种主要感染小反刍动物的急性、接触性传染病,发病率、死亡率高.近年来,小反刍兽疫(PPR)呈扩散的趋势,成为重要的跨国动物传染病之一,我国周边国家频繁器发该病.2007年7月25日暴发于西藏自治区日土县的我国首例小反刍尊疫疫情,更是对我国如何做好该病的防控工作提出了新的要求和挑战.为了增强广大兽医工作者和相关人士对本病的认识,文中就小反刍兽疫的病原学、流行病学、临床症状、病理特征以及诊断方法等方面的研究现状进行了综述.  相似文献   

小反刍兽疫的诊断与综合防控措施     

王娜  苏胜杰  宋越  张帆  戴伶俐  周蕾  柴春霞  白帆  赵世华  张月梅 《畜牧与饲料科学》2020,41(1):121-124

小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒引起的一种急性、亚急性传染性疾病,主要感染绵羊、山羊及一些野生小反刍动物,发病率和死亡率均较高,给广大农牧民和养殖场造成巨大的经济损失。因此,对该病的诊断及综合防控措施进行概述,以期为该病的防控提供参考。  相似文献   

小反刍兽疫病毒及山羊痘病毒N-ITR基因二联实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立     

赵文华  杨仕标  高华峰 《中国畜牧兽医》2014,41(3):65-71

Peste des petits ruminants virus (PPRV) and goat pox virus (GTPV) are the causative agents of two kinds of goats’ diseases-peste des petits ruminants and goat pox which can cause disaster economic losses. In order to detect the two viruses simultaneously and quickly, two sets of primers and relative probes were designed based on the nucleoprotein (N) gene of PPRV and the inverted terminal repeat (ITR) segment of GTPV， respectively. In order to work together in the same reaction, the probes were labeled with different fluorescent materials 5′FAM-TAMRA3′and 5′JOE-Eclipse3′，respectively. Results showed that the duplex Real-time RT-PCR assay was identified to be specific for PPRV and GTPV only and specific fluorescent signal could be detected, but the related viruses including fowl pox virus（FPV）and canine distemper virus (CDV) had no specific fluorescent signal. Positive recombinant plasmids (PPRV pMD18-T-N and GTPV pMD18-T-ITR) were built and used for positive quantitative templates to establish duplex standard curves. The developed assay based on the probe N-ITR was found to be highly specific and sensitive with a detection limit of 10² copies/μL cDNA and 10³ copies/μL DNA for PPRV and GTPV， respectively. Finally, the duplex Real-time RT-PCR assay for simultaneous detection of PPRV and GTPV was established preliminarily in the study.  相似文献   

小反刍兽疫病毒RT-LAMP检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

李林  吴晓东  包静月  李金明  王君玮  王志亮 《中国动物检疫》2010,27(4):32-34,41

利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)建立了小反刍兽疫病毒快速检测方法,同时评价了该方法的灵敏性和特异性。结果表明,根据小反刍兽疫病毒N基因保守区域设计的LAMP引物能够在63℃恒温下,1小时内实现目的核酸的大量扩增,由于在检测前加入荧光指示试剂,检测结果可以直接用肉眼判断,避免了由于开盖检验带来的扩增产物污染导致的假阳性。该检测体系具有较高的特异性,只能特异性地检测目的病毒,与其他同属的病毒或类似病毒等无交叉反应;具有较高的检测灵敏度,比普通RT-PCR灵敏性高10倍,与荧光RT-PCR的灵敏度相当。  相似文献   

小反刍兽疫研究进展     

李景玉  高玉竹  李元果  孙喜清  徐亚杰  秦峻岭  胡永浩  黄耕  高玉伟 《中国畜牧兽医》2014,41(10):274-280

小反刍兽疫病毒(PPRV)是副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbolivirus)的成员,主要感染山羊、绵羊等小反刍动物,引起一种高度接触性病毒性传染病。小反刍兽疫为一种重大的外来性疾病,2007年在中国西藏自治区日土县首次发生。自2013年末以来中国新疆、青海、甘肃、宁夏、内蒙、湖南、辽宁等地频繁暴发小反兽疫疫情,给中国的畜牧业带来了巨大的损失,引起极大的重视。为更好的分析小反刍兽疫的病原特性及采取有效的防控措施,文章对小反刍兽疫的病原学及疫苗研究进展进行论述。  相似文献   

Genetic characterization of Indian peste des petits ruminants virus (PPRV) by sequencing and phylogenetic analysis of fusion protein and nucleoprotein gene segments   总被引：1，自引：0，他引：1  

Kerur N  Jhala MK  Joshi CG 《Research in veterinary science》2008,85(1):176-183

Peste des petits ruminants (PPR) is an important viral disease of sheep and goats, endemic in India. The study was undertaken to characterize the local PPRV by sequencing fusion (F) protein and nucleoprotein (N) gene segments and phylogenetic analysis, so as to focus on genetic variation in the field viruses. Selected regions of PPRV genome were amplified from clinical samples collected from 32 sheep and goats by RT-PCR and the resulting amplicons were sequenced for phylogenetic analysis. The phylogenetic tree based on the 322bp F gene sequences of PPRV from five different locations clustered them into lineage 4 along with other Asian isolates. While the 425bp N gene sequences revealed a different pattern of branching, yielding three distinct clusters for Nigerian, Turkey and Indian isolates. Thus, classification of PPRV into lineages based on the N gene sequences appeared to yield better picture of molecular epidemiology for PPRV.  相似文献   

小反刍兽疫病毒F蛋白抗原位点的克隆与表达     

赵永刚  田晓灵  宋厚辉  王志亮  吴树清 《中国动物检疫》2009,26(7):23-25

目的表达小反刍兽疫F蛋白的抗原位点用于检测与预防。方法用DNAStar分析小反刍兽疫的抗原位点,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中PPRV的F基因的抗原位点并克隆到原核表达载体PET-28b中,最后用PCR、酶切和测序分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中,经ITPG诱导表达PPRVF基因的抗原位点;用SDS-PAGE和Western-Blotting分析抗原位点蛋白的表达。结果将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;对重组质粒PET-28b-F35-111(pZLW013)、PET-28b-F143-485(pZLW014)和PET-28b-F323-485(pZLW015)酶切后,均出现与预期相符的片段;DNA测序表明插入的片段的序列与小反刍兽疫F基因的抗原位点序列分别完全一致,其大小分别为251bp、1053bp和514bp;将重组表达的蛋白经SDS-PAGE和West-ern-Blotting分析,证明小反刍兽疫抗原位点F35-111没有表达、抗原位点F143-485和F323-485得到表达。结论成功表达了PPRVF基因的两段抗原位点蛋白,为日后检测与预防工作奠定了基础。  相似文献