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【目的】三倍体植物由于减数分离紊乱，难以形成可育的雌雄配子，属于天然的不育类型，配置以2x×4x多个杂交组合，旨在创制柑橘三倍体种质，丰富柑橘无核材料。【方法】以单胚性二倍体品种东试早柚为母本与四倍体柑橘材料ZP（纸皮，四倍体甜橙）、PT（四倍体葡萄柚）、NH（四倍体，诺瓦橘柚+HB柚体细胞杂种）为父本进行倍性杂交，授粉后85 d和100 d采摘幼果并对未成熟种子实施幼胚离体挽救培养，获得再生植株后用流式细胞仪和InDel标记对其倍性及遗传来源进行鉴定。【结果】从3个倍性杂交组合的168株再生植株中，通过倍性检测获得三倍体幼苗128株且均为双亲杂交后代，其中东试早柚×ZP共计60株、东试早柚×PT共计60株、东试早柚×NH共计8株。【结论】通过倍性杂交高效创制三倍体柑橘新种质，为柑橘早熟无核育种及相关基础研究提供了珍贵的育种材料。 相似文献
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根癌农杆菌介导寒富苹果转化体系的建立 总被引：4，自引：0，他引：4
以寒富苹果组培苗叶片为外植体,利用植物表达载体上含潮霉素抗性基因的根癌农杆菌EHA105(pCAMBI-A1301)和含卡那霉素抗性基因的根癌农杆菌EHA105(pCAMBIA2301)对影响寒富遗传转化效率的因素进行系统研究。结果表明,寒富叶片对潮霉素反应敏感,在附加潮霉素的培养基上寒富叶片褐化较为严重。潮霉素和卡那霉素适宜的筛选质量浓度分别为4 mg.L-1和25 mg.L-1。农杆菌介导寒富苹果转化体系的建立以MS+TDZ 2.0 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1培养基为叶片离体再生芽培养基。适宜的转化条件为:菌液浓度D 600nm=0.5、叶片外植体在菌液浸泡8 min、共培养时间为3～4 d、推迟4 d进行筛选培养。抗性基因对转化效率具有明显的影响,EHA105(pCAMBIA2301)的平均抗性芽再生率(0.96%)比EHA105(pCAMBIA1301)的平均抗性芽再生率(0.58%)高出几乎50%,EHA105(pCAMBIA2301)的抗性芽再生率最高达1.87%。GUS组织化学染色和PCR鉴定结果表明本研究获得了寒富苹果转基因植株。 相似文献
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【目的】遗传转化是进行基因功能验证的重要手段,构建较为完善、高效的厚皮甜瓜遗传转化体系,为基因功能验证和厚皮甜瓜种质改良提供技术支撑。【方法】以厚皮甜瓜B8为材料,用携带植物双元表达载体p QY002005的根癌农杆菌介导转化B8子叶诱导再生,通过探究影响甜瓜遗传转化过程中的重要因子的作用,建立以B8为基础的甜瓜遗传转化体系。【结果】以正常光周期培养3 d的无菌苗子叶节为外植体,对其进行微刷+10 s超声处理可提高农杆菌侵染效率,荧光芽获得率达29.6%;压力85 kPa的2次5 min的抽真空侵染方式(间隔1 min)侵染效果较佳;4 mg·L-1的Basta较适宜筛选抗性植株。利用以上方法,单次转化120个子叶节外植体,可获得31个再生荧光芽,17株生根苗,通过PCR检测确定8株阳性苗,阳性率达58.8%,阳性植株获得率为6.7%。【结论】成功建立了以B8为材料的甜瓜高效遗传转化体系,为甜瓜关键基因功能验证和种质精准改良提供技术支持。 相似文献
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抗病转录因子Pti4是从番茄中分离的一种能够调控番茄抗病基因Pto转录的蛋白质。通过根癌农杆菌介导法将抗病转录因子基因Pti4导入花椰菜无菌苗下胚轴,同时对转基因植株进行了PCR、PCR-Southern和Southern blot分子检测以及细菌性黑腐病和软腐病病菌接种试验。结果表明,在建立再生系统过程中外植体的最佳苗龄为5 ~ 7 d,培养基中激素组合为NAA 0.2 mg • L-1、6-BA 2.0 mg • L-1 时不定芽的诱导和分化效果最好。获得的35株阳性植株经分子检测证明抗病转录因子基因Pti4已被整合到花椰菜的基因组中。对其中26株接种病菌发现Pti4转化植株对细菌病害具有一定的抗性。 相似文献
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薄皮甜瓜离体再生体系的优化 总被引：1，自引：0，他引：1
通过器官发生途径诱导形成不定芽,建立薄皮甜瓜‘IVF05’植株再生体系,探讨不同外植体及不同的激素组合对不定芽再生的影响。结果表明,子叶近胚轴端外植体的不定芽再生率为90.00%,子叶节的再生率为85.00%,子叶远胚轴端外植体的再生率为31.43%,下胚轴的再生率为0,子叶近胚轴端是‘IVF05’不定芽分化的理想的外植体。不定芽诱导中最适宜的培养基为MS+ABA 0.5 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1,在此培养基上产生的愈伤较少,能正常分化的不定芽较多,不定芽的生长较快。在MS+6-BA 0.05 mg·L-1的不定芽伸长培养基上,分化的不定芽能够伸长长大。在MS+IAA 0.2 mg·L-1的生根培养基上无根苗容易生根。从外植体培养到获得完整再生植株需5060 d。 相似文献
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《果树学报》2015,(5)
【目的】建立‘黄水蜜’桃实生苗茎段高效稳定的再生体系。【方法】以‘黄水蜜’桃实生苗茎段为外植体,探讨了不同植物生长调节剂质量浓度组合对不定芽诱导过程中愈伤组织形成率和不定芽形成率的影响,并采用两步生根法研究不同植物生长调节剂种类对不定根诱导的影响。【结果】适合‘黄水蜜’桃实生苗茎段切口处愈伤组织再生的最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+Ag NO30.5 mg·L-1,不定芽再生的最佳培养基为MS+6-BA 3.0mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+Ag NO30.5 mg·L-1,其愈伤组织形成率和不定芽再生率分别为85%和47%;获得的不定芽先后经WPM+ZT 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+Ag NO30.5 mg·L-1和MS+NAA 0.5 mg·L-1+GA30.5 mg·L-1+Ag NO30.5mg·L-1两步生根法培养后,不定根再生率为50%,平均根数量为5.00。【结论】初步建立了‘黄水蜜’桃实生苗茎段再生体系,为桃遗传转化研究奠定基础。 相似文献
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《果树学报》2013,(6)
【目的】为解决基因型依赖性比较强的苹果品种遗传转化困难等问题,研究不同伤害处理方式下苹果茎尖碎片的再生能力及其对苹果转化率的影响。【方法】以苹果‘姬神’试管苗为试材,运用农杆菌介导法对苹果茎尖和离体叶片进行遗传转化。【结果】将茎尖纵切为4部分时,可以高比率的形成愈伤组织(88.4%)和再生不定芽(59.8%)。在20 mg·L-1的卡那霉素筛选压下,300个茎尖外植体中有50.4%的茎尖碎片形成愈伤组织并获得了19株表达GFP的转基因植株。而在同样的筛选压下有22.6%农杆菌介导的离体叶片形成愈伤组织,但不能获得转基因植株。降低筛选压可以提高植株再生率,但其中包含大量嵌合体,转化效率并没有明显提高。【结论】苹果茎尖做为转化受体基因型依赖性较低,要优于苹果离体叶片。 相似文献
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外植体经器官发生途径分化成苗是实现柑橘遗传转化的一个有效途径。本文以酸柚上、下胚轴为外植体开展再生体系建立研究,结果表明,胚轴切段的形态学上端在添加3 mg·L-1 6-BA的MT培养基上培养5周后开始形成丛生芽,且上胚轴的诱导率(12.28%)显著低于下胚轴(43.07%),但两者的丛生芽增殖系数没有显著差异。在6-BA浓度一定的情况下,NAA对再生芽茎段的增殖系数具有主效应贡献(F=6.018,P=0.025),但NAA和GA3的浓度对增殖系数的影响不存在交互作用(F=2.214,P0.05)。53.57%的外植体经添加有0.5 mg·L-1NAA和0.1 mg·L-1 IBA的1/2MT培养基诱导4周后生根成苗。再生植株经炼苗可移栽成活。 相似文献
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【目的】建立番木瓜高效遗传转化体系，为番木瓜基因功能研究和重要农艺性状改良提供新的技术支撑。【方法】以紫晖番木瓜胚性细胞悬浮系（embryogenic cell suspensions,ECS）为遗传转化受体，利用植物表达载体pCAMBIA1301和农杆菌介导法进行遗传转化，对抗生素浓度筛选、侵染时间、继代培养、抗性胚的诱导与萌发以及植株再生整个过程进行探索，最后获得抗性再生植株。【结果】通过设置不同浓度的头孢霉素和潮霉素处理，观察ECS细胞状态，筛选、确定头孢霉素和潮霉素最适处理质量浓度分别为200 mg·L-1和5 mg·L-1。工程菌和ECS共培养侵染2 d后转到含有头孢霉素和潮霉素的液体筛选培养基上进行继代培养，继代周期为14 d。经GUS染色验证，表明继代3次后的ECS几乎全部为转化细胞。将以上ECS转移到液体胚诱导培养基中进行培养，2个月后可获得大量球形体细胞胚，且GUS组织染色为蓝色。将球形体细胞胚转到半固体成熟培养基上培养，2个月后可获得成熟子叶期体细胞胚。子叶期体细胞胚在萌发培养基上光培养30 d后，可获得再生芽。任意选取再生芽进行GUS染色，均可染成蓝色。抗性再生芽... 相似文献
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【目的】为了建立锥栗再生体系,【方法】以锥栗胚为外植体,分析不同基因型、基本培养基及激素组合对锥栗不定芽的诱导、增殖和生根的影响。【结果】结果表明,油榛是锥栗组织培养最佳的基因型;锥栗不定芽诱导的最适培养基为M(NH4NO3804 mg·L-1+KNO31011 mg·L-1+FeSO4.H2O 27.8 mg·L-1+1/2MS其余无机盐+MS有机)+6-BA 2.0mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1,其出芽率为76%;芽增殖的最佳培养基为M(同上)+6-BA 0.5 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1,其增殖倍数达18;诱导生根的最佳培养基为M(同上)+IBA 0.5 mg·L-1,其生根率为48%。【结论】运用上述体系可获得完整锥栗再生植株。 相似文献
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【目的】为确定中华猕猴桃遗传转化中适宜的抗生素种类和浓度,【方法】以中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片为外植体,研究了抗生素对外植体再生的影响。【结果】抗生素敏感性测定发现,当卡那霉素质量浓度为20 mg.L-1时,愈伤组织及不定芽分化率均为0,因此,20 mg.L-1卡那霉素为适宜的筛选浓度;头孢霉素和羧苄青霉素对中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片分化均有抑制作用,但头孢霉素对叶片分化的抑制作用比羧苄青霉素小,结合抑菌试验,将浓度400 mg.L-1头孢霉素确定为适宜于中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片遗传转化的抑菌抗生素。【结论】卡那霉素20 mg.L-1和头孢霉素400 mg.L-1为中华猕猴桃‘伏牛95-2’遗传转化适宜的抗生素及质量浓度。 相似文献
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以‘魏可’葡萄离体叶片为外植体,利用植物表达载体上含有卡那霉素抗性基因(nptⅡ)的根癌农杆菌LBA4404(pCAMBIA2301)对影响‘魏可’葡萄遗传转化效率的因素进行系统研究。结果表明,最佳农杆菌介导‘魏可’葡萄遗传转化体系为农杆菌侵染4 min,共培养3 d,卡那霉素质量浓度5 mg·L-1,羧苄青霉素质量浓度200 mg·L-1。采用此体系对‘魏可’葡萄进行转化,共获得9株抗性苗。利用GUS组织化学染色、PCR扩增的方法检测,结果表明,有4株通过了PCR检测,1株通过了RT-PCR检测,初步证明nptⅡ基因已经整合进入‘魏可’葡萄基因组中。将PCR产物回收,经测序验证nptⅡ基因完全整合进入‘魏可’葡萄基因组中。对CK及经PCR检测呈阳性的株系进行卡那霉素抗性鉴定,发现PCR呈阳性的株系均比CK抗Kan的能力明显增强。 相似文献
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柑橘采后腐烂主要致病菌的分离鉴定及丁香精油对其抑制作用研究 总被引：2，自引：0，他引：2
【目的】为了确定浙江宁海本地柑橘优势腐败菌及丁香精油对其的抑菌效果,【方法】从自然腐烂的柑橘上分离优势菌,采用传统真菌形态学鉴定方法结合rDNA-ITS序列分析方法进行鉴定,并采用体外试验研究丁香精油对优势菌的抑菌效果。【结果】结果表明,浙江宁海本地柑橘分离所得6株真菌分别为指状青霉(Penicillium digitatum)、柑橘链格孢(Alternaria citri)、枝孢样枝孢霉(Cladosporium cladosporioides)、聚多曲霉〔Aspergillus sydowii)、近玫色锁掷孢酵母(Sporidiobolus pararoseus)和卡利比克毕赤酵母(Pichia caribbica);其中P.digitatum和C.cladosporioides是优势腐败菌;体外抑菌试验表明,丁香精油对P.digitatum和C.cladosporioides有较好的抑菌效果,抑制中浓度(EC50)分别为2.51 mL·L-1和0.57 mL·L-1;最小抑菌浓度(MIC)分别为6 mL·L-1和3 mL·L-1。【结论】丁香精油可以抑制柑橘采后主要病原菌的生长。 相似文献
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萝卜遗传转化体系的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
系统研究了影响根癌农杆菌介导的萝卜(Raphanus sativus L.)遗传转化的若干因素,建立了萝卜遗传转化体系:即切取萝卜带柄子叶外植体,先进行2 d预培养,用OD600为0.3~0.5的EHA105农杆菌菌液侵染5~7 min后,再进行5 d共培养,然后将外植体转接到MS+6-BA 6 mg.L-1+NAA 0.05 mg.L-1+Cef 500 mg.L-1的培养基上进行7 d延迟筛选,再将外植体转接到MS+6-BA 6 mg.L-1+NAA 0.05 mg.L-1+Cef 500 mg.L-1+Hyg 5 mg.L-1的培养基上进行10 d的抗性筛选。结果共获得126个抗性芽,其中8个抗性芽经PCR检测扩增出目的基因的启动子BcA9,约850bp,阳性率为6.3%,初步验证目的基因已经转入萝卜再生芽中。 相似文献
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【目的】为了培育抗病抗寒无核葡萄新品种,【方法】以2个种子败育型无核品种‘波尔莱特’、‘红无籽露’作母本,以抗病抗寒的中国野生山葡萄株系‘黑龙江实生’、‘双优’及欧山杂种‘北醇’、‘00-1-10’(‘玫瑰香’ב黑龙江实生’)分别作父本杂交,授粉51 d后将胚珠分别接种于ER和MM4培养基上进行胚挽救,培养60 d后在WPM+BA 0.2 mg.L-1培养基上诱导成苗。【结果】结果表明,2个母本品种胚挽救的适宜培养基不同,‘波尔莱特’作母本适合于ER培养基,‘红无籽露’作母本适合于MM4培养基。2个母本基因型对胚珠的发育率和成苗率的影响差异不大,‘波尔莱特’略优于‘红无籽露’;但4个父本基因型对胚挽救效果影响较大,以欧山杂种‘00-1-10’和‘北醇’作父本的杂交组合胚株的发育率和成苗率明显高于山葡萄‘黑龙江实生’、‘双优’作父本的杂交组合。共获得无核葡萄胚挽救新种质50个株系。【结论】在胚挽救过程中,不同基因型的无核葡萄适宜于不同的基本培养基,欧山杂种比山葡萄更适宜于作杂交的父本。 相似文献
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扁桃杧(Mangifera persiciformis)体胚发生及再生体系建立 总被引：1，自引：0，他引：1
以扁桃杧(Mangifera persiciformis Wu&Ming)未成熟珠心组织为外植体,建立体胚发生及再生体系,同时对幼苗进行茎尖染色体计数和胚根组织形态学观察。结果表明,在改良的B5基本培养基+2,4-D1.0mg·L-1+Gln400mg·L-1+6%蔗糖上培养4～5周后可诱导胚性愈伤组织分化。继代培养基与成熟培养基交替培养能有效降低胚性愈伤组织的褐化并保持旺盛的分化能力。培养3～4个月后,大部分体胚均能发育成熟,26.03%的体胚畸形。体胚在改良B5培养基+Gln400mg·L-1+4%蔗糖上的萌发率较低,仅为8.39%。次级体胚以直接体胚发生方式于萌发体胚的下胚轴产生。幼苗的生根不理想,生长极为缓慢;其茎尖染色体数目为2n=2x=40;胚根形态学上端内部维管组织解体,愈伤化,结构松散。 相似文献
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【目的】为了探明独活抑制柑橘病原真菌的活性成分。【方法】采用生长速率法、溶剂萃取、硅胶柱层析、气相色谱-质谱联用(GC-MS)等方法研究独活乙醇提取物对3种柑橘贮藏病害病原真菌的抑菌作用,并分离和鉴定其抑菌活性成分。【结果】独活乙醇提取物中含有高效抑制柑橘炭疽菌的活性物质。GC-MS鉴定B2组分中含有4种香豆素类化合物—异佛手柑内酯、牛防风素、茴芹内酯、异茴芹内酯。异佛手柑内酯、茴芹内酯、异茴芹内酯3种化合物对柑橘炭疽菌的EC50在45 mg.L-1左右,其中茴芹内酯的抑制活性最好,其EC50为41.521 6 mg.L-1。显微观察发现,茴芹内酯处理导致柑橘炭疽菌菌丝体分支增多、畸形,部分隔膜消失等变化。【结论】异佛手柑内酯、茴芹内酯、异茴芹内酯为独活抑制柑橘病原真菌的主要活性物质。 相似文献
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‘奥迪亚’葡萄杂交后代胚挽救及无核性状分子鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】为了研究影响杂交后代胚挽救萌发率的主要因素,并对其无核性状进行早期鉴定,【方法】以无核、抗病葡萄品种‘奥迪亚’为母本,‘玫瑰香’、‘摩尔多瓦’和‘红地球’3个主栽品种为父本进行杂交,通过L9(33)正交试验,建立简单高效的胚挽救体系,并用分子标记对杂交苗无核性状进行鉴定。【结果】结果表明,影响胚挽救萌发率的最关键因素为接种时期,其次为培养基种类和NAA浓度;以‘奥迪亚’为母本的杂交胚其适宜接种程序为授粉后49～56 d剥取胚珠,接种在B5或NN69培养基上充分发育70 d,再转入1/2 B5培养基上萌芽,‘奥迪亚’ב摩尔多瓦’杂交胚通过此程序萌发率达到了50.48%;经分子标记鉴定,各组合后代的无核株系均超过50%。【结论】利用胚挽救方法以‘奥迪亚’为杂交母本可高效创新葡萄无核种质。 相似文献