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苏云金芽孢杆菌cry1Aa10杀虫晶体蛋白基因的克隆、序列分析以及在大肠杆菌中的表达 总被引：2，自引：0，他引：2
本研究从对鳞翅目昆虫有强毒性的苏云金芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓＢｔ）菌株ｋｕｒｓｔａｋｉＨＤ－１－０２中克隆到一个３．５ｋｂ的杀虫晶体蛋白基因ｃｒｙＩ－０２。全序列分析表明,该基因由３５３１ｂｐ的核苷酸组成,可编码１１７６个氨基酸组成的蛋白质,根据同源性比较,该基因被确定为ｃｒｙ１Ａａ基因。它与国外报道的Ｂｔｃｒｙ１Ａａ基因具有相似的限制性内切酶图谱,核苷酸和氨基酸序列 相似文献
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与黄原胶生物合成相关的"1.9" kb EcoRI DNA片段的序列测定分析 总被引：2，自引：0，他引：2
对Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｃａｍｐｅｓｔｒｉｓｐｖ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ（下称Ｘｃｃ）８００４菌株染色体基因组中９．４ｋｂＨｉｎｄⅢＤＮＡ的“１．９”ｋｂＥｃｏＲＩ酶切片段的测序分析结果表明,该ＥｃｏＲＩＤＮＡ片段的实际长度为１．８８ｋｂ。在核苷酸水平上与Ｘｃｃ的ｇｕｍ基因有９８％的一致性;这一ＥｃｏＲＩ片段上有两个有意义的ＯＲＦ：ＯＲＦ１和ＯＲＦ２。ＯＲＦ１是一个不完整的ＯＲＦ;在氨基酸水平上,ＯＲＦ１和ＯＲＦ２的推断性编码产物蛋白分别与ｇｕｍＡ基因编码的ＧｕｍＡ及ｇｕｍＢ基因编码的ＧｕｍＢ蛋白有１００％的一致性。因此在１．８８ｋｂＥｃｏＲＩ片段上存在一完整的ｇｕｍＢ基因。 相似文献
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丝羽乌骨鸡MHC-B-LIIB(β1外元)序列多态性分析 总被引：10，自引：0，他引：10
本实验采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰｓ的方法来研究丝羽乌骨鸡ＭＨＣ－Ｂ－ＬＩＩＢ（β１外元）序列的分子遗传多态性。实验证明：四种限制酶在Ｂ－ＬＩＩＢ（β１外元）的３０５ｂｐ片段上都存有多态位点。综合四种酶切情况，共检测到９种基因型。Ｘ＾２适合性检验表明：ＨｈａＩ、ＥｃｏＲＶ、ＸｂａＩ位点已经达到Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡状态（Ｐ〉０．０５）。而ＨａｅⅢ位点未能达到Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡状态。 相似文献
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猪生殖和呼吸综合征病毒中国分离株B13株ORF5基因在杆状病 … 总被引：4，自引：0，他引：4
本研究将ＰＲＲＳＶＢ１３株ＯＲＦ５基因克隆到杆状病毒转移载体质粒ｐＶＬ１３９３中,构建了重组转移载体质粒ｐＶＬ１３９３－ＯＲＦ５。用该重组转移载体质粒与线性化苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＭＮＰＶ－ＳＶＩ Ｇ）基因组ＤＮＡ（ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ Ｌｉｎｅａｒｉｚｅｄ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ＤＮＡ）共转染草地夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ,ｓｆ９）细胞,得到重组病毒ＡｃＭＮＰＶ 相似文献
5.
用根据国外已报道的甜菜坏死黄脉病毒（ＢＮＹＶＶ）的ＲＮＡ２的序列合成的两个引物，通过对ＢＮＹＶＶ新疆分离物的ＲＮＡ逆转录获得了ＢＮＹＶＶ的外壳蛋白基因的ｃＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增后用Ｔ４聚合酶补平两端，克隆到ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）质粒的ＳｍａＩ位点，转化大肠杆菌ＤＨ５α，经筛选得到正向插入的重组质粒ｐＧＥＢ３。用ＰＣＲ扩增和酶切均得到５９０ｂｐ的ＤＮＡ片段。用ＡＢＩ３７０Ａ型ＤＮＡ全自动序列仪测出该ｃ 相似文献
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反义PEP基因调控油菜籽粒蛋白质/油脂含量比率的研究 总被引：70，自引：1，他引：70
利用根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）ＥＨＡ１０１携带反义ＰＥＰ基因和卡那霉素,潮霉素抗性基因,采用共培养法转化甘蓝型油菜（ＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．）浙油７５８和浙优油１号的下胚轴,通过组织培养获得了能在培养基上生长的油菜转基因植株。经ＧＵＳ组织化学染色及ＰＣＲ扩增检测,证明外源基因已插入油菜基因组并得到表达。浙油７５８转基因植株Ｔ１代种子平均含油量比对照提６． 相似文献
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从人胎肝中提取得总ｍＲＮＡ，然后通过ＲＴａｓｅ反转录得到ｃＤＮＡ，利用ＰＣＲ技术克隆到ＥＰＯ基因（全长为５２７ｂＰ），经过计算机分析已知ＥＰＯ基因保守区段的限制性内切酶位点，选择ＢｇｌⅠ和ＨｉｎｃⅡ进行酶解，确认所获得ＤＮＡ片段为ＥＰＯ基因。 相似文献
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棉花叶绿体ndhB基因的克隆和序列分析 总被引：2，自引：0，他引：2
叶绿体ｎｄｈＢ基因编码ＮＡＤＨ脱氢酶ＮＤ２亚基。本研究应用ＰＣＲ技术，从棉花叶绿体基因组中扩增并克隆了长度为２．１ｋｂ片段，该片段含有棉花叶绿体ｎｄｈＢ基因。采用外发酶Ⅲ定向缺失和限制性内切酶消化的策略构建亚克隆，并测定了该片段的全部核苷酸序列。 相似文献
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乙肝表面抗原和生长抑素融合基因在杆状病毒中表达 总被引：2，自引：0，他引：2
将乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）与生长抑素的融合基因（ＨＢｓＡｇ／ＳＳ）插入杆状病毒转移载体质粒ｐＶＬ１３９３，构成重组转移质粒ｐＶＬ１３９１ＨＳ。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂质证实ＨＢｓＡｇ／ＳＳ已插入ＰＶＬ１３９３。借助磷酸钙沉淀法，将ＣｓＣｌ超速离心纯化的重组转移质粒和苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）共转染Ｓｆ９细胞，用荧光空班和酶联免疫测定法（ＥＬＩＳＡ），筛选到重组病毒ＡｃＮＰＶＨＳ。提取感 相似文献
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拟南芥质膜水通道蛋白RD28保守区段在大肠杆菌中的表达及其抗体的制备 总被引：2，自引：0，他引：2
实验利用ＰＣＲ技术,从拟南芥原膜水旧白ＲＤ２８的ｃＤＮＡ中扩增了所有植物细胞质膜水通道蛋白保守区段（４２０ｂｐ）,并将其构入ｐＧＥＸ－ＫＧ。酶切、测序分析表明重组质粒ｐＧＥＸ－ＲＤ２８结构正确。０．１ｍｍｏｌ／Ｌ的ＩＰＴＧ可诱导表达分子量约４０ｋＤ融合蛋白ＧＳＴ－ＲＤ２８,该蛋白主要以非包涵体的形式存在。诱导表达后的菌体超声裂解液经谷胱甘肽活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析柱纯化得到了高纯度Ｇ 相似文献
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温度对土壤中多环芳烃消失速率的影响ＢａｒｂａｒａＭａｌｉｓｚｅｗｓｋａ－Ｋｏｒｄｙｂａｃｈ多环芳烃（ＰＡＨｓ）是一组具有很强毒性、致癌性和基因诱变性的有机化合物（Ｓｉ￣－ｍ＆Ｏｖｅｒｃａｓｈ，１９８３）。它们产生于各种工业过程，并不断地排放到大气、水... 相似文献
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本研究克隆了萤光假单胞菌ＡＳ１．５５（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓＡＳ１．５５）的亮氨酸基因（ｌｅｕ＾＋）ＥｃｏＲＩ片段（－６．６ｋｂ）,并获得含有该片段的重组质粒ｐＢＲ３２２－ＬＥＵ。从ｐＢＲ３２２－ＬＥＵ质粒中分离出ｌｅｕ＾＋ＥｃｏＲＩ片段,将其插入到ｎｉｆＡ质ｐＭＣ７１Ａ的ＥｃｏＲⅠ位点使氯霉素抗性基因失活,从而构建了不带抗药性基因ｎｉｆＡ质粒ｐＭＣ７１Ａ－ＬＥＵ。 相似文献
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根据已发表的ＩＢＤＶ基因组序列设计并合成一对特异扩增ＩＢＤＶ ＶＰ２ｃＤＮＡ的引物，以纯化的ＩＢＤＶ－Ｄ７８弱毒疫苗株基因组为模板，利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增出约１．５ｋｂ产物。将ＰＣＲ产物克隆到ｐＵＣ１９的Ｓｍａｌ位点，经酶切图谱分析等方法鉴定出重组ＶＰ２ｃＤＮＡ质粒（ｐＶＰ２）。将ＶＰ２基因正向插入ＦＰＶ启动子ＬＰ２３Ｐ２下游，连同痘苗病毒启动子Ｐ１１启动的ＬａｃＺ报告基因盒插入ＦＰＶ转移载体中 相似文献
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用ＢＯＸ－ＰＣＲ指纹图谱进行了１８４个格兰氏生菌株,其中有４１个菌株与标准菌种Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ之间的ＤＮＡ指纹图谱相似性大于７０％,在离体条件下,测定这些菌株对水稻纹枯菌的拮抗性能。选出４个代表菌株（Ｇ４３３、Ｇ４３４＾－、Ｇ３９６＾＋、Ｇ２９２＾＋）用于筛选ＲＡＰＤ－ＰＣＲ的有效引物、先后共测试了１２４个随机引物,有８个随机引物能够产生明显与拮抗基因相关的ＤＮ 相似文献
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油菜(B.napus)属种间杂种后代的遗传研究 总被引：4，自引：0，他引：4
潘大仁 《农业生物技术学报》1999,7(2):141-146
本研究通过油菜与萝卜属间杂种（ＡＣＲ）为亲本材料,分别与芸苔Ｂｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ和甘蓝Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ杂交,属种间杂种（ＡＡＣＲ,ＡＣＣＲ）再与甘蓝型油菜品种杂交,以获得稳定的转基因属种间杂种材料。结果指出,属间杂种与芸苔Ｂ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ杂交比与及甘蓝Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ杂交更易获得后代。这些杂种后代分别与甘蓝型油菜回交也表现了这种趋势。细胞学分析指出,属种间杂交由于异源染体的存在 相似文献
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研究了缺Ｚｎ溶液培养对番茄（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ ｍｉｌｌｅｒ）和甜椒（Ｃａｐｓｉｃｕｍ ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ Ｌ．Ｖａｒ．ｇｒｏｓｓｕｍ Ｂａｉｌｅｙ）生长发育及Ｐ、Ｋ、Ｃａ、Ｚｎ在植物体内各部位含量的影响。结果表明,２种蔬菜叶部缺Ｚｎ症状与叶含Ｚｎ量关系不大,而与叶含Ｐ、Ｃａ量密切相关,叶部缺Ｚｎ症状主要是由于叶内Ｐ过度积累产生的毒害作用和叶含Ｃａ量大幅度降低产生的有 相似文献
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含与不含前导序列的乙肝病毒表面抗原在转基因番茄中表达的研究 总被引：24，自引：2，他引：22
将携带有乙型肝炎病毒（ａｄｗ亚型）表面抗原（ＨＢｓＡｇ）基因和ＨＢｓＡｇ及其前导序列（ＨＢｓＡｇ＋ｐｒｅＳ１＋ｐｒｅＳ２）基因的植物表达载体ｐＲＯＫＩＩ，分别导入农杆菌ＬＢＡ４４０４中，通过叶盘转化法得到转基因番茄及其后代。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交证明现任中外源基因已插入到植物染色体中。ＥＬＩＳＡ检测结果表明用ＨＢｓＡｇ基因转化的番茄叶片和果实中都能表达ＨＢｓＡｇ，而用含ｐｒｅＳ的ＨＢｓＡｇ基 相似文献
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狂犬病病毒3aG株核蛋白基因cDNA的克隆及序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
从狂犬病病毒感染的ＢＨＫ细胞裂解上清液中快速提取病毒ＲＮＡ,用反转录－聚合式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法得到编码核蛋白完整结构基因的ｃＤＮＡ,进一步将此基因克隆入ｐＵＣ１８中,进行核苷酸序列分析,并与国外ＰＶ、ＣＶＳ、ＳＡＤＢ１９株以及国内５ａＧ株的Ｎ基因序列进行了同源性比较,证明所克隆Ｎ基因正确。 相似文献
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施用污泥堆肥对作物和土壤的影响 总被引：20，自引：0，他引：20
污泥中的有机质、营养成分可为农业生产提供重要的有机肥源,但污泥中重金属是制约污泥农用的重要因素,为检验污泥堆肥施用后对作物及土壤的影响,文章对污泥与稻草或木屑堆肥的产品进行了盆栽试验研究。结果表明,污泥与稻草或木屑的堆肥作为肥料施用于萝卜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）和菜心（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｐａｒａｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）,产量明显提高,部分堆肥产品增产效果优于化肥,且后效明显。堆肥施用使土壤中有机质、各养分含量增加,微生物活动增强、数量增加,然而作物和土壤中的重金属含量也有不同程度的提高。 相似文献