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适于葡萄不同组织RNA提取方法的筛选 总被引：5，自引：0，他引：5
比较了CTAB法、改良CTAB法、Trizol法、SDS-苯酚法和改良SDS法5种RNA提取方法提取葡萄叶片、花序、茎尖、卷须和果实组织RNA的效果。并进一步从总RNA中分离出了高质量的低分子量RNA(LMWRNA),建立了葡萄LMWRNA提取的方法。改进后的改良SDS法能够克服果实中RNA提取难度大的问题,能够从果实中提取到质量和产量都很高的RNA。结果表明,改良SDS法适用于葡萄叶片、花序、茎尖、卷须组织中总RNA的提取,改进的改良SDS法是从果实中提得LMWRNA较佳选择。在总RNA提取的基础上建立的葡萄LMWRNA提取方法能够达到研究的要求。 相似文献
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[目的]筛选获得提取蟠桃果肉中总RNA的适宜方法.[方法]以盛花后100 d的蟠桃为材料,采用Transplant plus植物总RNA提取试剂提取法、RNAisoTM试剂盒法、改良SDS法、改良CTAB法等四种方法提取总RNA.[结果]两种试剂盒法提取的总RNA质量差,有严重的基因组污染;改良SDS法提取物中含有大量的多糖;采用改良CTAB法所得RNA完整性好,条带清晰无降解,无基因组污染.经过RT - PCR和Northern blot检测后,表明该RNA能够满足后续分子生物学操作的要求.[结论]蟠桃果实总RNA适宜提取方法-改良CTAB法的确定为后续果实发育分子生物学的研究奠定了基础. 相似文献
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成熟葡萄果实中富含多酚多糖类物质,对提取组织RNA造成了很大的干扰.研究分别采用3种试剂盒法和改良的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法,以成熟的葡萄果实为材料,提取总RNA并检验其产量和质量,其中,改良CTAB法是在提取缓冲液中加入了聚乙烯吡咯烷酮、亚精胺、β-巯基乙醇及高浓度的氯化钠.对各组RNA产物进行质量检测,发现3种试剂盒法均没有得到可用的RNA,只有改良的CTAB法能够从新鲜采摘和贮藏的葡萄果实组织中提取出高质量的总RNA,基本无降解和污染,且得率可达到85μg/g以上.进一步研究表明,改良的CTAB法提取得到的RNA可用于后续的RT-PCR、qRT-PCR和CDS扩增试验.改良CTAB法适用于成熟葡萄果实RNA的提取,所得RNA质量良好,满足后续分子试验的需求. 相似文献
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李果实高质量RNA提取方法的比较和优化 总被引：2，自引：0，他引：2
李果实富含酚类和多糖,成熟李果实的总酚和总糖含量分别可达140.28μg/g和80.75mg/g,因此常规方法不能有效提取其RNA以进行分子生物学研究。比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的Trizol法、改良的CTAB法和高氯酸盐法提取李果实RNA的效果,结果表明高氯酸盐法效果较好。根据李果实材料的特点,进一步优化了高氯酸盐法,包括用0.1mol/LTris-硼酸缓冲液(pH7.4)取代0.3mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.3);提取缓冲液中β-巯基乙醇的浓度由1%提高到2%,可溶性PVP的浓度由8.5%降低至1%;联合使用10%乙醇和醋酸钾以除去多糖;用12000×g离心替代使用填充有玻璃丝的Centriflo柱实现分离提取缓冲液中杂质的目的等。在230、260和280nm下测定所提取RNA的吸光值,并用提取的RNA反转录后扩增β-actin基因片段验证RNA的质量,结果表明:用优化了的高氯酸盐法提取李果实的RNA完整性好,杂质少,得率较高,适用于RT-PCR等后续实验,并且也适合提取其他富含酚类物质或多糖果实的RNA。 相似文献
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越橘果实总RNA提取方法比较研究 总被引：2，自引：0，他引：2
越橘成熟果实富含多糖、多酚和花色素苷等次生代谢物质,严重影响果实总RNA的提取.试验以越橘成熟果实的果肉和果皮为试材,采用适合多糖多酚植物RNA提取试剂盒及试剂和改良的CTAB法提取越橘果肉和果皮中总RNA,经琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白测定仪(NanoDrop 2000)检测.结果表明,改良的CTAB法效果最好,提取的总RNA完整性好,纯度高.通过RT-PCR验证,所提取的总RNA可以满足基因克隆等分子生物学试验的要求. 相似文献
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[目的]建立一种有效的巴旦木花药总RNA提取方法,为巴旦木花粉SFB基因克隆和自交不亲和机制研究奠定基础.[方法]利用改良的CTAB法从巴旦木(Amygdalus communis L.)花药中提取高质量的总RNA.[结果]该方法获得的巴旦木花药总RNA完整性好、无多糖和蛋白质的污染,产量较高(鲜花药为283.44 μg/g),OD260/OD280在1.89～1.99,OD260/OD230>2.0.提取的巴旦木花药总RNA反转录成cDNA,以SFB(S-haplotype-specific F-box gene)基因简并引物PCR扩增,获得了目的片段.[结论]改良的CTAB法是一种简单、快速有效的巴旦木花药总RNA提取方法,提取的花药总RNA能够满足巴旦木进一步的分子生物学研究. 相似文献
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花生子叶RNA提取方法比较与分析 总被引：1，自引：0，他引：1
以HY22组培苗为材料,比较改良胍酸酚抽提法、改良CTAB法及离心柱式试剂盒法提取RNA的效果,以筛选出适合花生子叶RNA提取的方法。结果表明：试剂盒法由于样品在通过离心柱时会出现阻塞现象,易使RNA提取结果受到较大影响,而改进后的胍酸酚抽提法与改良CTAB法则能避免该情况且更节约成本;经紫外分光光度法与电泳检测,改进后的两种方法的RNA提取效果均较好;RT—PCR结果表明,提取的总RNA可直接用于分子克隆和基因表达分析等分子生物学实验。 相似文献
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多糖污染是从田间水稻叶片和未成熟种子等高含糖组织中提取高质量RNA的主要限制因素.我们介绍一种简单经济的RNA提取方法,它适合从水稻叶片和未成熟种子这些富含多糖的组织中提取总RNA.这种方法可以克服产率低和质量低的问题.RNA提取后经过电泳和分光光度计分析结果表明,每克水稻组织总RNA产率在520 μg到800 μg之间,OD260/230比值大于2.0,OD260/280比值大于1.9.提取的RNA可以用于体外反转录cDNA、mRNA分离和基因表达系列分析（serial analysis of gene expression,SAGE）库的构建. 相似文献
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大豆种子DNA快速提取方法的改良及应用 总被引：2，自引：0，他引：2
高质量的DNA是进行基因克隆等分子生物学试验的前提条件。因大豆种子中蛋白质和油脂含量丰富,利用传统方法提取DNA质量很难达到试验要求。研究在SDS提取液的基础上,通过添加表面活性剂NP-40和Tween-20,优化出一种适合于大豆种子DNA快速提取的方法。优化后的SDS方法提取的DNA质量较高,OD260/OD280在1.809～1.916之间,无蛋白质和RNA污染。对该方法提取的DNA进行了基因克隆和分子标记的试验验证,结果表明,它们能够用于大豆基因克隆、分子标记。 相似文献
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一种无需DEPC提取高质量棉花总RNA的方法 总被引：1，自引：0，他引：1
DEPC做为RNAnase抑制剂常用于RNA的提取,但其本身具有毒性,容易对操作者产生伤害并易造成环境污染。该实验以改良CTAB法为基础,提高β-巯基乙醇的浓度到10%,无需DEPC就能提取高质量的RNA。分别以不同陆地棉为材料提取了棉花的总RNA,测得OD260/OD280在1.7~2.1之间,且大部分样品都能清晰看到3条RNA条带,将此RNA反转录获得的cDNA为模板克隆到了棉花ATP合成酶β亚基基因,说明此方法提取的棉花总RNA既能满足分子生物学实验要求又大大地减少了毒害作用。 相似文献
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[目的]建立适用于禾本科作物不同组织总RNA的快速、高效提取方法,为进行后续的分子生物学研究奠定基础.[方法]采用Trizol试剂法,通过改变抽提上清液吸取量、沉淀方法及沉淀漂洗次数,对甘蔗、玉米和水稻的叶片、茎尖和根尖的总RNA提取方法进行优化.[结果]与吸取0.4 mL上清液相比,吸取0.2 mL上清液的总RNA OD260/OD280、OD260/OD230值分别在1.95~2.00和2.11~2.44,所获得的总RNA纯度较高.沉淀漂洗两次的OD260/OD230值(2.11~2.47)明显高于沉淀漂洗1次的总RNA OD260/OD230值(1.01~1.61),总RNA纯度较高.经异丙醇沉淀所得的各材料的总RNA 28S、18S和5S谱带清晰,无拖尾现象,总RNA完整性较好;LiCl沉淀法的RNA条带较模糊粘连,5S条带明显弥散,总RNA产率相对较低.以Trizol-异丙醇法提取的甘蔗总RNA为模板进行GAPDH基因片段扩增,所获甘蔗的叶片、茎尖和根尖的GAPDH基因表达丰度很强,无特异扩增,目的片段长度为153bp.[结论]改良Trizol-异丙醇法提取甘蔗、玉米和水稻不同组织的总RNA带型清晰、完整性好、纯度和产率高,适用于快速、高效提取禾本科植物不同组织总RNA. 相似文献
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富含多糖多酚的侧柏叶片总RNA提取方法 总被引：2，自引：0，他引：2
以侧柏叶片为试验材料,利用Trizol法、CTAB法、SDS酚法和改进的SDS酚法提取RNA,结果表明:Trizol法和CTAB法都不能提出侧柏叶片总RNA;SDS酚法提取,提取物中含有大量多糖,提取的RNA质量少,不足以用于后续的研究;改进的SDS酚法提取的RNA纯度高,电泳效果好.进一步通过反转录和特异引物扩增试验发现:利用改进的SDS酚法提取的RNA反转录效果好,能扩增出预期的基因片段,可很好地应用于基因克隆与基因表达分析等分子生物学试验研究. 相似文献
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介绍了一种适合于根瘤菌及其它革兰氏阴性细菌的RNA提取方法。它具有简便、快速等特点,且所提取的RNA样品质量较高,可直接用于RT-PCR合成、Northern杂交等分子生物学操作。该方法具有实用性强、重复性好的特点。提取的RNA无DNA等污染物,并且其产量、纯度完全能满足分子克隆和基因表达研究的需要。该方法简单、快速、纯度高、完整性强,方便有效。 相似文献
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草莓不同组织RNA提取方法的改良研究 总被引：1，自引：0，他引：1
探讨一种适于草莓不同组织的RNA提取的改良方法。通过增加裂解液震荡强度、离心柱多次吸附、增加去蛋白液温育次数及漂洗次数等步骤对EASYspin RNA提取总RNA操作方法进行改进。结果表明,改良方法提取的草莓根、茎、叶、果实、花中的总RNA,电泳检测都出现清晰的28S和18S两条明显的条带,表明总RNA完整性较好;紫外分光计分析其OD260/OD280值在1.88至2.06之间,OD260/OD230值均大于2.0,RNA浓度含量为310~500μg/mL,表明提取的总RNA纯度好、含量高;基于RNA中mRNA反转录的RT-PCR扩增Actin基因分析结果表明,改良方法提取的草莓不同组织的总RNA质量高。总之,经过电泳、紫外、反转录分析结果证实,改良EASYspin适于草莓果实等不同组织总RNA的提取,是草莓类似果树种类总RNA提取的首选借鉴方法。 相似文献