共查询到18条相似文献，搜索用时 968 毫秒
1.
细胞凋亡可及时清除机体内多余和受损伤的细胞，以维持组织器官的稳定性。为探讨凋亡过程在公猪附睾发育过程中发挥的潜在作用，本实验以从江香猪为研究对象，利用实时荧光定量PCR(qRTPCR)、免疫组织化学（IHC）和WesternBlot技术分析了附睾15d（初情前期）、30d（初情期）、60d（初情后期）和180 d（性成熟期）4个时期凋亡相关因子Caspase-3、Bax和Bcl-2的差异表达模式。qRTPCR结果显示：Casp3和Bax基因mRNA在从江香猪60d表达量最高，Casp3在15d表达量最低，15d和180 d差异不显著；Bax在180 d表达量最低，且15 d、60 d和180 d差异不显著；Bcl-2在60 d表达量最低，在15 d表达量最高，4个日龄段差异显著。免疫组化结果显示：Caspase-3蛋白在30 d主要表达在附睾管腔的微绒毛，而在180 d主要表达在管腔中的精子上。Western Blot结果显示：Caspase-3蛋白表达丰度依次为60 d>30 d>15 d>180 d，且各日龄段差异显著。综上，本实验发现不同日龄从江香猪附睾凋亡相关... 相似文献
2.
3β-羟基甾脱氢酶（3β-HSD）特异性表达于从江香猪的附睾组织中，并且在初情期时表达量最高。而目前对3β-HSD在初情期附睾不同区段的研究未被报道，因此本实验以香猪不同区段的附睾组织作为实验对象，通过使用免疫组织化学（IHC）与蛋白质免疫印迹（WB）分析3β-HSD在初情期香猪附睾5个区段（Ⅰ-Ⅴ区）的具体表达位置和表达量。IHC结果显示3β-HSD定位于香猪附睾的5个区段，且主要定位于附睾管上皮周围的平滑肌、管腔内附睾液及管腔微绒毛中。WB结果显示3β-HSD在Ⅳ区的表达量最高，并且显著高于Ⅰ区、Ⅱ区、Ⅲ区及Ⅴ区。此外，Ⅲ区的表达量显著高于Ⅰ区，但3β-HSD在Ⅰ区、Ⅱ区和Ⅴ区的各组之间并无统计学差异。综上，本研究发现3β-HSD在初情期香猪附睾定位于附睾管管周平滑肌、管腔内附睾液及管腔微绒毛，表达量以Ⅳ区最高，并且以区段特异性表达。 相似文献
3.
旨在探究TAS1R3基因通过mTOR对从江香猪自噬相关基因表达的影响。本试验选择30日龄健康雄性从江香猪3头，采集睾丸组织并培养出睾丸间质细胞。将构建成功的干扰载体和空载体转染至细胞中，利用qRT-PCR检测其对TAS1R3基因表达影响，运用qRT-PCR和Western blot检测TAS1R3基因干扰后对味觉受体第一家族一号受体(TAS1R1)、细胞外信号调节激酶1(ERK1)、细胞外信号调节激酶2(ERK2)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、BECN1和微管相关蛋白1轻链3β(MAP1LC3B)表达的影响。结果表明，当TAS1R3基因被干扰后，相较于shRNA-NC对照组，TAS1R1、ERK1、ERK2、mTOR基因mRNA表达量均极显著降低(P<0.01),自噬因子BECN1和MAP1LC3B表达量极显著升高(P<0.01)。Western blot结果表明当TAS1R3基因被干扰后，与shRNA-NC对照组相比，蛋白T1R3、T1R1、p-mTOR、p-S6K1、p-ERK12均极显著降低(P<0.01),而自噬蛋白Beclin 1表达量极显著升高(P<... 相似文献
4.
《畜牧与兽医》2017,(2):51-56
为分析T1R1(味觉受体1家族Ⅰ型)、T1R3(味觉受体1家族Ⅲ型)及PepT1(Ⅰ型寡肽转运载体)基因对湖羊氨基酸吸收的影响,以6月龄的湖羊为试验材料,采用荧光定量PCR技术对湖羊瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠的T1R1、T1R3和PepT1基因的表达量进行相对定量分析。结果表明:T1R1和T1R3基因在检测的各段组织中均有表达,而PepT1基因在结肠中不表达;其中T1R1和T1R3基因在十二指肠中表达量最高,其次是空肠,并且两者差异显著极显著(P0.01);T1R1和T1R3基因在十二指肠(P0.01)和空肠(P0.05)中的表达量与消化道其他部位相比差异极显著或显著;Pep T1基因在空肠中表达量最高,其次是回肠,并且两者差异极显著(P0.01);Pep T1基因在空肠和回肠中的表达量与消化道其他部位相比差异极显著(P0.01)。该结果为进一步研究T1R1、T1R3和Pep T1基因对湖羊氨基酸吸收相关功能影响奠定基础。 相似文献
5.
本研究旨在阐明荣昌猪BMP15基因在荣昌猪性成熟前不同发育期的表达特性及其与SMADs信号相关基因的表达关系。采集1月龄、3月龄及5月龄荣昌猪卵巢组织,利用qRT-PCR及石蜡切片免疫荧光染色法分析荣昌猪不同月龄卵巢组织内BMP15基因表达及细胞定位特征;利用5月龄卵巢活组织添加重组人BMP15蛋白及TGF-β受体抑制剂（LY215799和LY2109761）,应用qRT-PCR及Western blot方法分析BMP15及SMADs信号通路相关基因SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMAD7、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β RⅠ和TGF-β RⅡ表达特征及BMP15/SMADs信号通路。结果表明：从1月龄至5月龄,随着荣昌猪生长发育,卵巢组织内BMP15基因mRNA表达量呈上调表达（P<0.05）;石蜡切片免疫荧光试验表明,5月龄卵巢组织卵母细胞周围颗粒细胞内存在BMP15蛋白荧光信号;从3月龄至5月龄的卵巢组织内BMP15、SMAD4、TGF-β1及TGF-β RⅡ基因在mRNA水平呈上调表达（P<0.05）,而SMAD2、TGF-β2及TGF-β RⅠ呈下调表达（P<0.05）;通过5月龄卵巢活组织添加重组人BMP15蛋白、TGF-β RⅠ/Ⅱ及TGF-β RⅠ受体抑制剂培养,发现TGF-β RⅠ/Ⅱ抑制剂（LY2109761）明显抑制TGF-β RⅡ受体蛋白的表达,TGF-β RⅠ抑制剂（LY2157299）不能抑制TGF-β RⅡ受体蛋白的表达。上述结果表明,荣昌猪BMP15基因在荣昌猪性成熟前的卵巢组织内呈上调表达,SMAD4、TGF-β1及TGF-β RⅡ也呈上调表达。本试验研究表明BMP15基因通过TGF-β RⅡ介导SMAD4信号分子调控下游基因的表达,为进一步研究荣昌猪BMP15基因在卵泡发育中发挥的作用提供理论依据。 相似文献
6.
《中国畜牧杂志》2021,(10)
实验旨在研究鲜味受体(Taste Receptor Family 1 Subunit 1/Taste Receptor Family 1 Subunit 3,TAS1R1/TAS1R3)对从江香猪肌内前体脂肪细胞自噬及脂质代谢的影响,为发掘从江香猪肉质优良性状的形成机制提供思路。实验通过构建TAS1R3 shRNA干扰载体,并转染至从江香猪前体脂肪细胞以干扰TAS1R1/TAS1R3的表达水平;通过添加低浓度(2.5 mmol/L)、中浓度(5 mmol/L)、高浓度(10 mmol/L)L-谷氨酸作用于细胞不同时间以激活鲜味受体TAS1R1/TAS1R3,用qRT-PCR检测自噬相关基因以及脂质代谢相关基因的表达水平。结果表明:构建的干扰载体可有效干扰细胞内TAS1R1/TAS1R3的mRNA表达水平(P0.01);哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达水平下降(P0.01),自噬关键因子微管相关蛋白1轻链3B (MAP1LC3B)和Beclin 1表达水平上升(P0.01);脂质代谢相关基因神经肽Y (NPY)、乙酰辅酶A羧化酶α(ACACA)表达水平均下降(P0.01),脂蛋白脂肪酶(LPL)表达水平上升(P0.01);10 mmol/L L-谷氨酸处理细胞6 h后,细胞内TAS1R1/TAS1R3的mRNA表达水平升高(P 0.01),mTOR表达水平上调(P0.05),MAP1LC3B和Beclin1的表达水平下降(P0.01),NPY、ACACA的表达水平升高(P0.05),LPL表达水平下降(P0.01)。本研究表明TAS1R1/TAS1R3调节从江香猪肌内前体脂肪细胞自噬和脂质代谢过程,但这两个过程是否相关仍需后续研究。 相似文献
7.
旨在检测PPP1R3C在爱拔益加肉鸡不同组织中的表达情况，探究外源胰岛素和能量限饲对鸡体胰岛素敏感组织中PPP1R3C表达的影响。试验一，取不同发育阶段的雌性肉鸡（E14、E19、D7和D21，n=10）组织样，通过qRT-PCR技术检测PPP1R3C在不同时期胸肌中的表达；试验二，腹腔注射胰岛素（INS）或PBS，取两组注射后不同时间点（0、15、120和240 min，n=5）的D24雄性肉鸡组织样，检测PPP1R3C在肉鸡不同组织中的表达，探究外源胰岛素处理对肉鸡胰岛素敏感组织中PPP1R3C表达的影响；试验三，取D18雌性肉鸡，一组饲喂常规日粮（n=20），另一组饲喂限制30%能量的日粮（n=20），饲喂至48天屠宰取样，探究30%能量限饲对肉鸡PPP1R3C表达的影响；试验四，D7雌性肉鸡随机分为3组，对照组、15%能量限饲组和15%蛋白限饲组（n=10），分别饲养至D21屠宰取样，探究能量限饲是否具有剂量依赖性。结果表明：1）PPP1R3C在胸肌组织中高表达，其次是心和腿肌组织（P<0.05）。2）PPP1R3C表达量呈现了明显随鸡发育而升高的趋势。3） INS注射显著下调了胸肌中PPP1R3C的表达，在注射后120 min时PPP1R3C的表达显著低于0和15 min （P<0.05）；PBS注射后胸肌中PPP1R3C的表达没有显著差异，在注射后120和240 min时，INS组PPP1R3C表达显著低于PBS组（P<0.05）。INS注射也降低了肝中PPP1R3C的表达，在INS处理15 min时PPP1R3C的表达已显著低于0 min （P<0.05）；PBS注射后肝中PPP1R3C表达处于动态平衡，在注射后120 min时，INS组PPP1R3C表达显著低于PBS组（P<0.05）。胰岛素注射后在腹脂中出现了与胸肌和肝相反的结果，在胰岛素注射后15 min时PPP1R3C的表达显著高于0、120、和240 min （P<0.05），而0、120、和240 min之间没有显著差异；PBS注射后腹脂中PPP1R3C表达没有显著变化，在注射后15 min时，INS组PPP1R3C表达量显著高于PBS组（P<0.05）。4）30%能量限饲导致PPP1R3C在胸肌和肝中的表达均显著下调（P<0.05）。5）15%能量限饲和15%蛋白限饲不能显著影响胸肌中PPP1R3C的表达。以上研究表明，PPP1R3C在胸肌中表达最高，并随着个体发育表达上升，且外源胰岛素对PPP1R3C的表达效应具有明显的组织特异性。30%能量限饲可产生类似于外源胰岛素的效应，且能量限饲存在一定的剂量依赖性，本研究结果为进一步揭示鸡PPP1R3C功能奠定了基础。 相似文献
8.
试验旨在克隆从江香猪载脂蛋白A1（apolipoprotein A1,ApoA1）基因,研究ApoA1基因在真核细胞中的亚细胞定位情况。通过提取从江香猪总RNA,采用RT-PCR、目的基因的连接、转化等方法构建携带有绿色荧光蛋白的pEGFP-C1-ApoA1重组质粒,并经菌落PCR、双酶切及测序鉴定正确后,转染HEK-293T细胞,36 h后观察荧光,分析ApoA1蛋白在真核细胞中的亚细胞定位情况。结果表明,从江香猪ApoA1基因与GenBank上公布的野猪序列相比,有6处发生了碱基突变,其中5处为有义突变,分别导致180位氨基酸由丙氨酸变为谷氨酸、185位氨基酸由组氨酸变为谷氨酰胺、186位氨基酸由缬氨酸变为亮氨酰胺、209位氨基酸由天冬氨酸变为甘氨酸;PSORT Ⅱ Prediction和荧光共定位试验结果均表明,ApoA1蛋白的表达主要集中在细胞外基质,约占总表达量的77.8%。本试验成功克隆了从江香猪ApoA1基因CDS区,且ApoA1蛋白的表达主要集中在细胞外基质中,为进一步构建ApoA1基因转基因动物模型、开展ApoA1基因与人类因肥胖引起的相关疾病关系的研究奠定基础。 相似文献
9.
试验旨在探究初情期前后生精上皮周期差异及睾丸发育过程中的形态学变化。通过测定15、30、60和90 d睾丸相关指数，结合睾丸组织形态学特征，判断香猪初情期，划分从江香猪生精上皮周期。结果显示，30 d的睾丸指数较15 d极显著升高（P<0.01），睾丸重、长轴及短轴的增长率分别为298.05%、66.42%和65.45%，60和90 d两个阶段睾丸重增长率相对稳定。形态学观察表明，从江香猪30 d时生精小管出现游离精子，完成第一次生精并进入初情期；与15 d相比，30 d生精小管面积和生精上皮厚度极显著增加（P<0.01），增长率分别为136.12%和40.19%，在60和90 d均处于稳定增长状态。睾丸细胞数统计显示，日龄增加不影响支持细胞（setoli cells，SC）数量（P>0.05），而30 d生殖细胞数（germ cells，GC）较15 d极显著增加（P<0.01）。相关分析结果发现，生殖细胞数量增加与生精小管面积增大、生精上皮厚度变化之间呈明显正相关（r=0.994；0.96）。根据生殖细胞组合形式差异，将初情期前后生精上皮分为3和8个阶段。初情期前生殖细胞以第一次减数分裂前期为主，A、B型精原细胞、SC、初级精母细胞（primary spermatocyte，Ps）、前细线期（preleptotene，PI）、细线期（leptotene，L）等生殖细胞在初情期前后生精上皮中均存在，而圆形精子（round spermatids，R）、延伸精子（elongating spermatid，E）、精子细胞（spermatozoa，S）仅存在于初情期后的生精上皮。本研究结果表明，从江香猪30 d初情，睾丸发育以生殖细胞和生精小管面积的迅速增加为主，该结果对从江香猪早熟性状挖掘、种猪选育及开发利用等有重要的指导意义。 相似文献
10.
载脂蛋白E是决定血浆胆固醇水平的重要遗传因素之一,其作为多种脂蛋白的结构蛋白,在脂类的运输和代谢中起着非常重要的作用。本文以脂肪型小型猪从江香猪为研究对象,通过克隆从江香猪载脂蛋白E(ApoE)基因CDS区,构建携带有绿色荧光蛋白的p EGFP-C1-ApoE重组质粒,转染HEK-293T细胞,旨在研究ApoE基因表达产物在真核细胞中的表达情况。序列比对结果表明,从江香猪ApoE基因与Gen Bank上公布的野猪序列相比,有8处发生了碱基突变,其中7处发生在C和G之间,另一处103位T→C的碱基突变,导致丝氨酸(S)突变为稀有密码子脯氨酸(P),使ApoE基因稀有密码子由23个增加到24个;生物信息学分析发现,突变后从江香猪ApoE基因二级、三级结构,蛋白理化性质均发生了改变。信号肽预测软件发现,ApoE蛋白在1-18位氨基酸残基位具有信号肽。荧光共定位实验结果表明,ApoE蛋白在细胞中表达部位与软件预测结果一致,均在细胞质中表达。相关研究为进一步构建ApoE基因转基因动物模型奠定基础。 相似文献
11.
MENG Lijie WANG Weiyong YANG Yi XU Yongjian FENG Xianzhou HUANG Yong GAO Yi GONG Ting 《畜牧兽医学报》1956,51(11):2720-2730
The aim of this experiment was to study the expression pattern of taste receptor family 1 subtypes 1 (T1R1) and 3 (T1R3) during epididymal development of Congjiang Xiang pig, and to explore the possible role of these taste receptors in mammalian male reproductive function and its potential medical value. In this study, the differential expressions of T1R1 and T1R3 in epididymis at 4 key developmental periods (neonatal (15 d), peri-puberty (30 d), puberty (60 d) and sexual maturity (180 d)) of Congjiang Xiang pigs were analyzed. RT-qPCR, immunohistochemistry (IHC) and Western blot were used to detect the changes and distribution of the two taste receptors in epididymis of Congjiang Xiang pigs at different ages. The results of RT-qPCR showed that the expression of TAS1R1 and TAS1R3 mRNA increased gradually from neonatal (15 d) to sexual maturity (180 d), and there was a significant difference between each period (P<0.01). The results of Western blot showed that the expression of T1R1/T1R3 protein was the highest on the 180 d and the lowest on the 15 d. The average protein abundance of T1R1/T1R3 was as follows: 180 d > 30 d > 60 d > 15 d. The results of IHC showed that T1R1 and T1R3 proteins were distributed in the epididymis of Congjiang Xiang pigs at 4 periods, in which T1R1 protein was mainly concentrated in epithelial cell membrane, especially in basal and narrow cells, while T1R3 protein was strongly positive in stereocilia, annular vacuoles and spermatozoa. In summary, the expression of T1R1/T1R3 in the epididymis of Congjiang Xiang pigs increased gradually from 15 d to the peak of sexual maturation, which was related to the differential expression of T1R1/T1R3 in epithelial basal cells, narrow cells and stereocilia of epididymis. These special expression patterns were time related to the physiological function of epididymis, so it is speculated that T1R1/T1R3 are involved in the regulation of sperm maturation and storage in epididymis. 相似文献
12.
The underlying mechanism of taste receptor type 1 subunit 2 (T1R2) and taste receptor type 1 subunit 3 (T1R3) in the hormonal and reproductive system is still elusive. A low or a high dose of sweetness equivalent to that sodium saccharin (SS, 1.5 or 7.5 mM) and rebaudioside A (RA, 0.5 or 2.5 mM) was administered to young female guinea pigs for 28 consecutive days from the age of 28 days. Our results indicated that the sweet taste receptor subunit T1R2 was markedly expressed in the ovary and uterus of guinea pigs, whereas the T1R3 protein was expressed at a lower level. We elucidated that low‐dose (1.5 mM) SS increased body and ovary weight associated with elevated ovarian expression of T1R2 in guinea pigs, unlike the high‐dose (7.5 mM) SS, which suppressed the ovarian expression of T1R2 and resulted in certain adverse effects on ovarian and uterine morphology. Furthermore, high‐dose (2.5 mM) RA increased the number of corpus luteum and elevated uterine expression of T1R2, whereas low‐dose (0.5 mM) RA induced increased secretion of serum progesterone. Therefore, our findings suggest that we should pay more attention to the potential adverse effects, including increases in ovary weight, morphology changes, and increased progesterone that result from the dose‐dependent regulation of T1R2 by non‐nutritive sweeteners (NNS) in the ovaries and uteri of peripubertal females. 相似文献
13.
14.
为了探索抑制素α基因(inhibin-α,INHA)与从江香猪繁殖性状之间的相关性,试验采用特异性聚合酶链式反应(PCR)技术克隆从江香猪INHA基因,测定其核苷酸序列,通过等位基因特异性PCR(allele-specific PCR,AS-PCR)方法检测从江香猪低产群与高产群之间INHA基因的多态性变化,以实时荧光定量PCR技术检测高产、低产从江香猪卵巢组织中INHA基因的表达量。结果表明,从从江香猪基因组中成功克隆了INHA基因,编码区完整,全长1095 bp,编码364个氨基酸;经比对发现, INHA基因外显子2序列中存在2个候选SNPs位点(G359A和A373G)。经大样本检测,从江香猪高产群与低产群之间2个候选SNPs位点的基因频率没有明显差异;相比之下,高产从江香猪卵巢中INHA基因的表达量较高。研究结果提示,从江香猪INHA基因结构保守,可能主要通过基因的表达量变化调节从江香猪卵巢的生长和卵泡的发育。 相似文献
15.
ZHAO Jia-fu DUAN Zhi-qiang YANG Yuan-qing JI Xin-qin WANG Yuan-yuan SUN Cheng-juan 《中国畜牧兽医》2017,44(7):1954-1960
This experiment was aimed to clone apolipoprotein A1(ApoA1) gene of Congjiang Xiang pig, and study the subcelluar localiztion of ApoA1 gene in eukaryocyte. The recombination plasmid pEGFP-C1-ApoA1 was constructed with RT-PCR and other methods, and detected by colony PCR,double digestion and sequencing, after successful construction of the recombination plasmid pEGFP-C1-ApoA1,the subcellular localization of ApoA1 protein were analyzed by fluorescence co-localization technique in the 36 h-transfected HEK-293T cells. Compared with ApoA1 gene of Sus scrofa submission in GenBank, the results showed that six base mutations were found in ApoA1 gene of Congjiang Xiang pig, five of above mentioned mutations were sense mutations, causing alanine to glutamic acid, histidine to glutamine, valine to leucine and aspartic acid to glycine in 180,185,186 and 209 amino acid residues, respectively. Using PSOR Ⅱ Prediction and fluorescence co-localization, it was found that the expression of ApoA1 protein was observed mainly in the extracellular matrix (77.8%). In conclusion, ApoA1 gene of Congjiang Xiang pig was cloned successfully, and the expression of ApoA1 protein was mainly concentrated in the extracellular matrix. These results would provide a knowledge for further constructing the ApoA1 gene transgenic animal models, and contribute to understanding the relation between ApoA1 gene and the human obesity-induced diseases. 相似文献
16.
17.
To reveal the relationship between inhibin-α(INHA) gene and the reproductive traits of Congjiang Xiang pig, INHA gene was cloned and sequenced taking the genomic DNA of Congjiang Xiang pigs as templates by polymerase chain reaction(PCR) method.The polymorphisms of INHA gene were tested in Congjiang Xiang pig populations with high-litter size and low-litter size using allele-specific PCR(AS-PCR) method.The expression profile of INHA gene in ovaries was detected from Congjiang Xiang pigs with high-litter yiled or low-litter yiled by Real-time PCR method.The complete coding region of INHA gene was 1095 bp in length, which coded for 364 amino acid residues.Compared with the known sequence, two candidate sites, G359A and A373G, were found out from exon 2 region of INHA gene in Congjiang Xiang pig.After investigation for the two sites in a large population, the frequency of alleles between two populations was not significant and without obvious relativity with the litter yiled of Congjiang Xiang pig.However, the INHA mRNA level in the ovary of Congjiang Xiang pig with high-litter yiled was higher than that with low-litter yiled.It suggested that INHA gene was much conserved, INHA gene expression level might be concerned for the regulation of ovary growth and follicle development in Congjiang Xiang pig breed. 相似文献
18.
为检测黑色素受体1(melanocortin receptor 1,MC1R)基因型在不同毛色猪种中的分布,研究该基因在猪毛色决定中的地位和作用,本试验使用PCR-SSCP和PCR-RFLP方法对军牧1号白猪、杜洛克猪、西藏小型猪和大白猪的MC1R基因型进行了检测。结果显示,长白猪、大白猪存在nt894insCC和G1197A突变;杜洛克猪存在G668C、C1318T和G1554A突变;西藏小型猪存在C1318T和G1554A突变,而在nt894insCC位点则表现出其他基因型。通过对4个猪种的MC1R基因型的检测,为研究MC1R基因对毛色的作用机理奠定了基础。 相似文献