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<正> 沙门氏菌是分布广泛的肠道病原菌,其带菌者又常污染环境及食品,引起人、畜肠道传染病和诱发食物中毒。各有关部门越来越广泛的开展了沙门氏菌的检验工作,我厂生产的肉类食品,原用生化反应常规法(试管法)进行沙门氏菌鉴定,因检验时间长,需要人力、物力多,不适应生产需要。我们在试验的基础上改用沙门氏菌生化反应快速检验法,效果较好,具有简单、快速、准确的特点,现介绍如下: 相似文献
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Real-time PCR方法检测肉品中的沙门氏菌 总被引：2，自引：2，他引：0
应用SYBR Green I染料能选择性结合双链DNA的特点,可检测到沙门氏菌fimI基因特异性靶序列扩增所产生的荧光信号,通过熔解曲线可知其熔点值约为85.6℃,而对其他非沙门氏菌则检测不到荧光信号。建立了一种肉品中的沙门氏菌Real-time PCR检测方法,用该方法检测市售牛肉、香肠中的沙门氏菌,其检测灵敏度分别为13,12 cfu/25 g,从样品的处理到得出检验结果可以在10 h内完成。该检测方法具有简便、快速、特异性强、敏感度高等特点。 相似文献
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为建立一种快速、特异性和实用性强、灵敏度高的沙门氏菌检测方法,参考GeneBank中登录号为U25631的沙门氏菌基因序列.设计并合成引物,组成半套式RT-PCR,扩增片段为581bp.应用该半套式RT-PCR对标准菌株伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、链球菌、巴氏杆菌和结核杆菌及临床伤寒分离出的沙门氏菌H1、H2株进行检测.并对延边地区牧场的产生-临床腹泻的延边黄牛血液中分离培养的不同菌株进行检测.结果表明,仪伤寒沙门氏菌标准株和临床一株样品在581bp处扩增出了特异的片段;该方法检测灵敏度为1 fg 核酸,且重复性好.说明此半套式RT-PCR法可以准确、灵敏、快速地检测出腹泻延边黄牛血液中的伤寒沙门氏菌. 相似文献
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目前,沙门氏菌检验采用传统的分离培养方法,所需时间长,消耗试剂多,不适合在现场对大量样品作检验。而用作鉴定沙门氏菌的常规O、H血清国内又不能保证供应。前不久,我们研究了抗沙门氏菌A-F群主要O抗原的单克隆抗体(单抗)及其在沙门氏菌鉴定和沙门氏菌病诊断中的应用,取得了满意结果。但H抗原单抗国内外尚未见报道。我们应用淋巴细胞杂交瘤技术,以甲型副伤寒、乙型副伤寒,伤寒和加明那拉沙门氏菌为色疫原 相似文献
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应用聚合酶链反应快速检测沙门氏菌 总被引：36，自引：5，他引：36
根据沙门氏菌组氨酸转运操纵子基因序列设计引物，对沙门氏菌属A－F各群中共15株沙门氏菌标准菌株、27株沙门氏菌现场分离菌株和其他10株非沙门氏菌菌株进行聚合酶链反应（PCR）扩增，结果沙门氏菌均出现495bp特异性DNA扩增条带，所有对照均未出现特异条带，提示这对引物具有很强的沙门氏菌属特异性。PCR敏感性试验显示，该体系能检出14pg以上的沙门氏菌DNA。通过对5种不同的DNA模板提取方法的比较，选择操作简便、快速、成本低廉的热裂解法。采用该方法。采用该方法，对生鲜奶样进行检测，经与国家标准卫生检验方法相比较，两者符合率达100％。 相似文献
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为查明湘西北某规模化奶牛场犊牛腹泻的主要病因,采用细菌培养、平板划线法分离、鉴别培养基分离、革兰氏染色、生化鉴定等方法对细菌进行分离与鉴定;选取28种抗菌药用Kirby-Bauer纸片法进行药敏试验。结果表明,分离出9株沙门氏菌。沙门氏菌对丁胺卡那和头孢他啶敏感,敏感率为7.14%;对庆大霉素和头孢曲松中介,中介率7.14%;对诺氟沙星、红霉素、氧氟沙星等24种药物产生耐药性,耐药率为85.71%。说明沙门氏菌是引起该场犊牛腹泻的主要原因之一,临床上沙门氏菌的耐药性较高,应引起高度重视。 相似文献
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嗜水气单胞菌的检测方法比较 总被引：3，自引：0，他引：3
[目的]比较实时荧光定量PCR法、PCR法及细菌培养法检测嗜水气单胞菌的灵敏度与特异性。[方法]在常规PCR法的基础上设计并建立了实时荧光定量PCR法,并采用该法与常规PCR及传统细菌培养法3种方法同时对嗜水气单胞菌进行检测与比较。[结果]实时荧光定量PCR检测的灵敏度可达12.5 cfu/ml,达到了只需13个细菌就可得到阳性结果的灵敏度,具有很高的特异性,且检测速度快,从细菌核酸提取至完成检测仅需3 h左右,比传统细菌培养法和常规PCR法所需时间大大缩短。实时荧光定量PCR检测由于在密封环境中进行,避免了产物与环境间的交叉污染。[结论]实时荧光定量PCR检测是3种方法中最为快速敏感的方法,是一种比较实用的嗜水气单胞菌的检测方法。 相似文献
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为沙门氏菌的快速检测与鉴定提供参考，从传统标准检测方法、特异性PCR、分子系统发育3个层面，其中传统标准检测方法基于食品安全国家标准GB 4789.4-2016《食品微生物学检验沙门氏菌检验》、特异性PCR基于invA基因、分子系统发育基于16S rDNA,对能力验证(CFAPA-805)样品进行沙门氏菌的分离鉴定。结果表明：3种检测方法结果一致，样品341中检出沙门氏菌，其中生化鉴定、血清学鉴定与分子系统发育鉴定结果显示，此次阳性样品中的沙门氏菌为沙门氏菌生化群(Ⅰ),肠炎沙门氏菌肠炎亚种，血清分型为O:9,12:H:g, m。本次实验室的能力验证结果为“满意”,肯定实验室沙门氏菌检测能力。通过比较，特异性PCR鉴定可以确定沙门氏菌是否检出，生化鉴定、血清学鉴定和分子系统发育鉴定可以确认沙门氏菌的生化群、血清分型与分子分型。 相似文献
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饲料中沙门氏菌的分离鉴定与Dot-ELISA检测 总被引：1，自引：1，他引：0
[目的]建立检测饲料中沙门氏菌的Dot-ELISA法。[方法]采用Dot-ELISA法,对随机采集自西宁市某饲料厂的100份成品饲料、85份鱼粉和50份精蛋白进行了沙门氏菌检测。通过生化试验和血清学试验对饲料样品中的细菌进行了进一步的鉴定。[结果]通过Dot-ELISA检测,成品饲料、鱼粉和精蛋白中的沙门氏菌阳性率分别为38.00%、62.35%和60.00%。Dot-ELISA法与常规分离鉴定技术的符合率为82.23%。[结论]Dot-ELISA法具有较好的特异性和敏感性,与常规分离技术具有较高的符合率,可以用于饲料中沙门氏菌的检测。 相似文献
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噬菌体技术对沙门氏菌及志贺氏和腹泻大肠杆菌的检验具有初筛作,其特点快速简便和准确。在生产实际检验工作中具有很强的应用价值,尤其是用于志贺氏大肠杆菌和沙门氏菌引起的食物中毒事件具有针对性的检验作用。对患者的及时对症治疗,早期确诊康复都具有很大帮助。总之,利用噬菌体技术用来检验沙门氏菌及志贺氏和腹泻大肠杆菌,结果可信,在实际检验工作中具有推广应用的潜力。 相似文献
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为研究Mehlich 3法(简称M3法)、ASI法与常规法测定土壤有效磷、有效钾的相关性,寻求快速、准确的测定方法,减少测土配方施肥中养分工作量,选取当地主要耕地土壤紫色土和水稻土各70份样品,采用M3法、ASI法与常规法测定土壤有效磷含量、有效钾含量,用测定数据建立回归方程,求相关系数,检验其相关性.结果显示:M3、ASI法与常规法相比,测定的紫色土有效磷、有效钾具有相关性;测定的水稻土有效磷具有相关性,而有效钾无相关性.说明在测定紫色土有效磷、有效钾时,M3法、ASI法可代替常规法,但测定水稻土等其他土壤还须进一步研究. 相似文献
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在建立直接ＥＬＩＳＡ方法基础上，首次研制出检测沙门氏菌的单抗快速检测试剂盒。对现场分离菌株进行的双盲考核试验共做２８０个菌株，两种方法的总符合率为９４．６％。以２０％的脱脂乳为冻干保护剂，经冻干后，其效价和物理性状最佳，试剂盒批内和批间重复试验的变异系数小于１０％，试剂盒的稳定性较好。采用本试剂盒检测了３０５９份人的粪样，检测出１６６份阳性样品，比市站多检出７２份阳性样品。在对６１９份肉样、６８８份鱼粉、６００份奶样、６２０份蛋样检测中，比常规国标方法多检出１００株沙门氏菌。因此，以直接ＥＬＩＳＡ为基础构建的快速检测试剂盒在沙门氏菌检验中，具有重要实用价值。 相似文献
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PCR法检测水中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]建立一种快速准确检测水中金黄色葡萄球菌肠毒素A的方法。[方法]将金黄色葡萄球菌模拟污染的水增菌后提取菌体DNA,以沙门氏菌、大肠杆菌DNA和空白作对照,用PCR法扩增金黄色葡萄球菌肠毒素A基因。[结果]金黄色葡萄球菌DNA的检测结果呈阳性,检测底限达100 cfu/L,而大肠杆菌和沙门氏菌及空白对照均未出现特异性片段,整个检测过程只需要24 h。[结论]试验建立的PCR方法可检测水及类似食品中的金黄色葡萄球菌SEA基因,并具有特异性强、灵敏度高、速度快和易操作的特点。 相似文献
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为建立食品及动物性饲料沙门氏菌的PCR快速检验方法,设计出一对特异性引物,分别对鸡白痢沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌以及多种非沙门氏菌的肠道病原菌进行了PCR扩增。结果,沙门氏菌出现300 bp的条带,其他非沙门氏菌无条带,证明该对引物特异性良好。利用人为污染沙门氏菌的方法,对鱼罐头、蛋制品、鱼粉、肉骨粉进行不同程度地沙门氏菌人为污染,对样品进行适当处理后进行PCR检测。结果,鱼罐头、鱼粉、蛋制品、肉骨粉均能达到理想检测效果,敏感性为10～100 CFU/50 L。利用该方法对商品鱼罐头、蛋制品、鱼粉、肉骨粉进行检测,具有检测速度快、特异性强、敏感性高等优点。 相似文献
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基于SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR建立生乳及乳制品沙门氏菌快速检测技术 总被引：1，自引：0，他引：1
生乳易受沙门氏菌污染,并大量繁殖;经加工的乳制品细菌数大大减少,但仍存在沙门氏菌污染的风险。试验按生乳及乳制品沙门氏菌污染水平研究样品前处理方法,采用煮沸裂解法快速提取总DNA,针对沙门氏菌invA基因建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR快速检测技术。建立的方法具有良好的特异性和较高的灵敏度,其中生乳沙门氏菌检出限为102cfu.mL-1,方法的检测线性范围为102～108cfu.mL-1,相关系数(R2)为0.999,扩增效率为103%;乳制品沙门氏菌经16 h增菌后检出限达到1 cfu.[25 g(mL)]-1。该技术可用于生乳中沙门氏菌的高效筛查及定量检测,检测一个样品仅需3 h;同时,可用于乳制品的准确定性检测,检测周期为1 d;且方法重复性好、准确度高、操作简单,为乳制品企业快速检测沙门氏菌提供了有效的技术手段。 相似文献