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1.
王不留行主要成分对小鼠乳腺上皮细胞增殖及β-酪蛋白表达的影响 总被引：6，自引：0，他引：6
【目的】以王不留行为试验材料,寻找王不留行促进泌乳的有效成分,为中药催乳针剂的研发提供理论依据。【方法】对王不留行3类主要成分（皂甙类、黄酮甙类及香豆素类）进行提取,并用化学方法及薄层层析方法予以鉴定。将3种成分分别以不同浓度添加到细胞培养液,采用MTT法检测3类成分对体外培养的小鼠乳腺上皮细胞增殖的作用,运用荧光定量RT-PCR方法对细胞中β-酪蛋白的表达进行检测,用激光共聚焦显微技术对细胞周期蛋白cyclin D1和细胞信号通路中磷酸化stat5因子的表达进行检测,最后通过动物实验进一步验证其有效成分的作用。【结果】王不留行皂甙类成分对小鼠乳腺上皮细胞的增殖有明显的抑制作用（P＜0.05）,对小鼠乳腺上皮细胞β-酪蛋白的表达无明显作用;王不留行香豆素类成分对小鼠乳腺上皮细胞的增殖和β-酪蛋白的表达均无明显作用;王不留行黄酮甙类成分具有促进泌乳的作用,可通过诱导周期蛋白cyclin D1的表达而促进小鼠乳腺上皮细胞的增殖,并通过激活Jak-stat5信号通路诱导β-酪蛋白基因的表达。【结论】黄酮甙类成分是王不留行促进泌乳的有效成分之一。 相似文献
2.
为了从内分泌系统角度探讨通草对泌乳动物乳腺泌乳的调节机制,采用高剂量12 g(生药)/mL和低剂量4 g(生药)/mL通草提取物灌服小鼠,检测其对泌乳期小鼠泌乳量的影响,应用ELISA法检测小鼠血清和乳腺组织匀浆液催乳素(PRL)、雌二醇(E_2)、孕酮(P)和生长激素(GH)的水平,并利用Western blot技术检测乳腺组织β-酪蛋白(β-casein)、催乳素受体(PRLR)、雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)、孕酮受体(PR)、生长激素受体(GHR)蛋白的表达量。结果表明,与对照组(等量生理盐水)相比,高剂量和低剂量通草提取物均显著提高了泌乳期小鼠的泌乳量(P0.05),并明显促进小鼠乳腺β-酪蛋白的表达(P0.05)。通草提取物能显著提高泌乳期小鼠血清及乳腺组织PRL、E_2、GH的水平(P0.05)。与对照组相比,高剂量组和低剂量组小鼠血清PRL、E_2、GH的水平分别显著提高112.50%、129.15%、223.48%及49.84%、68.18%、100.76%。高剂量组和低剂量组小鼠乳腺PRL、E_2、GH的水平分别显著提高60.68%、269.35%、105.19%和32.27%、129.03%、53.68%。高剂量和低剂量通草提取物能明显提高乳腺组织PRLR、ERα、ERβ、GHR的表达量(P0.05),但对血清P及乳腺组织P、PR无显著性影响(P0.05)。可见,通草能通过提高小鼠泌乳相关内分泌激素水平及上调乳腺组织PRLR、ERα、ERβ和GHR的表达,进而促进小鼠乳腺泌乳。 相似文献
3.
为探讨漏芦对泌乳动物乳腺酪蛋白合成的调节机制,利用细胞活力分析仪检测漏芦乙醇提取物(25、50、100、200、400、600、800μg/mL)对奶山羊乳腺上皮细胞活力和增殖能力的影响,并选择不抑制细胞生长增殖的乙醇提取物剂量,研究其对奶山羊乳腺上皮细胞酪蛋白合成相关基因mRNA表达的影响;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测乳腺上皮细胞αs1-酪蛋白(CSN1S1)、αs2-酪蛋白(CSN1S2)、β-酪蛋白(CSN2)、κ-酪蛋白(CSN3)、信号转导与转录激活因子5(STAT5)、蛋白质酪氨酸激酶2(JAK2)、哺乳动物雷帕霉素蛋白(mTOR)、真核细胞翻译启动因子4E结合蛋白1(4EBP1)及核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)基因的mRNA表达水平。结果表明,较高剂量(200～800μg/mL)的漏芦乙醇提取物明显抑制了奶山羊乳腺上皮细胞的活力和增殖能力(P0.05),故后续试验添加25、50、100μg/mL的漏芦乙醇提取物处理乳腺上皮细胞;漏芦乙醇提取物可明显上调细胞酪蛋白基因CSN1S1、CSN1S2、CSN2、CSN3及酪蛋白合成相关基因STAT5、JAK2、mTOR、S6K1的mRNA表达水平(P0.05),但显著下调了4EBP1基因的mRNA表达水平(P0.05)。由此可见,漏芦乙醇提取物能通过调节奶山羊乳腺上皮细胞酪蛋白合成相关基因的表达,进而促进乳腺细胞酪蛋白的合成。 相似文献
4.
miR-200b对奶牛乳腺上皮细胞泌乳功能的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
为探索miR-200b对奶牛乳腺上皮细胞泌乳能力的影响,以奶牛乳腺上皮细胞为体外研究模型,利用miR-200b mimics转染进行miR-200b过表达;应用生物信息学软件分析预测miR-200b靶基因,qRT-PCR检测miR-200b过表达后预测靶基因及乳成分合成相关信号通路关键基因mRNA表达的变化;通过CASY细胞活力分析仪及5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(Ed U)标记法分别检测miR-200b过表达对细胞活力及增殖的影响;应用CSN2(β-酪蛋白)试剂盒、TG试剂盒及乳糖试剂盒检测细胞胞外分泌β-酪蛋白、甘油三酯及乳糖含量的变化。生物信息学分析显示,miR-200b与乳腺泌乳功能基因Pten、Dnmt3a、Dnmt3b的3'UTR区序列具有互补结合的位点;qRT-PCR分析结果显示,与对照组相比,过表达miR-200b后的奶牛乳腺上皮细胞中Pten mRNA的表达量显著降低,而乳成分合成相关信号通路关键基因Akt、Srebp1、Csn2、Glut1 mRNA的表达量显著上调;miR-200b过表达能够提高奶牛乳腺上皮细胞活力,促进奶牛乳腺上皮细胞增殖及β-酪蛋白、甘油三酯和乳糖的合成分泌。综上,miR-200b能够负调控靶基因Pten的表达进而在奶牛乳腺泌乳过程中发挥重要的正调控作用。 相似文献
5.
《东北农业大学学报》2020,(1):57-64
为探讨通草对奶牛乳腺上皮细胞乳糖合成及相关基因表达的影响,采用不同剂量通草提取物处理奶牛乳腺上皮细胞,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测乳腺上皮细胞增殖能力,乳糖/半乳糖检测试剂盒(Lactose/D-Galactose (Rapid) Assay Kit)检测乳腺上皮细胞培养液中乳糖含量,实时荧光定量PCR技术检测乳腺上皮细胞乳糖合成相关基因葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、葡萄糖转运蛋白8(GLUT8)、葡萄糖转运蛋白12(GLUT12)、己糖激酶Ⅰ(HKⅠ)、己糖激酶Ⅱ(HKⅡ)、β-1,4-半乳糖基转移酶-1(β-4GALT1)和α-乳清白蛋白(α-LA)基因mRNA表达水平。结果表明,200、400、600μg(生药)·mL-1通草提取物提高奶牛乳腺上皮细胞增殖能力(P<0.05),促进奶牛乳腺上皮细胞合成分泌乳糖(P<0.05),并显著上调细胞GLUT1、GLUT8、HKⅡ、β-4GALT1及α-LA mRNA表达水平(P<0.05),但对GLUT4、GLUT12和HKⅠmRNA表达水平无显著影响(P>0.05)。研究表明,适当浓度通草提取物可提高奶牛乳腺上皮细胞增殖能力,并通过上调乳腺上皮细胞GLUT1、GLUT8、HKⅡ、β-4GALT1和α-LA的mRNA表达,促进乳腺上皮细胞合成乳糖。 相似文献
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奶山羊乳腺中瘦素及其受体的表达与作用 总被引：3，自引：1，他引：2
【目的】探讨瘦素在奶山羊乳腺发育、泌乳和退化各时期的表达与作用。【方法】采用激光共聚焦技术及Western Blot方法,检测瘦素及其受体（OB-Rb）的表达情况;采用乳腺组织体外培养联合免疫组化及毛细管电泳技术,测定瘦素对乳腺结构及泌乳功能的影响。【结果】乳腺整个发育过程中瘦素与瘦素受体的表达呈显著正相关,青春期最高,妊娠期下降,泌乳期维持在低水平,退化期显著升高,在退化21 d恢复到青春晚期水平。妊娠期瘦素处理组乳腺导管分支增多,泌乳期瘦素处理组乳腺组织培养基中β-酪蛋白（β-CN）含量增加;退化期瘦素处理组乳腺组织导管和腺泡结构发生部分解体,乳腺组织中可以检测到较多的凋亡细胞。【结论】瘦素能够促进妊娠期乳腺上皮细胞的增殖和分化,增加泌乳期乳腺β-酪蛋白基因表达,启动退化期乳腺细胞凋亡和乳腺组织重建。 相似文献
7.
β-酪蛋白基因在不同乳腺上皮细胞中表达的初步分析 总被引：2，自引：0，他引：2
应用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术对山羊乳腺上皮细胞（GMEC）中β-酪蛋白mRNA进行检测以评价GMEC乳蛋白合成的功能.同时,比较商品化小鼠乳腺癌细胞C127、人乳腺癌细胞系T47D中β-酪蛋白基因的转录表达.结果表明,原代培养山羊乳腺上皮细胞GMEC-1能够检测到β-酪蛋白基因的表达,在激素诱导下,GMEC-3细胞中能检测到β-酪蛋白基因mRNA,但C127和T47D细胞系中均无法检测到. 相似文献
8.
研究小鼠乳腺发育、泌乳和退化的超微组织形态学以及蛋白质分泌功能变化,为产奶动物泌乳生物学与乳腺功能调控奠定实验基础;将小鼠青春期、妊娠期、泌乳期和退化期乳腺,一部分制成超薄切片复染法染色后在透射电镜下进行超微结构观察,另一部分制成冰冻切片应用免疫组织化学染色方法进行β-酪蛋白分泌跟踪。结果为透射电镜观察见青春期(性成熟前期和退化期)或静止阶段乳腺上皮细胞胞质内含细胞器相对较少,泌乳期上皮细胞变成高柱状或立方形,胞质内内质网丰富,近腺腔处见大量分泌颗粒,泌乳期乳腺肌上皮细胞内可见少量分泌小泡;β-酪蛋白跟踪染色发现,β-酪蛋白在妊娠初期就有表迭,到泌乳期达到相对稳定水平;小鼠青春期、妊娠期、泌乳期和退化期乳腺结构呈现有规律的周期性变化。 相似文献
9.
FLCN基因参与多种代谢途径和细胞过程,国内外关于FLCN在奶牛乳腺发育过程中表达及调节的研究鲜有报道。应用RNA干扰技术和质粒转染技术改变FLCN基因在奶牛乳腺上皮细胞中表达量,流式细胞仪检测细胞增殖,采用qRT-PCR和Western blot检测FLCN对泌乳相关功能基因AMPK、mTOR、CyclinD1、Caspase3和β-酪蛋白表达的影响。结果表明,FLCN正向调节mTOR磷酸化水平,促进乳蛋白合成和细胞增殖,抑制细胞凋亡,负调控能量代谢调节子AMPK。FLCN在奶牛乳腺上皮细胞中可通过mTOR信号通路调控细胞增殖及乳蛋白合成,研究对揭示FLCN调控奶牛乳腺上皮细胞增殖和泌乳具有重要作用。 相似文献
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为了提高转基因动物乳腺特异性表达水平,构建了两种不同启动子的乳腺特异性表达载体,以比较其乳腺特异性表达效果.应用山羊β-酪蛋白或牛αs1-酪蛋白调控序列、鸡β-球蛋白隔离元件、巨细胞病毒(CMV) 基因表达涮控元件构建了,乳腺特异性表达复合启动/增强子(Pcmv) ,以单一的酪蛋白启动子作为对照,与人乳铁蛋白cDNA组成乳腺特异性表达载体,并制备了转基因小鼠.经ELISA检测,复合启动/增强子构件指导人乳铁蛋白cDNA在原代转基因小鼠乳腺中重组人乳铁蛋白(rhLF) 表达水平(2.0～8.1 g·L-1) 明显高于单一酪蛋白启动子构件(0～12 mg·L-1) ,而在所有转基因小鼠的血清和唾液中未检测到rhLF.结果提示:酪蛋白-Pemv复合启动/增强子不仅可提高转基因小鼠乳腺特异性表达水平,而且具有良好的乳腺表达特异性. 相似文献
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采用MTT比色法、Western blotting和实时荧光定量PCR,检测不同质量浓度金银花水提取物对体外培养的山羊乳腺上皮细胞增殖活性和泌乳能力的影响。结果表明,培养液中金银花水提取物为1 000 mg/L时,对体外培养的山羊乳腺上皮细胞有明显促增殖作用（P<0.01）;培养液中金银花水提取物为1 000、500 mg/L时,β 酪蛋白的表达量极显著高于对照组。可见：1 000 mg/L金银花水提取物能促进山羊乳腺上皮细胞增殖并提高泌乳能力。 相似文献
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《东北农业大学学报》2020,(6)
为探究在奶牛乳腺发育分化中细胞-ECM相互作用及相关整联蛋白β1信号机制,构建包被不同蛋白成分(BSA、LN、Matrigel)作为细胞培养底物的transwell培养模型,奶牛乳腺上皮细胞在分化培养液诱导下,检测整联蛋白β1及其下游信号分子ILK与Rac1表达变化。通过添加AIIB2抗体调控整联蛋白β1活性,分析下游信号分子ILK与Rac1表达变化。结果表明,LN可上调整联蛋白β1-ILK-Rac1途径提高β-酪蛋白合成分泌,AIIB2阻断可下调整联蛋白β1下游信号分子ILK表达,抑制β-酪蛋白合成分泌。研究发现,在分化培养液诱导下,LN可上调奶牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白合成分泌,这种上调作用依赖整联蛋白β1-ILK通路活性。 相似文献
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向奶牛乳腺上皮细胞中添加β-羟基丁酸钠,利用双向电泳技术进行细胞亚细胞蛋白质组学方面的研究。结果表明,β-羟基丁酸钠对奶牛乳腺上皮细胞亚细胞蛋白表达有显著影响。Imagemaster6.0软件分析出4个表达上调的蛋白点,鉴定分别是ENO1、α-glucosidase、plastin3和ARPC2。通过实时荧光PCR检测以上蛋白在mRNA水平的表达差异,结果均有不同程度的提高,其中以ENO1、α-glucosidase及Arpc2提高显著(P<0.05)。研究所筛选出的蛋白,将有助于进一步揭示奶牛乳腺上皮细胞增殖和泌乳机制。 相似文献
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本试验通过给予试验期昆明小鼠玉米淀粉和豆油比例不同的日粮,研究日粮能量类型对乳腺三种泌乳相关酶(脂肪酸合成酶,FAS;α-乙酰辅酶A羧化酶,α-ACC;半乳糖转移酶,GT)mRNA相对表达的影响.结果表明,日粮处理对各采样期小鼠乳腺半乳糖转移酶mRNA的相对表达均无显著影响(P>0.0 5);日粮处理对泌乳期试验小鼠1、10、20泌乳日乳腺脂肪酸合成酶相对表达影响显著(P<0.05),且以高脂肪日粮组试验小鼠乳腺脂肪酸合成酶mRNA相对表达水平最高;日粮处理显著影响分娩前一天及4泌乳日试验小鼠乳腺α-乙酰辅酶A羧化酶mRNA的相对表达(P<0.05),以高脂肪日粮处理组水平较高. 相似文献
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动物乳腺特异表达载体的构建及其表达特性研究 总被引：6，自引：0，他引：6
为了研制动物乳腺生物反应器,用中国奶山羊β-乳球蛋白基因的5′、3′-侧翼区和β-酪蛋白基因的第1内含子构建动物乳腺特异表达载体p205C3.细胞表达试验结果显示,p205C3载体能够指导lacZ基因在SV40 T基因转化的山羊乳腺上皮细胞中表达,不能指导该基因在COS-1细胞和山羊成纤维细胞中表达.将人激肽释放酶(hKLK1) cDNA克隆入p205C3载体,用获得的重组载体p205C3KLK1注射哺乳期小鼠,然后取其心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、胰腺和乳汁,酶活性测定结果显示,乳汁中的酶活性高达255.65 U·mL-1,其他组织中的酶活性与正常小鼠无差异.结果表明p205C3载体不仅能有效地指导外源基因在山羊乳腺细胞和小鼠乳腺中表达,而且表达具有较好的组织特异性,可以用于动物乳腺生物反应器的研制. 相似文献
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【目的】探讨TGF-β1对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡和HSP70蛋白表达的影响。【方法】TGF-β1作用乳腺上皮细胞不同时间,收集细胞及培养液,应用MTT检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡率、比色法检测LDH活性、琼脂糖凝胶电泳检测DNA完整性、Western bolt 技术分析HSP70蛋白的表达量。【结果】1、5、10 ng•ml-1的TGF-β1均能抑制乳腺上皮细胞的增殖,且随浓度增加抑制作用加大,呈现剂量依赖性,其中10 ng•ml-1 TGF-β1组与对照组差异显著（P＜0.05）;10 ng•ml-1 TGF-β1作用于乳腺上皮细胞, 随着作用时间的延长,细胞凋亡率逐渐升高,其中6、12和24 h与对照组相比差异极显著（P＜0.01）;LDH活力随作用时间延长而升高,12、24 h与对照组差异极显著（P＜0.01）;DNA完整性随 TGF-β1作用时间的延长发生不同程度降解;TGF-β1作用2～6 h细胞大量表达HSP70,6 h达到高峰,而后下降,2～12 h的表达量均极显著高于对照组（P＜0.01）。【结论】TGF-β1可以抑制奶牛乳腺上皮细胞的增殖,具有浓度依赖性。10 ng•ml-1 TGF-β1可以显著增加细胞凋亡率,提高细胞培养液中LDH活力,使细胞DNA发生不同程度的降解,同时HSP70蛋白随TGF-β1作用时间发生显著的表达变化。本试验结果表明,TGF-β1可以以促进上皮细胞凋亡的方式,促进奶牛乳腺发生退化。 相似文献
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为阐明DNA甲基化对奶牛乳腺泌乳功能调控的机制,研究了甲基化抑制剂5氮杂2′脱氧胞苷（5 Aza dC）对奶牛乳腺上皮细胞中PPARγ基因启动子甲基化状态及其表达的影响,以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,采用0.1、0.5、1.0、5.0μmol／L的5 Aza dC对奶牛乳腺上皮细胞进行处理,用EpiQuikTM DNA methyltransferase assay试剂盒进行甲基转移酶活性检测,采用CASY细胞分析仪检测细胞活力和增殖能力,利用亚硫酸氢盐测序（BSP ）技术检测了PPARγ启动子的甲基化特征,qRT PCR法检测PPARγmRNA表达的变化,Western blot检测PPARγ蛋白表达的变化。结果显示：与空白对照组相比,0.1μmol／L的5 Aza dC对奶牛乳腺细胞生长无毒性,处理96 h甲基转移酶活性极显著降低,奶牛乳腺细胞的PPARγ基因启动子甲基化程度降低,PPARγ表达升高。表明5 Aza dC可降低奶牛乳腺细胞中PPARγ启动子区域的甲基化程度,促进PPARγ表达。 相似文献
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奶牛乳腺上皮细胞体外培养体系的建立 总被引：4，自引：0，他引：4
通过乳汁中提取细胞进行传代培养获得增殖且可分泌特异性酪蛋白的奶牛乳腺上皮细胞,细胞形态以鹅卵石型和多角型为主,逐渐趋于多角型.当多角型细胞增殖融合到一定阶段,会出现乳头状和圆顶型结构.并进一步对泌乳中后期乳汁分离的细胞做细胞生物学性状检测:细胞接种存活率达到81;;细胞生长曲线呈典型的"S"形,符合细胞生长的一般生物学规律;细胞群体倍增时间最短达48.7 h;经过对乳腺上皮细胞特异性分泌蛋白-酪蛋白的检测,证明培养获得的细胞为乳腺上皮细胞,且具有正常分泌乳蛋白功能.试验初步建立了奶牛乳腺上皮细胞的体外培养体系. 相似文献