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1.
根据NCBI上已公布的中华鲟D-loop基因、细胞色素b基因、12S rRNA基因的核酸序列设计出4对引物,经SYBR Green实时荧光PCR反应、熔解曲线分析和扩增片段克隆测序后,发现针对D-loop基因的F2 - R1引物能够高效、特异地实现对靶序列扩增,选择其作为中华鲟基因特异性扩增引物,建立中华鲟基因SYBR Green实时荧光PCR检测方法.所建立的中华鲟D -loop基因SYBR Green实时荧光PCR检测方法特异性好、可操作性强,具有较好的应用价值. 相似文献
2.
针对H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的HA、NA基因保守序列设计2对引物,建立了SYBR Green Ⅰ双重荧光RT-PCR(RRT-PCR)方法,实现了同一反应管内同时检测AIV的H5和N1亚型基因.熔解曲线分析显示,H5和N1扩增片段的熔解温度分别为(795±03)℃和(833±03)℃,无引物二聚体形成,扩增产物片段大小分别为150bp和474bp,与预期大小相符,测序结果证实为H5和N1亚型基因的靶序列.该方法能从H5N1样本中检出阳性扩增信号,熔解曲线可见H5和N1双特异峰;而H5N2样本有阳性扩增,熔解曲线仅见H5单特异峰.AIV的其他HA亚型和其他病毒的RNA、DNA 无扩增信号.本法最低可检测210拷贝·μL-1和195拷贝·μL-1 H5和N1重组质粒,敏感度分别是RT-PCR的100、1 000倍.本研究建立的基于荧光熔解曲线模式RT-PCR可用于H5N1亚型AIV的检测. 相似文献
3.
猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量PCR检测方法的建立 总被引：1，自引：1，他引：0
[目的]建立一种定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的荧光定量PCR方法.[方法]用RT-PCR方法扩增PRRSV的N基因片段,构建含有N基因片段的重组质粒,以不同浓度的PRRSV-N基因重组质粒作为模板来进行检测PRRSV的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR扩增.[结果]PRRSV SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR的扩增效率为98.2％,标准曲线的决定系数为0.9995,可准确检测的最低核酸模板浓度为60 copies/μL,重复性试验的变异系数小于3％,对3种常见的猪源RNA病毒的检测结果全为阴性.临床检测显示,PRRS病猪的血清中PRRSV载量极显著(P＜0.01)高于PRRSV亚临床感染猪.[结论]建立了一种可用于PRRSV定量检测与PRRS早期快速诊断的特异性强、灵敏度高、重复性好的PRRSV SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法. 相似文献
4.
为了建立SYBR Green Ⅰ荧光染料实时定量PCR方法，测定 TaAGL7 N基因在小麦不同器官的表达水平。采用 RT PCR扩增小麦 TaAGL7 N基因片段，建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR标准曲线，以18S rRNA为内参，检测小麦不同器官中的 TaAGL7 N表达水平。结果表明，标准曲线循环阈值与模板浓度有良好的线性关系，熔解曲线分别在82.8～83.6 ℃和83.1～85.6 ℃各仅有一个单峰。成功建立SYBR Green Ⅰ荧光染料实时定量PCR法，该方法具有特异度和敏感度高、 稳定性好的特点，可用于定量测定小麦中TaAGL7 N的表达水平。 相似文献
5.
山羊痘病毒SYBR Green Ⅰ荧光PCR检测方法的建立 总被引：3，自引：0，他引：3
为建立山羊痘病毒(goat pox virus,GPV)的SYBR Green Ⅰ荧光PCR万法,根据GPV的反向末端重复序列(Inverted Terminal Repeat,ITR)的核苷酸序列设计引物.以此引物和山羊痘皮肤痘疹提取的DNA为模板,建立燕优化SYBR Green Ⅰ模式荧光PCR检测GPV的TTR基因的方法,并与普通PCR万法进行敏感性比较.结果表明,此次建立的检测GPV的SYBR Green Ⅰ荧光PCR方法能检测出7×102拷贝数的DNA模板,此法比文献报道的普通PCR法更敏感、准确、快速. 相似文献
6.
用RT-PCR方法扩增猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M基因片段,并克隆到PUC-T载体中,构建含有PEDV M基因片段的重组质粒。以系列稀释后的重组质粒为模板,基于SYBR GreenⅠ进行PEDV检测的实时荧光定量PCR扩增。结果显示,扩增效率为100.4%,相邻扩增曲线之间间距均匀,所有产物的熔解曲线具有单一整齐的峰,标准曲线具有优良的线性关系,最低可准确检测520拷贝/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于3%。用所建立方法对3种常见猪源RNA病毒的检测结果均为阴性,对临床样品的检出率显著(P0.05)高于常规PCR方法。研究结果表明,建立了一种灵敏度高、特异性强、重复性好的检测PEDV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,可用于PEDV的定量检测和猪流行性腹泻的早期快速诊断。 相似文献
7.
伪狂犬病病毒(PRV)野毒有gE基因,而其疫苗毒株无gE基因,这为检测有无PRV野毒感染提供参考。用PCR方法扩增PRV的gE基因片段,构建含有PRV gE基因片段的重组质粒。以系列稀释后的重组质粒作为模板,应用SYBR GreenⅠ来进行检测PRV gE基因的实时荧光定量PCR扩增。结果显示:在(6.9×107~6.9×101)copies/μL范围内,相邻扩增曲线之间间距均匀,所有产物具有单一整齐的熔解曲线峰,标准曲线具有优良的线性关系。该方法最低可准确检测69copies/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于2%,对PRV-gE基因缺失疫苗毒株和常见猪源DNA病毒的检测结果均为阴性,对临床样品的检出率高于常规PCR方法。研究结果表明,建立了1种特异性强、灵敏度高、重复性好的检测PRV gE基因的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,可用于PRV野毒感染的定量检测。 相似文献
8.
根据GenBank中猪细小病毒VP2基因序列设计特异性的引物,PCR扩增获得猪细小病毒VP2基因片段,并克隆到pMD-18T载体上作为阳性标准品.通过对SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR反应条件的优化,建立了猪细小病毒的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR诊断方法,以此为基础研制出试剂盒.试剂盒扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,对PRV、PCV-2、E.coli、CSFV、PRRSV均无阳性信号扩增,可重复性好,测灵敏度可达1.0×101拷贝/μL.结果表明,研制的猪细小病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR试剂盒具有特异、灵敏、快速、重复性好等优点,适合于猪细小病毒临床样品的检测. 相似文献
9.
[目的]建立1种猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的荧光定量PCR检测方法.[方法]用RT-PCR方法扩增TGEV的N基因片段,构建含有N基因片段的重组质粒,基于SYBR Green方法以不同浓度的TGEV-N基因重组质粒作为模板进行检测TGEV的荧光定量PCR扩增.[结果]TGEV SYBR Green荧光定量PCR的扩增效率为101％,标准曲线的决定系数为0.9997,可准确检测的最低核酸模板浓度为490 copies/μL,重复性试验的变异系数小于3％,对其他3种常见的猪源RNA病毒的检测结果全为阴性,对临床样品的检出率高于常规PCR方法.[结论]建立了1种TGEV SYBR Green荧光定量PCR检测方法,可用于TGE的早期快速诊断. 相似文献
10.
用PCR方法扩增伪狂犬病病毒(PRV)的gB基因片段,构建含有gB基因片段的重组质粒,以不同浓度的PRV-gB基因重组质粒为模板应用SYBR Green I方法来建立检测PRV-gB基因载量的荧光定量PCR方法。结果显示:在(8.6×107~8.6×101)copies/μL范围内,回归方程为y=-3.5604x+41.165,其决定系数为0.9993,显示出优良的线性关系;扩增产物的熔解曲线仅有一个特异性单峰。该方法对猪圆环病毒、猪细小病毒、猪细环病毒等常见猪源DNA病毒进行检测时均没有扩增曲线,重复性试验的变异系数小于2%,表明建立了特异性强、重复性好、灵敏性高的PRV-gB基因SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。用该方法检测8种商品伪狂犬病弱毒活疫苗的每头份剂量的病毒载量,结果显示不同商品伪狂犬病弱毒活疫苗之间的病毒载量存在明显差异,与其标识剂量基本一致,表明该荧光定量PCR检测方法可用于疫苗剂量检测。 相似文献
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黄丽娜 《农业图书情报学刊》2007,19(5):76-79
从学校公共关系角度,揭示了高校图书馆服务礼仪对图书馆形象和高校形象所具有的形象外显和形象隐喻价值,论述了“规范的服务礼仪”的基本要求,探讨了在服务礼仪的教化和培训中内化和外化相结合的方式。 相似文献
12.
分析了水冷高炉风口的传热过程，对多元金属共渗高炉风口的导热热流密度进行了计算。计算结果表明，这种风口的导热能力仅提高３％。因此，这种风口只能在很有限的程序上提高其抗热流冲击的能力。 相似文献
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生姜真空冷冻干燥过程影响因素的试验研究 总被引：26，自引：0，他引：26
采用电阻法测量了生姜的共晶点和共熔点温度，其值分别为-13℃和-12℃。在实验室冻干机上进行了正交试验，结果表明：真空冷冻干燥过程中加热方式、加热温度、干燥室压力以及物料厚度等因素对冷冻干燥速率均有影响，影响程度依次为：物料厚度＞加热板温度＞干燥室压力。 相似文献
15.
本文从理论上分析了铜铅合金重熔过程中其微观组织熔化机理及实际非平衡熔化过程中熔化过热度△T(1)的形成原理,并通过试验得到了间接验证. 相似文献
16.
为改善碱木质素的熔融性能,实现熔融纺丝法制备碱木质素基纤维,以制浆造纸黑液粉末中提取的碱木质素为原料,与不同质量比的聚乙二醇-400(PEG-400)混合加热,再倒入水中搅拌不同时间后过滤干燥,测定改性处理后碱木质素的热稳定性、黏度及熔融纺丝性能等特征。结果表明:1)在相同搅拌时间时,不同质量比的PEG-400改性处理对灰分含量影响不大,木质素含量随质量比的增加而变少或不变;在相同质量比时,搅拌时间越长,灰分含量越少,木质素含量越多。2)经PEG-400改性处理的碱木质素的热分解温度增加,热稳定性能提高;但随着质量比或搅拌时间的增加,其热分解温度均减少,热稳定性能降低。3)质量比为1:1和1:2时PEG-400改性处理的碱木质素均表现出较差的熔融性能,而质量比为1:3时PEG-400改性处理的碱木质素呈现较好的熔融性能,尤其是搅拌时间为2h的碱木质素则表现出较稳定的熔融性能,并且能够在228℃温度下熔融纺丝制备得到直径约为(30±4.8)μm的碱木质素基纤维。 相似文献
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[目的]研究枯草杆菌重组水蛭素的冷冻干燥优化工艺及在酸碱中的热稳定性。[方法]测定不同填充剂、保护剂浓度组合下的共熔点，根据共熔点最高的原则确定其组合浓度，据此再设计水蛭素的冷冻干燥工艺。[结果]优化的冷冻干燥工艺为：填充剂浓度4％，保护剂浓度1．2％，共熔点为-30℃，装样量为3．0ml，冷冻温度-40℃，冷冻时间2h，升华干燥温度-32℃，升华时间24h，再干燥温度25℃，时间5h，活力回收为96．2％，含水量为1．48％。100℃时，酸性条件下，水蛭素非常稳定；加热结合碱性的条件下水蛭素才相当不稳定。[结论]可为进一步工业化冷冻干燥水蛭素研究提供借鉴。 相似文献
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对3个中晚熟品种进行不同浓度PP333处理,每品种设每株叶面喷施PP3338000mg/L、10000mg/L、12000mg/L和喷清水对照4个处理,单株为一小区,重复3次,随机区组设计,处理1分2次喷,第一次在5月9日,第二次在6月9日,其余在5月9日喷1次。研究表明,PP333能极显著地抑制枝梢生长。从控制枝梢生长、产量提高、果实形状及圆整度、花芽形成等综合性状分析,4年生大团蜜露以每株喷PP33312000mg/L、5年生湖景蜜露和6年生西浦1号以每株PP3338000mg/L喷2次的处理效果最好。 相似文献
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青海海北化工厂铬渣堆积场土壤铬污染状况研究 总被引：12，自引：1，他引：12
通过野外观测与室内分析相结合的方法,研究了青海海北化工厂铬矿堆渣场土壤铬污染状况。结果表明:渣场附近土壤受到严重的铬污染,其铬含量大幅度超出全国土壤铬含量和青海土壤铬环境背景值。随距离堆渣场距离的增大,土壤铬含量急剧降低。土壤铬含量与距离堆渣场的距离之间的关系均可用线性函数或幂函数来表示,幂函数优于线性函数。铬在土壤剖面中的分布呈现出上低下高的分布趋势,其分布特征与铬的独特的土壤化学特性和土壤水分运动有关。堆渣场附近土壤中铬具有很大的可迁移性,铬进入土壤后主要和土壤碳酸盐、有机质和氧化物相结合,有很大一部分存在于土壤溶液中,显著地改变了原有土壤中铬的形态分布。在对堆渣场土壤污染进行治理时必须综合考虑气候、土壤、地形因素及铬的土壤环境行为。 相似文献
20.
通过对去髓和留髓玉米Zea mays秸秆的化学成分、工业分析、元素分析、低位发热量、热动力学以及灰熔点几个方面的特性做对比,发现留髓玉米秸秆木质素较高,占整秆的27.72%,纤维素较低,占整秆的25.65%。相较于留髓玉米秸秆,去髓玉米杆的纤维素（25.47%）和木质素（21.90%）均低于留髓玉米秸秆;留髓的玉米秸秆的固定碳（13.61%）和低位发热量（16 536 Jg－1）都高于留髓玉米秸秆;同时留髓玉米秸秆的活化能和频率因子也要高于去髓玉米秸秆,但留髓玉米秸秆灰的变形温度（1 173 ℃）和软化温度（1 258 ℃）比去髓玉米秸秆低100 ℃以上。研究表明:玉米整秆相较于去髓玉米秸秆更易燃烧且更适合制作燃料,但需要对燃烧锅炉进行改造,期望能够对玉米秸秆制作燃料作为人造板工厂新能源提供一定理论基础。图4表7参13 相似文献