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1 玻璃化冷冻的基本原理 所谓的玻璃化冷冻就是在完全的玻璃化状态下冷冻保存细胞、组织或器官.为了在一定冷冻速度下形成玻璃化,需要使用高浓度的可渗透性低温保护剂. 玻璃化冷冻法是根据物理学原理,将高浓度的低温保护剂(约7 mol/L)在超低温环境下凝固,形成无规则的玻璃化固体,这种固态物质能保持液态时的正常分子与离子分布,因而在细胞内发生玻璃化起到保护作用.这种方法不仅大大简化了冷冻过程,而且减少了由于细胞冰晶形成所引起的一系列物理及化学损伤.此外,这种方法采用迅速通过临界温度区,从而减轻了一些动物胚胎冷冻中常见的冻伤现象. 相似文献
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水牛的精液采取冷冻颗粒长期保存,是一种先进技术,它能够充分发挥优良种畜的性能优势,使其不受寿命、地点的限制,一头优良公牛一年可供5000头母牛配种用精,比本交提高上百倍。1水牛冷冻颗粒精液理论根据精子是具有生命活力的性细胞,结构比较复杂,精子在-0.6℃以下至-30℃时,细胞间隙的水分结成冰晶,使细胞脱水,原生质变干,造成精子死亡。另外,大的冰结晶对精子造成机械损伤,使原生质的表层破坏失去保护作用,冰晶渗入精子内部,破坏精子的结构,使精子不能复苏。但是,水的结晶只能在一定温度范围内才能形成,如果低于该温度范围就形成玻璃化体,… 相似文献
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哺乳动物卵母细胞和胚胎的超低温冷冻保存技术,是胚胎移植、体外受精、转基因和克隆等生物技术不可缺少的部[1].Rall和Fahy于1985年首次报道了用玻璃化方法来冷冻保存小鼠胚胎,这种方法不仅大大简化了冷冻过程,而且减少了由于细胞冰晶形成所引起的一系列物理及化学损伤,提高了冷冻效率[2]. 相似文献
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<正> 目前在生物活体的冷冻上存在两种理论体系和方法—快速冷冻和慢速冷冻。胚胎的冷冻多采用慢速冷冻方法。其机理主要是使胚胎周围的保护液逐步浓缩,而达到细胞内逐步脱水,防止冰晶形成的目的。这种方法得到了一定的成功。但是,我们认为目前在常规的胚胎冷冻—解冻处理技术上尚存在以下问题值得研究解决: 相似文献
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牛精液冷冻与人工授精技术相结合，在牛品种改良、保护优良种质资源中发挥着重要作用。尽管冷冻后部分牛精子活力高达60%以上，但是冷冻后精子受损现象却普遍存在，尤其是受精能力与鲜精相比显著降低。作者详细介绍了冷冻-解冻过程对牛精子造成的主要损伤，包括精子的形态完整性、活力及遗传物质的改变等；阐述了冷冻造成精子损伤的主要原因，即细胞内冰晶形成和氧化应激反应及其产生的可能机制；并且对目前常用的提高冷冻精子质量的方法，如添加冷冻保护剂、优化冷冻程序以及添加抗氧化剂等进行了详细地综述；提出了在冷冻精液研究方面值得探索的问题，以期为家畜精液冷冻保存技术的进一步优化提供理论依据。 相似文献
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为了进一步降低冷冻过程中冰晶形成对云南半细毛羊精子的机械损伤,实验首次检验了肌醇类冰晶抑制剂(SIB)对绵羊精子的冷冻保护效果。采用的SIB是1,4-环己二醇(1,4-CHD)。电刺激采集精液后,经4℃平衡、液氮气相预冻后直接投入液氮保存。结果表明:1,4-CHD不能提高云南半细毛羊冷冻精子的活力,而且随着1,4-CHD浓度的增加,精子活力呈逐步下降趋势。此外,1,4-CHD也不能改善解冻后云南半细毛羊精子的顶体状态和质膜完整性。解冻后,当用等渗缓冲液稀释精子时,1,4-CHD冷冻组精子的质膜破损率明显高于不含1,4-CHD的对照组(P<0.05)。然而,SIB的存在可能有利于冷冻精子磷脂酰丝氨酸(PS)正常分布的维持。解冻后,1,4-CHD冷冻组精子的PS标记率明显低于对照组(P<0.01)。当分别采用渗透压为404 mOsm,528 mOsm,648mOsm或853mOsm的缓冲液去稀释解冻后的精子时,就移动速度和质膜完整性指标而言,4个处理组之间差异不显著(P>0.05)。总之,肌醇类SIB并不能改善云南半细毛羊冷冻精子的活力、移动速度、顶体以及质膜完整性等指标。然而1,4-CHD可能抑制冷冻解冻过程引起的细胞早期凋亡。 相似文献
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哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存的研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
玻璃化(vitrification)是指利用物理学原理将高浓度的抗冻保护剂急速降温后，由液态转化为外形类似玻璃状的稳定而透明的非晶体化固体状态的过程。玻璃化的固体保留了液体正常的分子和离子分布，可以视为一种无序黏稠的超冷液体，因而避免了细胞内形成冰晶而对细胞产生伤害。1985年，Rall等率先将玻璃化冷冻方法用于小鼠胚胎的冷冻保存，推动了该方法在哺乳动物胚胎冷冻保存的方面的应用。之后，玻璃化冷冻保存不断改进， 相似文献
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抗冻基因CBF_2表达载体构建及转化紫花苜蓿的研究 总被引：4，自引：3，他引：1
本研究以拟南芥基因组DNA为模板,用PCR方法扩增目的基因,连接到PGEM-T Easy Vector载体上构建成克隆载体T-CBF2。用BamHⅠ和SacⅠ分别对克隆载体T-CBF2和植物表达载体PBI121进行双酶切,获得目的片段和线性质粒。在T4DNA连接酶的作用下进行定向连接,构建成植物表达载体P-T-CBF2。采用直接转化法将重组子导入根癌农杆菌EHA105。经PCR鉴定,重组质粒已成功导入根癌农杆菌中。通过农杆菌介导法转化和田苜蓿,现在已经得到转基因的苜蓿愈伤组织。 相似文献
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暖地型草坪绿叶生长剂对细叶结缕草抗冻蛋白活性的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
对照的盆栽细叶结缕草Zoysia tenuifolia经低温(白天1 ℃,晚上-2℃)胁迫3 d后,或露地草坪在最低温度-3℃的冬季里均枯黄,也不诱导抗冻蛋白;与对照相比,预先用暖地型草坪绿叶生长剂处理的草坪则继续保持绿色,增加了CAT活性和可溶性蛋白质含量,增加了10多条蛋白带的活性(经SDS-PAGE电泳分析),而且增加了Rm 0.51和Rm 0.71两条蛋白带,诱导抗冻蛋白产生. 相似文献
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Atsushi IDETA Yoshito AOYAGI Kanami TSUCHIYA Yuuki NAKAMURA Kou HAYAMA Atsushi SHIRASAWA Kenichiro SAKAGUCHI Naomi TOMINAGA Yoshiyuki NISHIMIYA Sakae TSUDA 《The Journal of reproduction and development》2015,61(1):1-6
Embryos obtained via superovulation are necessary for mammalian artificial reproduction, and viability is a key determinant of success. Nonfreezing storage at 4 C is possible, but currently used storage solutions can maintain embryo viability for only 24–48 h. Here we found that 10 mg/ml antifreeze protein (AFP) dissolved in culture medium 199 with 20% (v/v) fetal bovine serum and 25 mM HEPES could keep bovine embryos alive for 10 days at 4 C. We used a recombinant AFP isolated from the notched-fin eelpout (Zoarces elongatus Kner). Photomicroscopy indicated that the AFP–embryo interaction was enhanced at 37 C. Embryos pre-warmed with the AFP solution at 37 C for 60 min maintained high viability, whereas those that were not pre-warmed could live no longer than 7 days. Thus, short-term storage of bovine embryos was achieved by a combination of AFP-containing medium and controlled pre-warming. 相似文献
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D A Marshall R L Doty 《Journal of the American Veterinary Medical Association》1990,197(12):1599-1602
Although it is widely believed that ethylene glycol-based antifreeze (AF) is an attractive tastant to dogs and other animals, empirical data on this point are not available. In experiment 1, we examined the propensity of 178 adult mixed-breed dogs to approach, sniff, and lick a concentration of AF commonly used in automotive cooling systems (50%). Despite the fact that most of the dogs approached and sniffed the AF in these 5-minute tests, only 9% initiated lick responses and most of these were brief and not followed by additional licking. In experiment 2, the lick responses of five gastric-cannulated dogs to aqueous solutions of 20% sucrose, 50% ethylene glycol, 50% propylene glycol, water, and 50% AF were examined in 14-minute tests before and after periods of food and water deprivation. Under the latter conditions, 2 of the 5 dogs drank amounts of ethylene glycol that would have been lethal to uncannulated dogs. None of the five dogs drank potentially lethal amounts of AF. The preference order for these tastants was sucrose greater than water greater than ethylene glycol greater than AF = propylene glycol. Although these findings question the general belief that AF is highly palatable to most dogs, they do imply that large individual differences in responsiveness exist and that AF ingestion is likely influenced by motivational state. Furthermore, they suggest the possibility that unpleasant-tasting additives could be successfully developed to eliminate the ingestion of AF, because the initial attractiveness of AF is relatively low. Such additives would have to be stable in vehicular cooling systems and not adversely affect the functional aspects of AF performance. 相似文献