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采用分级盐析和Sephadex G-50的方法分离纯化无种皮南瓜籽胰蛋白酶抑制剂,用BAPNA法进行抑制活性的测定,用SDS-PAGE法测定蛋白质的分子量,用不同的温度处理方法对它的热稳定性进行研究,并对抑制剂的Lys和Cys进行了化学修饰。结果表明在饱和度为60%的硫酸铵作用下,能够沉淀出活性较强的胰蛋白酶抑制剂,其分子量为29 512 Da,并且具有一定热稳定性,在80℃恒温处理1 h仍保持一定的抑制活性。证明了无种皮南瓜籽胰蛋白酶抑制剂是一种分子量较小的,以Lys为活性中心的具有一定热稳定性的蛋白质。 相似文献
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采用阴离子交换层析和凝胶过滤层析方法,从海南红肉菠萝蜜种子中分离纯化得到胰蛋白酶抑制剂,命名为AHTI.结果表明:该蛋白有抑制胰蛋白酶水解小肽底物的活性作用,由相对分子质量分别约为28.8 kD和16.4 kD的亚基组成的多聚体.AHTI具有稳定的胰蛋白酶抑制活性,对胰蛋白酶的抑制活性与其浓度成正比,AHTI对温度、pH的耐受性较强,2种因素对其胰蛋白酶抑制活性影响较小. 相似文献
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应用3‘-RACE方法对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)和奥利亚罗非鱼(Oreochromis aureus)胰蛋白酶Ⅱ cDNA进行了克隆并进行序列测定和分析.结果表明,胰蛋白酶Ⅱ序列中均具有催化活性必需的高度保守的催化三联体氨基酸残基(His、Asp、Ser)和构成二硫键的10个半胱氨酸残基,以及决定底物特异性的保守性氨基酸残基--天冬氨酸残基和S1结合袋.奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼胰蛋白酶Ⅱ mRNA序列以及氨基酸序列同源性分别为96.4%和97.5%. 相似文献
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[目的]研究紫花芸豆（Phaseolus vulgaris）胰蛋白酶抑制剂（PVTI）的部分性质。[方法]探索了不同温度、不同还原剂和变性剂处理对PVTI抑制活性和蛋白构象的影响。[结果]PVTI是一种对热稳定蛋白;部分二硫键对活性中心有重要贡献;经尿素处理,PVTI的荧光光谱没有明显变化,但残留了较少的抑制活性,推测亚基的解离影响了抑制活性而每个亚基的内部结构未受到影响;经盐酸胍处理,Trp残基完全暴露于极性环境中,整个蛋白质分子处于一种松散伸展的状态,PVTI活性全部丧失。[结论]该研究可为PVTI的功能研究及其进一步应用奠定基础。 相似文献
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采用去离子水抽提、热变性、硫酸铵盐析及亲和层析和分子筛层析等方法,从传统药用植物大决明种子中得到1种胰蛋白酶抑制剂.SDS-PAGE和MALDI-TOF检测为单一多肽链,其精确分子量为19812.55 Da.氨基酸组成分析表明,该抑制剂中异亮氨酸、缬氨酸和苯丙氨酸含量最高.肽指纹图谱中有8个主要的信号簇.模拟胃液实验和荧光光谱结果表明,二硫键和赖氨酸残基对于维持该抑制剂的天然活性构象必不可少.当该抑制剂被还原或赖氨酸残基被修饰后,其抑制活性及对胃蛋白酶的抗性会有较大程度的丧失.通过串联质谱(MS/MS)测定该抑制剂的部分氨基酸序列,并与多种豆科Kunitz蛋白酶抑制剂进行比对,发现有较高的同源性.同时,该抑制剂能够抑制菜青虫中肠类胰蛋白酶的活力,其抑制效果与大豆Bowman-Birk蛋白酶抑制剂的抑制效果相当. 相似文献
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研究了高压脉冲电场对大豆胰蛋白酶抑制剂的钝化效果。结果表明:随着脉冲强度和脉冲处理时间的延长,大豆胰蛋白酶抑制剂活性下降,但效果不太显著。当脉冲电场和加热联合使用时,可以明显地钝化大豆胰蛋白酶抑制剂的活性,尤其是先脉冲处理后加热钝化效果更为显著。 相似文献
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罗非鱼胰蛋白酶Ⅱ cDNA克隆与序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
应用3′-RACE方法对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)和奥利亚罗非鱼(Oreochromis aureus)胰蛋白酶Ⅱ cDNA进行了克隆并进行序列测定和分析。结果表明，胰蛋白酶Ⅱ序列中均具有催化活性必需的高度保守的催化三联体氨基酸残基(His、Asp、Ser)和构成二硫键的10个半胱氨酸残基，以及决定底物特异性的保守性氨基酸残基——天冬氨酸残基和S1结合袋。奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼胰蛋白酶ⅡmRNA序列以及氨基酸序列同源性分别为96．4％和97．5％。 相似文献
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[目的]对大豆中胰蛋白酶抑制剂进行钝化处理,降低其活性,提高大豆饲料的营养价值。[方法]采用正交试验设计对大豆中胰蛋白酶抑制剂的化学钝化法（亚硫酸钠法）和物理钝化法（微波法和超声波法）进行比较,确定最优钝化工艺条件。[结果]大豆中胰蛋白酶抑制剂的化学法钝化最优工艺条件为：Na2SO3浓度为0.03 mol/L,温度75℃,钝化时间60 min;物理微波法钝化最优工艺条件为：微波功率240 W,时间90 s,粉碎度为过60目筛;物理超声波钝化法最优工艺条件为：加水量30 ml,时间30 min,粉碎度为过60目筛。[结论]3种钝化方法处理后,大豆中胰蛋白酶抑制剂活性均明显降低。 相似文献
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激肽释放酶制取纯化工艺的改进试验 总被引：3，自引：0，他引：3
为探寻控制胰酶活化的最佳条件,提高激肽释放酶精品的比活力。进行了激肽释放酶制取纯化工艺,改进试验,首先绞碎胰腺,经提取,活化后用丙酮沉淀,脱水,干燥得胰酶粗品,粗品经溶解,提取,上柱层析,透析脱盐,冻干即得激肽释放酶精品。与传统工艺相比,新工艺粗品收率提高了３％,精品比活力提高了１０倍,且达到了临床应用的标准。 相似文献
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以植物叶蛋白浓缩物为材料,用胰蛋白酶在不同条件下对其进行水解。结果表明,胰蛋白酶作用于植物叶蛋白,其最佳水解温度为４０℃;最佳水解ｐＨ值为９;水解程度随酶量和反应时间增加而增加;各种不同种类的植物叶蛋白在相同条件下被胰蛋白酶水解的程度基本一致,证明了植物叶蛋白易被动物体内蛋白酶分解。 相似文献
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研究了磁化水和磁化缓冲液对体外胰蛋白酶、胃蛋白酶活性以及人工瘤胃产气量的影响.结果表明,磁化水可提高胰蛋白酶和胃蛋白酶的酶促反应速度10%～20%,提高人工瘤胃的产气速度,使产气高峰提前.将水配制成缓冲液后再进行磁化,除提高酶促反应速度外,还可使两种酶有效降解底物的时间从20 min延长到了30 min.本研究表明磁化水和磁化缓冲液可能具有一定的生物学作用. 相似文献
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磁化水和磁化缓冲液对胰蛋白酶、胃蛋白酶活性及人工瘤胃产气量的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
研究了磁化水和磁化缓冲液对体外胰蛋白酶、胃蛋白酶活性以及人工瘤胃产气量的影响。结果表明，磁化水可提高胰蛋白酶和胃蛋白酶的酶促反应速度10％～20％，提高人工瘤胃的产气速度，使产气高峰提前。将水配制成缓冲液后再进行磁化，除提高酶促反应速度外，还可使两种酶有效降解底物的时间从20min延长到了30min。本研究表明磁化水和磁化缓冲液可能具有一定的生物学作用。 相似文献
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Limited enzymatic hydrolysis of skim milk by trypsin was investigated in this paper,and it was found that the degree of hydrolysis (DH) of milk proteins had a relationship of DH^-1=a bt^-1 with the time(t) of hydrolysis at low enzyme concentrations some properties of the protein such as NSI in PI or TCA were changed obviously,It was suggested that mosk milk proteins would be degraded into peptides by trypsin. 相似文献
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研究固定化酶载体-氧化型纤维素条件优化,并用此载体固定胰蛋白酶.结果表明,当氧化剂高碘酸钠浓度为0.5 mol·L-1,氧化环境pH 2,氧化时间为3.5 h,反应温度为35℃时,氧化纤维素醛基质量分数可到达74.06％.以此为载体固定胰蛋白酶,可得到固定化胰蛋白酶最适温度为60℃,最适pH 9.0,固定化酶比自由酶热稳定性提高.在最适条件下,固定酶可重复使用5次以上,之后活性才有所下降,将固定化酶置于4℃冷藏保存,5 d后活性保持在90％,固定化酶表现出较高使用和贮藏稳定性,为胰蛋白酶广泛应用奠定基础. 相似文献
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研究了以牛奶酪蛋白为原料制备CPPs的工艺过程及条件。以氮、磷含量为指标,通过正交试验,确定了在胰蛋白酶作用下制备CPPs的最佳条件为：最适温度40 ℃,水解时间80 min,底物浓度15%,底物与酶之比为100∶1。 相似文献
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牛乳酪蛋白水解物的特性分析 总被引：4，自引：0，他引：4
牛乳酪蛋白经胰蛋白酶水解，对水解物进行氨基氮含量、水解度（DH）和游离氨基酸含量等测定，并通过SDS－PAGE电泳及Sephadex-G50凝胶层析，分析了相对分子质量的分布。结果表明，在水解条件为底物质量浓度50g/ml、pH7．4、温度45℃、酶量（m)：底物量（m）＝1：1000时，DH随时间延长而增大，水解前期DH增长迅速，3h后增长缓慢，6．0h的DH为20．48％。水解物中必需氨基酸含量约占游离氨基酸总量的73％－80％，此含量随水解时间的延长略有降低；水解物相对分子质量随DH的升高有所减小，经2－3h水解的产物，相对分子质量分布主要集中于2500－3400范围。 相似文献
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Hebei Province is one of the main distribution areas growing wild soybean( Glycine soja ) in China. In this study, 461 seed samples,collected from 18 natural populations in this province, were used to electrophoretically observe the change in forms and their frequencies of the Kunitz trypsin inhibitor protein (KTI)in individual populations and geographical areas. Allelic frequencies accounted for 85% for Tia and 15% for Tib in the total samples. Twelve populations examined were polymorphic at the KTI locus, accounting for over 50% in the populations investigated. Four populations, 22% of all the populations, were found to have natural cross-pollination with varied heterozygote rates of 3% -5.5%, and the average was 1% in the total sampies. Geographically, the mean Tib frequency in the north areas was higher than in the south, and higher in the mountainous area than in the plain areas. The populations in a lake ecological environment (Baiyangdian Lake) were almost monomorphic. No obvious relationship between the frequency and the geographical distance was observed. In addition, we first found a mutation for the absence of the KTI in wild soybean. 相似文献