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《畜牧兽医学报》2016,(10)
旨在建立一种简单易行、获得细胞纯度较高的体外分离、培养大鼠肺微血管内皮细胞的方法。取5~7日龄SD大鼠分离外周肺组织,组织植块法获得原代大鼠肺微血管内皮细胞,37℃、5%CO_2培养箱中传代培养,采用免疫磁珠法对其进行分离纯化,并对分离纯化后的细胞进行免疫荧光及流式细胞鉴定,通过MTT比色分析法准确、安全、可靠地检测纯化后传代肺微血管内皮细胞的增殖情况。结果显示:倒置显微镜下观察单个细胞呈短梭形或多角形,汇合后呈铺路石样,单层贴壁生长,细胞分离纯化后经免疫荧光检测CD31呈阳性,流式细胞仪检测淋巴管内皮细胞表面特有标记VEGFR-3呈阴性(P=0.1,且P0.5),且复苏后经MTT测得传代细胞的增殖情况良好。成功建立了一种分离高纯度大鼠肺微血管内皮细胞的体外培养方法。 相似文献
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本实验通过建立简单高效的大鼠主动脉平滑肌细胞体外原代培养和鉴定方法,为下一步培养其他动物主动脉平滑肌细胞奠定基础。取成年SD雄性大鼠胸主动脉组织,显微镜下分离出主动脉中膜层,采用组织块联合酶消化法进行大鼠胸主动脉平滑肌细胞体外原代培养。再通过观察细胞形态学特征,免疫组织化学染色观察细胞中α-SMA和CD105两种蛋白表达情况对细胞进行鉴定。实验结果表明,组织块联合酶消化培养5 d细胞开始增殖,10~12 d细胞长满。显微镜下观察细胞呈纺锤形、三角形或椭圆形;免疫组化结果显示平滑肌细胞中α-SMA表达为阳性,CD105表达为阴性,表明分离出大鼠胸主动脉平滑肌细胞中不含有内皮细胞和成纤维细胞。 相似文献
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《湖南畜牧兽医》2015,(3)
为了建立成熟的猪脐静脉血管内皮细胞(SUVECs)分离培养和鉴定体系,采用1%的I型胶原酶灌注法分离细胞,计数板计数,以10%1640培养基于37℃、5%CO2条件下培养;待融合80%左右胰蛋白酶消化1:2传代,利用倒置显微镜观察细胞生长状态及形态;采用血管性血友病因子(VWF)和血小板-内皮细胞粘附分子(PECAM-1/CD31)进行免疫荧光细胞鉴定;利用ICELLigence细胞功能分析仪测定细胞活力和生长曲线。研究从30头新生仔猪脐带(8~15cm)中分离到超过107个细胞,VWF和CD31双重检测阳性,分离得到的SUVECs超过90%,细胞生长状态良好,呈小三角形、椭圆形、梭形、多边形单层生长,界限清晰,融合后呈铺路石状,增殖能力强,符合血管内皮细胞的基本特征,可培养超过15代,为进一步研究猪胎盘血管发生及其对母猪生产性能影响提供可靠细胞模型。 相似文献
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牛胎儿成纤维细胞的分离培养 总被引：1，自引：0，他引：1
研究了牛胎儿组织成纤维细胞的分离、培养、纯化方法和生长特征,并对培养细胞的冷冻保存和复苏进行了观察.采取组织块培养法进行原代培养,在接种第5天到第6天成纤维细胞生长旺盛;用0.25%胰蛋白酶消化,传代培养细胞生长状态良好;用液氮冷冻法保存传代细胞,解冻后持续传代至第12代仍生长良好,第8代细胞冻存前和复苏后的活率分别为97.0% 和94.3%,无显著差异(P>0.05);分离纯化的胎牛成纤维细胞的生长曲线都正常;成功地建立了牛胎儿成纤维细胞系.该细胞可经多次传代培养和冷冻保存. 相似文献
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为建立一种操作简单并且能获得大量猪血管内皮细胞的分离培养方法,本研究采集新生健康长白猪脐带,取其脐静脉血管,灌注0.1%的Ⅰ型胶原酶,于37℃水浴消化10 min后收集内皮细胞,培养于含20%胎牛血清的M199培养基中,长满单层后用胰酶消化传代培养。并对培养的细胞形态学、相关抗原和其他特征以及对病毒的易感性进行鉴定。结果表明,Ⅰ型胶原酶消化后可获得大量内皮细胞,细胞培养后的形态学观察显示细胞贴壁生长良好,呈典型的铺路石状排列;第Ⅷ因子相关抗原和细胞摄取乙酰化低密度脂蛋白均呈阳性,内皮细胞比率可高达100%。传3代后的生长曲线显示细胞传代后延迟期小于1 d,对数生长期约3 d,第5 d进入平台期,第7 d开始脱落死亡。病毒感染试验表明所获得的内皮细胞对猪瘟病毒高度易感,病毒生长与常用的PK-15没有区别。上述研究结果表明本研究建立的血管内皮细胞分离培养方法简便有效,为大量制备原代血管内皮细胞提供了可靠的方法。 相似文献
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猪血管内皮细胞体外培养方法的建立 总被引：2，自引：1，他引：1
实验研究了猪血管内皮细胞体外培养方法并对培养的细胞进行了鉴定。获得了传代培养的猪血管内皮细胞。结果表明：用Ⅰ型胶原酶和胰酶消化分离，均可获得接种量的原代培养物，但Ⅰ型胶原酶消化效果更好；原代或早期传代培养物中有时混入的成纤维细胞可用柠檬酸胰酶有效清除。在不用贴附基质和内皮细胞生长因子(ECGF)的条件下，向生长液中加入胰岛素可成功的培养内皮细胞。该细胞在体外培养时贴壁生长，单层细胞呈“铺路石”状排列，细胞间存在接触抑制；第Ⅷ因子相关抗原免疫荧光染色阳性，证明培养的细胞为血管内皮细胞。 相似文献
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大鼠表皮干细胞的分离培养 总被引：2，自引：0，他引：2
为探索一种简单而又高效的分离大鼠表皮干细胞(ESCs)的方法,采用酶消化法和组织块法对大鼠表皮干细胞进行分离、培养;并用Ⅳ型胶原快速黏附法筛选大鼠表皮干细胞,免疫组织化学方法检测CK15、P63、β1-integrin和α6-integrin表达情况;同时,测定ESCs单细胞克隆与克隆形成率及表皮干细胞生长曲线.结果表明,采用组织块法和酶消化法均能分离得到大鼠表皮干细胞,获得的细胞生长良好,具有较高的克隆形成率,前者可传至第6代,而后者传至3代～4代便分化;干细胞标记物CK15、P63、β2-integrin和α6-integrin均呈阳性;酶消化法和组织块法均能成功地分离、纯化和培养大鼠表皮干细胞,组织块法相对较好. 相似文献
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选用17d鸡胚,采用组织块培养法,在无菌条件下分离培养肺微血管内皮细胞(PMVECs),60 h移除组织块,结合细胞形态和免疫细胞化学对培养细胞进行鉴定.结果表明,培养24 h组织块周围即有细胞爬出,48 h后细胞大量增殖.形状以梭形或多边形居多,细胞扁平排列紧密,大小均匀,融合为单层后呈现出典型的鹅卵石外观.异植物血凝素(FITC-BSI)结合试验、CD31单抗和Ⅷ因子相关抗原免疫染色均呈阳性反应,证明分离培养细胞为PM-VECs.本试验提出的组织块培养法操作简单,对仪器设备要求不高,能较快且稳定地在体外培养出PMVECs,该方法的建立有助于家禽心血管疾病,如肺动脉高压、腹水和肺血管结构重构等相关疾病的深入研究. 相似文献
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目的:通过耳缘组织细胞的分离培养和保存,在细胞水平上保存兰州黑白花奶牛的种质资源。方法:采用植块法培养兰州黑白花奶牛的耳缘组织原代细胞,经传代扩大培养后在液氮中冷冻保存,并对保存的耳缘组织细胞系进行了复苏活力、形态、生长特性、微生物和内、外源病毒因子检查。结果:兰州黑白花奶牛耳缘组织植块培养时第4天可见细胞从植块边缘生长,第6天消化传代后生长变快,形态以上皮型为主。冷冻保存的兰州黑白花奶牛耳缘细胞系复苏活力达95%,生长良好,生长曲线呈近"S"型,最大增殖浓度3.36×10~5/ml,对数生长期倍增时间为24 h,无菌、支原体和内、外源病毒因子检查为阴性。结论:成功建立了兰州黑白花奶牛耳缘组织细胞系,使这一物种的种质资源在细胞水平上得以长期保存。 相似文献
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试验旨在研究云南半细毛羊毛囊干细胞（hair follicle stem cells,HFSCs）的分离、培养及鉴定方法,为下一步的诱导分化研究奠定基础。方法：采用组织块法原代培养云南半细毛羊HFSCs。并对分离得到的细胞进行免疫组化鉴定。培养结果：HFSCs为贴壁生长细胞,体积小,核质比高,呈典型的铺路石状,在显微镜下折光性强、胞体透亮。免疫组化分析结果表明：细胞表达K14、不表达CD271。证明所培养的细胞为HFSCs。结论：试验采用组织块培养法初步建立了云南半细毛羊无血清培养HFSCs,这对于探讨云南半细毛羊毛囊生长发育调控机制以及成体干细胞增殖分化特性具有非常重要的意义。 相似文献
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早胜牛胚胎和耳缘成纤维细胞分离培养与鉴定 总被引：1，自引：1，他引：0
为了建立早胜牛胚胎和耳缘成纤维细胞体外分离培养体系,采用植块法和酶消化法制备这两种组织成纤维细胞。结果显示,用植块法制备了耳缘成纤维细胞,组织块直径较小的成活率较高且生长速度较快;用酶消化法制备了胚胎和耳缘两种组织成纤维细胞,复苏后细胞的存活率:胚胎(96.8%)＞耳(94.7%)。2种组织成纤维细胞生长曲线均呈"S"型,胚胎组织(倍增时间29.7 h)生长速度快于耳组织(倍增时间31.2 h)。用免疫组织化学染色鉴定证实,分离培养的成纤维细胞中间丝被染成棕黄色,波形蛋白呈阳性反应。 相似文献
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本文旨在探究黄酮类化合物槲皮素对金黄色葡萄球菌α-溶血素所引起的大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVECs)凋亡的影响。采用贴块法培养原代细胞后用磁极纯化法选获取纯化的RPMVECs,并通过CD31免疫荧光进行鉴定。通过WST-1检测α-溶血素对RPMVECs的细胞毒性,筛选作用浓度。将槲皮素与α-溶血素共同作用RPMVECs 24 h后,通过流式细胞术检测细胞凋亡率。结果表明采用磁极纯化法可得到CD31阳性率高的RPMVECs。2μg/mLα-溶血素对RPMVECs具有毒性,并可诱导RPMVECs凋亡。槲皮素可以抑制金黄色葡萄球菌α-溶血素所诱导的RPMVECs凋亡,对细胞具有一定保护作用。 相似文献
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为建立稳定的猪血管内皮细胞系,用于猪瘟病毒(CSFV)的致病机理研究提供理想的细胞模型,本研究利用逆转录病毒分别转导人端粒酶催化亚基(hTERT)基因或SV40大T抗原(SV40 LT)基因进入猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),通过G418或嘌呤霉素筛选阳性克隆,并进行细胞传代研究和细胞形态学及表型鉴定。分别获得了两种方法建立的永生化猪血管内皮细胞系SUVEC-hT和SUVEC-ST。两种细胞系均呈铺路石样单层排列生长,具有高度的增殖活性,在传代70代后不表现任何衰老细胞的特征,并保持接触生长抑制。SUVEC-hT细胞系持续表达hTERT、CD31、CD34和von Willebrand factor,并能摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-Ac-LDL)。SUVEC-ST细胞系持续表达SV40 LT、CD31和CD34,并能摄取Dil-Ac-LDL。两个细胞系均保持正常的核型并对CSFV敏感。结果表明通过表达外源的hTERT或SV40 LT,SUVEC已被永生化,并且保留了血管内皮细胞的主要生物学特征。 相似文献
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【目的】建立一种简便有效的猪肺微血管内皮细胞原代培养方法。【方法】选取新生SPF长白仔猪,剪取肺边缘组织,在血清中剪碎至1mm3大小,最后将组织块在六孔板中贴壁培养。对培养出的原代细胞进行形态学观察及免疫学鉴定。【结果】组织块贴壁12h后血细胞大量游出,24h后内皮细胞开始从组织块边缘迁出,48h后内皮细胞呈多角形或梭形聚集在组织块边缘,60h后弃掉组织块。细胞汇合状态时呈典型的铺路石形态,免疫学鉴定CD31特异性抗原阳性。【结论】组织块贴壁法成功培养出原代猪肺微血管内皮细胞。 相似文献
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《中国兽医学报》2020,(5)
探讨奶牛脂肪来源的间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,AD-MSCs)体外分离培养方法及其生物学特性。采集不同部位奶牛脂肪,选用0.25%胰蛋白酶消化,并进行贴壁培养,获取原代奶牛AD-MSCs,通过传代培养进一步纯化扩增。显微镜观察细胞形态及生长特征,并采用MTT法绘制2种AD-MSCs生长曲线,利用免疫荧光化学染色法检测其表面标志物,对该细胞进行了向成骨及成脂诱导分化培养试验,采用油红O和钙盐染色法对其分化能力进行鉴定。比较研究了不同部位脂肪的形态,2种不同部位的AD-MSCs均呈长梭形、纺锤形或多角形贴壁生长,且2个部位来源的AD-MSCs的生长曲线无明显差异(P0.05)。分离培养的AD-MSCs的表面标志物CD44和CD73呈阳性表达,而CD34和CD45呈阴性表达。在诱导分化培养试验中呈现出较强的成脂和成骨分化能力。本试验选取不同部位的脂肪组织,成功的分离并鉴定了奶牛AD-MSCs,为纯化鉴定奶牛AD-MSCs提供了依据。 相似文献
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组织贴块法培养肉鸡肺动脉平滑肌细胞 总被引：3，自引：0，他引：3
建立组织贴块法培养原代和传代肉鸡肺动脉平滑肌细胞(PASMC).将1～10日龄雏鸡的肺动脉中膜切成小于1 mm2的组织块,用翻转干贴壁法进行贴块培养.采用形态学和抗α肌动蛋白抗体(α-actin)免疫组化染色法对所培养的细胞进行鉴定.倒置显微镜观察培养的细胞呈梭形,重叠生长,呈典型的"峰-谷"状.抗α-actin单克隆抗体免疫组化染色可见胞浆内有明显的细丝,呈现棕黄色,表明所培养的细胞为肺动脉平滑肌细胞.组织贴块法简便易行,可用于血管病理生理变化研究. 相似文献
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大鼠脑皮质微血管内皮细胞的分离培养及鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究目的在于建立一种简易可行、获得细胞纯度较高的体外分离、培养大鼠脑皮质微血管内皮细胞的方法,为进一步研究其功能打好基础。新生SD大鼠,分离大脑皮质,经匀浆、两步过滤法获得大鼠脑微血管段,用胶原酶消化后,在37℃、5%CO2培养箱中进行原代细胞培养。通过差速消化和差速贴壁方法并结合倒置显微镜下形态学的观察进行传代和纯化,利用第Ⅷ因子相关抗原免疫荧光检测法对培养的细胞进行鉴定。结果显示:成功分离培养了大鼠脑微血管内皮细胞,倒置显微镜下单个细胞呈多角形,互相融合后呈"铺路石"样,单层贴壁生长;免疫荧光检测第Ⅷ因子相关抗原呈阳性。说明本研究建立的大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养方法,程序简单,获得的细胞纯度较高。 相似文献