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1.
多重PCR同时检测猪圆环病毒2型,猪细小病毒,猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒 总被引：2，自引：0，他引：2
本试验建立一种可同时检测猪圆环病毒2型(PCV-2),猪细小病毒(PPV),猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),猪瘟病毒(CSFV)4种病毒的多重PCR方法.对于每一种特定的病毒,用4对寡核苷酸引物均能特异扩增其目的片段.以含有病毒目的片段的质粒为模板,测定了多重PCR的检测灵敏度,PRRSV和CSFV检测最低限是48 pg,而PPV和PCV-2为0.48 pg.利用建立的多重PCR方法对具有产自有繁殖障碍母猪的仔猪或具有呼吸障碍症状的76个仔猪样本进行检测.检出了4种病毒的存在,其中26个样本(34.2%)同时感染了2种以上病毒.结果表明多重PCR方法检测猪混合感染的病毒,是一种快速、灵敏、低成本、高效率的病原学诊断工具. 相似文献
2.
根据PCV-1、PCV-2a和PCV-2b差异序列,设计了3对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可以用于PCV检测及PCV-1、PCV-2a和PCV-2b分型的PCR方法。结果表明,三重PCR检测的最低敏感度可达4.87×107 copies/μL(PCV-1)、2.83×107 copies/μL(PCV-2a)和2.96×106 copies/μL(PCV-2b)。引物特异性良好,各引物之间没有交叉反应,对伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)检测均为阴性。应用该方法对采自陕西省的56份样品进行检测,PCV-1检出率57.14%(32/56),PCV-2a检出率1.78%(1/56),PCV-2b检出率42.86%(24/56),多重PCR检测结果与单PCR检测结果的符合率达99%以上,可用于猪圆环病毒的临床检测及流行病学监测等。 相似文献
3.
《黑龙江畜牧兽医》2015,(11)
为了快速准确检测猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)并对病毒拷贝数进行定量,试验根据Gen Bank中PCV-2保守序列(登录号为FJ644559.1)设计1对特异性引物和Taq Man探针,制备标准品,建立PCV-2的荧光定量检测方法,并对临床样品进行检测。结果表明:该方法在1×101~1×108拷贝/μL的模板范围内具有良好的线性关系,相关系数可达0.999;敏感性是常规PCR方法的100倍;对猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)均为阴性,没有交叉反应;批内、批间重复试验变异系数均小于2.50%;在临床检测中,比常规PCR方法检测PCV-2的阳性检出率高出38%。说明试验成功建立了PCV-2 Taq Man荧光定量PCR检测方法,可用于临床检测PCV-2感染及对其拷贝数进行定量。 相似文献
4.
为建立能同时检测猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法,针对CSFV和PRRSV的基因序列设计3对特异性引物,第1对引物扩增CSFV毒株NS2基因508bp片段,第2对引物扩增PRRSV美洲型经典毒株和变异毒株Nsp2基因338bp/248bp片段,第3对引物扩增PRRSV欧洲型毒株ORF5基因614bp片段。经过反应条件的优化,建立了能同时检测并区分CSFV毒株和PRRSV美洲型经典毒株、变异毒株及欧洲型毒株的多重RT-PCR方法。该方法可以特异扩增CSFV和PRRSV,而与猪口蹄疫病毒(FMDV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)均无交叉反应;对CSFV和PRRSV 4种重组质粒标准品的检出下限均为1.67×103拷贝/μL。对采集的106份临床疑似病料进行检测,结果CSFV和PRRSV变异株混合阳性4份,占3.77%(4/106);CSFV阳性7份,占6.60%(7/106);PRRSV变异株阳性17份,占16.04%(17/106)。结果表明,建立的多重RT-PCR检测方法可以用于CSFV和PRRSV的临床快速鉴别诊断和流行病学调查。 相似文献
5.
为了解2020年秋冬季内江市病死猪中猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒3型(PCV-3)、猪瘟病毒(CSFV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)5种病毒感染情况,在14个病死畜禽无害化处理收集点,采集108份病料样品,采用荧光PCR/RT-PCR方法进行5种病毒核酸检测。结果显示:PCV-2、PRRSV、PCV-3、CSFV的核酸检出率分别为44.4%、33.3%、12.9%、7.4%,未检出PRV核酸;双重感染检出率为18.5%,以"PCV-2+PRRSV""PCV-2+PCV-3"为主,多重感染检出率为1.9%。结果表明,内江市病死猪群中PRRSV、PCV-2感染较为严重,PCV-3零星分布,且呈现一定的混合感染状态,而CSFV和PRV感染得到有效控制。结果提示,内江市应重点加强PRRSV、PCV-2、PCV-3感染的监测与控制。 相似文献
6.
猪流感病毒与繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、圆环病毒、伪狂犬病病毒、副猪嗜血杆菌混合感染的情况调查 总被引：3，自引：1，他引：2
应用套式PCR方法对采自广西境内13个市122个不同规模猪场及农村散养户的126份病料,进行了SIV的检测,并对鉴定为SIV阳性的15份病料,再分别进行PRRSV、CSFV、PCV-2、PRV、HPS的检测,以调查广西猪群中SIV与PRRSV、CSFV、PCV-2、PRV、HPS混合感染的情况。结果发现：猪群中SIV感染率为11.9%(15/126),而在所检测的15份阳性病料中,SIV混合感染十分严重,感染率为73.3%(11/15)。混合感染病毒种类最多达四重感染（SIV+PRRSV+CSFV+PCV-2）,占6.67%(1/15);三重感染(SIV+PRRSV+PCV 2、SIV+PRRSV+CSFV) 占40%(6/15);二重感染（SIV+PRRSV,SIV+PCV-2）占26.6%(4/15)。调查结果表明广西发病猪群中SIV与PRRSV、CSFV、PCV-2混合感染普遍存在。 相似文献
7.
尼帕病毒与猪流感病毒双重荧光定量RT-PCR方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
根据尼帕病毒(NiV)M基因和猪流感病毒(SIV)M基因序列设计引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件建立了一种鉴别NiV和SIV的双重实时荧光定量RT-PCR检测方法,对该方法的定量线性范围、敏感性、重复性和特异性进行了评价及初步应用。结果显示,用该方法检测NiV M基因的RNA标准对照(NiV-M-RNA)和SIV M基因的RNA标准对照(SIV-M-RNA),定量线性范围分别为4.6×101copies/μL~4.6×108 copies/μL和5.8×101copies/μL~5.8×108 copies/μL,检出限分别为46个拷贝和58个拷贝。该方法的组内试验和组间试验的变异系数均小于1.6%,显示其良好的可重复性。该方法仅对NiV-M-RNA和SIV呈现特异性扩增曲线,不与猪瘟病毒(CSFV)、猪流行腹泻病毒(PEDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)和伪狂犬病病毒(PRV)发生交叉反应。用该方法对236份猪的鼻拭子样品进行NiV和SIV的同时检测,所有样本的NiV检测结果均为阴性,有1份样本的SIV检测结果为阳性。本研究建立的方法可为猪临床样本中NiV和SIV的鉴别检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。 相似文献
8.
猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）和猪圆环病毒Ⅱ型（PCV-2）是引发猪繁殖障碍的主要病原,建立其基因芯片快速检测体系,对开发猪繁殖障碍快速检测试剂盒具有重要意义。根据GenBank中已发表的PRRSV、CSFV和PCV-2的病毒基因组序列,设计合成特异性引物和特异性较强的60mer的寡核苷酸探针,并将探针按所设计阵列固定于表面经氨基化修饰的玻片上,制备出寡核苷酸芯片。通过引物标记及特异性验证,建立了带标记引物的多重PCR检测体系,从而产生大量可与寡核苷酸探针特异性互补的带标记的DNA片段。将标有荧光染料的扩增产物与芯片上寡核苷酸探针杂交,扫描、分析芯片上荧光信号。结果表明,芯片上各样本对应探针位点呈现阳性荧光信号,而阴性对照和空白对照则基本不能检测到荧光信号。分别用基因芯片检测方法和PCR/RT-PCR检测60份临床病料,两者符合率高达92%,表明该检测技术能够用于临床病料的检测及快速诊断PRRSV、CSFV和PCV-2。 相似文献
9.
在GenBank中收集猪细小病毒(PPV)结构蛋白VP2基因、猪圆环病毒2型(PCV2)的ORF2序列、猪伪狂犬病毒(PRV)的gB基因、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的NSP2基因、猪瘟病毒(CSFV)的E2基因和乙型脑炎病毒(JEV)的M基因,利用Primer5.0等分子生物学软件对收集的序列分析比较,筛选出上述基因的特异保守序列并设计引物和探针,将设计好的探针与相应的微球偶联,优化条件,建立检测方法。结果表明:建立的检测PPV、PCV2、PRV、PRRSV、CSFV、JEV6种病毒核酸的多重液相芯片技术具有较好的特异性、敏感性和稳定性,对PPV、PCV2、PRV、PRRSV、CSFV、JEV6种病毒核酸的最低检出量分别为8.50×10~2copies/μL、2.87×10~2copies/μL、2.07×10~2copies/μL、2.61×10~2copies/μL、2.34×10~2copies/μL、2.05×10~2copies/μL,与相应病毒PCR/RT-PCR检测方法相比,敏感性提高了100~1000倍;对临床388份样品同步进行荧光PCR与液相芯片检测,结果99.87%相符。本方法为液相芯片技术在动物多病毒快速高通量检测、鉴别诊断等应用方面奠定了基础。 相似文献
10.
SIV与PRRSV、CSFV、PCV-2和PRV交叉感染的检测 总被引：2，自引：0，他引：2
采用RT-PCR方法对37份疑似猪流感病毒(SIV)感染病料进行了病原学检测。同时,还运用PCR和RT-PCR方法对SIV阳性病料进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)和猪伪狂犬病毒(PRV)目的基因片段的扩增。结果,扩增出了SIV特异目的基因片段,且4份病料都为混合感染,感染状况分别为SIV/PRRSV/PRV,SIV/CSFV/PRRSV三重感染,SIV/PCV-2和SIV/PRRSV二重感染。 相似文献
11.
Giammarioli M Pellegrini C Casciari C De Mia GM 《Veterinary research communications》2008,32(3):255-262
12.
为建立特异、敏感的猪流感病毒(SIV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的双重RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank登录的SIV M基因保守序列和PRRSV美洲型毒株的N基因保守序列,设计合成了2对特异引物,通过对扩增条件的优化,建立检测SIV和PRRSV的双重RT-PCR方法.检测结果显示:该方法可同时扩增出SIV(345 bp)和PRRSv(520 bp)的特异性片段;而猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型及阴性鸡胚尿囊液核酸扩增结果均为阴性;对SIV和PRRSV 2种病毒混合液的最小检出量分别为102 EID50/0.1 mL和103TCID50/0.1 mL.应用双重RT-PCR和病毒分离法对12份临床疑似样品进行对比检测,结果表明:除双重RT-PCR检测到双阳性的3份混合感染病料中1份未分离到PRRSV外,其余2份均分离出病毒.证明该方法具有良好的特异性、敏感性,可以用于临床样品的早期快速检测. 相似文献
13.
多重PCR检测猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪流感病毒 总被引：8，自引：4，他引：8
应用Primer3.0和Omega2.0,根据猪伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪流感病毒(SIV)保守基因设计了3对多重PCR引物,建立PRRSV,SIV和PRV单项PCR检测方法,并在优化单项PCR反应条件(引物浓度、Mg2 浓度、退火温度等)基础上,初步建立了PRRSV-PRV-SIV多重PCR检测方法,并分别用多重PCR和单项PCR/RT-PCR检测10份临床病料,两者符合率为96.6%,表明该多重PCR检测方法有较高的敏感度,可以用于临床病料的检测。 相似文献
14.
Porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) is a disease of domestic swine characterized by exceptionally high clinical variability. This study addresses the question of whether clinical variability in PRRS results from (a) genetic variation among viral isolates and/or (b) variation in management practices among farms on which isolates are found. Genetic data (open reading frame 5 gene sequences) and data on farm characteristics and associated clinical disease signs were collected for 62 PRRS virus (PRRSV) field isolates, representing 52 farms. Clinical disease signs were interrelated — confirming that a true reproductive syndrome exists (involving abortions, infertility in sows, deaths of sows and preweaning mortality).
Pairs of farms experiencing deaths in their sow populations also tended to share viral isolates which were more similar to one another than expected by chance alone. This implies that sow death (one of the more-severe manifestations of PRRS) is under genetic influence. Large herd size was a significant risk factor for the death of sows and for respiratory disease in nursery pigs. All-in–all-out management practices in the nursery were protective against reproductive signs in the sow herd. All-in–all-out management practices in the finishing stages of production were protective against respiratory disease in nursery pigs — but were paradoxically associated with an increased risk of infertility in sows. These results suggest that farm-management practices can also influence which PRRS clinical signs are manifested during an outbreak. In general, signs associated with PRRS appear to result from a combination of genetic factors and herd-management characteristics. The relative contributions of these two influences differ depending on the specific clinical sign in question. 相似文献
15.
猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展 总被引：5，自引：2，他引：3
猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是严重危害养猪业的病原,论文概述了PRRSV的生物学特性和基因组的结构及编码的结构蛋白,综述了PRRSV新型疫苗、反向遗传技术和分子诊断的研究进展,为PRRS的预防和诊断提供科学依据。 相似文献
16.
Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) and porcine circovirus type 2 (PCV2) are pathogens, which can significantly affect the swine industry worldwide. Field surveys suggest that simultaneous PRRSV and PCV2 infection is common in pigs. The objective of this study was to measure the changes in peripheral blood leukocyte subpopulations in piglets co-infected experimentally with PRRSV and PCV2, in order to analyze the synergistic influence of co-infection on the immune system. Changes in peripheral blood leukocyte subpopulations were systematically measured by flow cytometry (FCM). The levels of antibodies to PRRSV and PCV2 were detected by indirect Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA) and the indirect fluorescent antibody test (IFA), respectively. Serum viral loads were measured using real-time PCR. The results showed that piglets co-infected with PRRSV and PCV2 exhibited slower generation and lower levels of antibodies to PRRSV and PCV2, and increased amounts and a prolonged presence of both PRRSV and PCV2 in serum, in comparison to the piglets infected with either virus alone. The major finding in our study was that the total and differential leukocyte counts, including white blood cells (WBCs), monocytes, granulocytes and lymphocytes (T, B and NK cells, as well as T-cell subpopulations), dramatically decreased early during co-infection with PRRSV and PCV2 for about two weeks, in contrast with animals singly infected with either PRRSV or PCV2. These results suggest that PRRSV and PCV2 co-infection results in a synergistic decrease in immune cells in the peripheral blood of piglets. These data contribute to the understanding of the immunosuppressive effects resulting from PRRSV and PCV2 co-infection in pigs. 相似文献
17.
V.R. Monger J.A. Stegeman G. Koop K. Dukpa T. Tenzin W.L.A. Loeffen 《Preventive veterinary medicine》2014
A cross-sectional serological study was conducted in Bhutan between October 2011 and February 2012 to determine the prevalence of antibodies to classical swine fever virus (CSFV), porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), porcine circovirus type 2 (PCV2), swine influenza virus (SIV) subtype H1N1 and Aujeszky's disease virus (ADV). Furthermore, risk factors for the seropositive status were investigated. 相似文献
18.
A retrospective study was performed on natural cases of porcine respiratory disease complex (PRDC) to determine the association and prevalence of PRDC with porcine circovirus 2 (PCV2) and other co-existing pathogens in Korea. Histologically, alveolar septa were markedly thickened by infiltrates of mononuclear cells. Moderate to marked multifocal peribronchial and peribronchiolar fibrosis were present and often extended into the airway lamina propria. Among the 105 pigs with PRDC, 85 were positive for PCV2, 66 were positive for porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), 60 were positive for porcine parvovirus (PPV), and 14 were positive for swine influenza virus (SIV). There were 80 co-infections and 25 single infections. A co-infection of PCV2 with another additional bacterial pathogen is frequently diagnosed in PRDC. The combination of PCV2 and Pasteurella multocida (38 cases) was most prevalent followed by PCV2 and Mycoplasma hyopneumoniae (33 cases). The consistent presence of PCV2, but lower prevalence of other viral and bacterial pathogens in all pigs examined with PRDC, has led us to speculate that PCV2 plays an important role in PRDC. 相似文献