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1.
鳜传染性脾肾坏死病毒核糖核酸酶Ⅲ基因结构及序列分析 总被引：2，自引：0，他引：2
测定了鳜传染性脾肾坏病毒（ISKNV）核糖核酸酶Ⅲ（RNaseⅢ）基因的核苷酸全序列。该基因完整读码框为771bp,GC含量为52.53%，编码一个长为256个氨基酸、分子量为28.9kD的推定蛋白。其上下游序列各有一个TATA box，终止子下游有一段回文序列。与其它物种相比，ISKNV与虹彩病毒（包括LCDV－1和CIV）的核糖核酸酶Ⅲ基因的氨基酸序列同源性较高，与酵母、线虫等物种的相应基因的同源性较低。 相似文献
2.
鳜传染性脾肾坏死病毒p31基因结构及序列分析 总被引：3，自引：0，他引：3
报道了鳜传染性脾肾坏死病毒（ISKNV）的p31基因结构及其序列分析。对ISKNV DNA HindⅢE酶切片段的序列分析结果发现该序列中含有完整的p31基因，ISKNV p31基因完整读码框为675bp，GC含量为49.78%，等电点为7.61，编码一个长为225aa、分子量为25.3kD的推定蛋白。结果分析发现该基因具有启动动子TATAbox和CAATmotif，下游有反向重复序列可形成茎环，另外还有一段直接重复序列和二联体结构。ISKNV与其它3种虹彩病毒（包括FV3、LCDV－1和EHNV）的p31基因氨基酸序列具有一定的同源性，但ISKNV与它们的同源性不高，序列比较和系统树分析发现ISKNV与蛙病毒属和淋巴囊肿病毒属的病毒都不尽相同。 相似文献
3.
克隆并测定了暗纹东方鲀线粒体基因组(m tDNA)含完整的细胞色素氧化酶亚基Ⅲ(CO III)及其下游70 bp的tRNAG ly序列。CO III基因编码框包含786个核苷酸,编码262个氨基酸的蛋白质。鱼类CO III的序列组成对A T核苷酸的偏倚程度比较低。通过暗纹东方鲀与GenBank中8个目12种鱼类的CO III序列同源性比较,显示暗纹东方鲀与这些鱼类的CO III基因具有较高的同源性。根据暗纹东方鲀与鲀目其他5种鱼的CO III基因序列所建立的进化树,与传统的分类地位相吻合。推定的tR-NA的二级结构具有典型的三叶草型结构。根据CO III序列构建的分子进化树分析,认为在采用线粒体基因序列进行分子进化分析时,应综合考虑物种遗传变异的特点。 相似文献
4.
镜鲤脂肪酸延长酶5基因的克隆和表达分析 总被引：1，自引：0，他引：1
脂肪酸延长酶5(ELOVL5)是高不饱和脂肪酸(HUFA)合成的关键酶之一。为了研究鲤HUFA合成的能力和机制,本研究采用RT-PCR和RACE技术获得镜鲤ELOVL5全长c DNA序列。ELOVL5基因c DNA全长1 121 bp,开放阅读框为876 bp,编码291个氨基酸。序列分析显示,镜鲤ELOVL5氨基酸序列包含1个组氨酸簇(HXXHH),1个典型的内质网驻留信号,多个跨膜区域和多个保守区域(KXXEXXDT、QXXFLHXYHH、NXXXHXXMYXYY、TXXQXXQ),具有典型的脂肪酸延长酶的结构特征。氨基酸同源性分析结果显示,镜鲤ELOVL5基因与其他鱼类同源性为79.0%~93.1%,与人同源性为69.0%。通过实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测该基因在镜鲤不同组织中的表达量,发现脂肪酸延长酶基因在镜鲤肝中表达量最高,其次为脑,在背部肌肉中表达量最低。镜鲤ELOVL5基因的获得为进一步研究镜鲤HUFA的合成途径及调控机理奠定了基础。 相似文献
5.
为研究鳜亲环蛋白(CypA)在传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)感染中的作用,通过RT-PCR克隆了CypA全长开放读码框(SC-CypA)。结果表明SC-CypA基因全长495 bp,编码164个氨基酸,分子量为17.59 ku。通过Blast比对和同源性进化分析,发现其与人、鼠、原鸡和斑点鲖等物种的CypA具有高度相似性,表明SC-CypA属于CypA家族的成员。环孢素A(CsA)具有免疫抑制作用,是CypA的抑制剂。结果发现,CsA浓度与ISKNV增殖具有一定的剂量依赖关系;CsA作用不同时间对ISKNV均有抑制效果;CsA对ISKNV感染诱导的细胞因子的表达具有调节作用,能抑制IL-1β、IL-8、IL-18和ISG15的表达。研究表明,宿主的CypA对ISKNV的增殖起着重要的作用,通过添加其抑制剂CsA能有效抑制病毒的增殖。 相似文献
6.
厚颌鲂(Megalobrama pellegrini)神经肽Y cDNA克隆和序列分析 总被引：1，自引：1，他引：0
利用RT-PCR的方法获得了厚颌鲂(Megalobrama pellegrini)NPY基因的编码序列。结果显示:厚颌鲂NPY基因长度为302 bp,包含了NPY基因291 bp的整个开放阅读框,共编码96个氨基酸,其分子量预测值为10987.4,理论等电点为5.72。通过ClustalX软件,将厚颌鲂与21个物种NPY的氨基酸序列进行比对,再结合Blastp分析的结果发现,厚颌鲂NPY氨基酸序列与鲤、中华倒刺鲃、鲫、斑马鱼、岩原鲤等鲤科鱼类的同源性最高,其同源性分别为100%、97%、95%、93%、93%。根据包括厚颌鲂在内的22个物种的NPY氨基酸序列的同源性构建进化树,其同源性与各鱼种分类地位一致。 相似文献
7.
采用RACE方法克隆得到了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的F0-ATP合酶b链基因的全长cDNA序列。生物信息学分析显示,该基因开放阅读框744 bp,编码248个氨基酸,分子量为28.2 kDa。Blast比对结果显示,克隆得到的cDNA序列所编码的氨基酸序列与海虱(Caligus clemensi) F0-ATP合酶β亚基的同源性为50%,与黑腹果蝇(Drosophila melanogaster) F0-ATP合酶β亚基的同源性为60%。免疫组化实验及流式细胞分析表明,F0-ATP合酶b链广泛分布于对虾鳃组织中,并且在对虾血细胞表面有分布。 相似文献
8.
鳜传染性脾肾坏死病毒(Infectious spleen and kidhey necrosis virus,ISKNV)全基因组序列于2001年完成测定,全基因组为111 362 bp,含有124个推测的开放阅读框(ORF).21307年,Eaton等对12株已完成序列测定的虹彩病毒代表株进行分析比较,除了已经推测的ORF外,认为ISKNV基因组中还存在一个的核心基因(core gene)ORF90.5L.本研究以ISKNV的cDNA为模板,根据Eaton等报道中推测的上下游位点设计引物扩增出一段963 bp的PCR产物.该序列编码一个320个氨基酸的蛋白质,推测分子量为35 kD,含有预测的跨膜区,与虹彩病毒属(Iridovirus)其他成员编码的肉豆蔻基膜蛋白有较高的同源性.将该片段克隆到原核表达载体pET32a(+)中,纯化表达的重组蛋白pET90.5L免疫昆明鼠获得高效价多克隆抗体.利用抗pET90.5L抗体与纯化病毒进行免疫印迹,结果表明,抗pET90.5L的多抗可以特异性识别病毒粒子中大小约为35 kD的蛋白条带,ORF90.5L编码的蛋白应为病毒的结构蛋白.本研究旨在为ISKNV基因工程疫苗的研发和病源侵染机制研究提供基础参考. 相似文献
9.
采用RACE方法克隆得到了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的F0-ATP合酶b链基因的全长cDNA序列.生物信息学分析显示,该基因开放阅读框744 bp,编码248个氨基酸,分子量为28.2 kDa.Blast比对结果显示,克隆得到的cDNA序列所编码的氨基酸序列与海虱(Caligus clemensi) F0-ATP合酶β亚基的同源性为50%,与黑腹果蝇(Drosophila melanogaster) F0-ATP合酶β亚基的同源性为60%.免疫组化实验及流式细胞分析表明,F0-ATP合酶b链广泛分布于对虾鳃组织中,并且在对虾血细胞表面有分布. 相似文献
10.
脂肪酸合成酶(FASN)是动物体内脂肪酸合成的关键酶。本研究利用逆转录PCR和RACE技术获得鲤Cyprinus carpio FASN全长cDNA序列为8 927bp,开放阅读框7 533bp,编码2 511个氨基酸。FASN蛋白质相对分子量274 145.67D,理论等电点(PI)为6.10。氨基酸同源性分析结果显示:鲤FASN基因与其他鱼类同源性为75.13%~95.34%,与人同源性为61.81%。系统进化树结果显示:鲤FASN氨基酸序列与金线鲃Sinocyclocheilus grahamia聚为一支,同源性最高。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测结果表明:FASN基因鲤脑组织中表达量最高,肝脏次之,血液中最低。鲤FASN基因的获得为进一步深入研究鲤脂肪酸的合成途径及脂肪发育分子调控机制奠定了基础。 相似文献
11.
‘Gold standard’ OIE reference PCR assay was utilized to detect the presence of infectious spleen and kidney necrosis virus (ISKNV) in freshwater ornamental fish from Malaysia. From total of 210 ornamental fish samples representing 14 species, ISKNV was detected in 36 samples representing 5 fish species. All positive cases did not show any clinical signs of ISKNV. Three restriction enzymes analyses showed that the fish were infected by identical strains of the same virus species within Megalocytivirus genus. Major capsid protein (MCP) genes of 10 ISKNV strains were sequenced and compared with 9 other reference nucleotide sequences acquired from GenBank. Sequence analysis of MCP gene showed that all strains detected in this study were closely related to the reference ISKNV with nucleotide sequence identity that was ranging from 99.8% to 100%. In addition, phylogenetic analysis of MCP gene revealed that viruses from genus Megalocytivirus can be divided into three genotypes: genotype 1 include reference ISKNV and all other strains that were detected in this study, genotype 2 include viruses closely related to red sea bream iridovirus (RSIV), and genotype 3 include viruses closely related turbot reddish body iridovirus (TRBIV). 相似文献
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用超分支滚环扩增法检出传染性脾肾坏死病毒。超分支滚环扩增法包括锁式探针的连接及超分支滚环扩增法扩增两部分,通过研究锁式探针的最佳连接体系和连接条件,并进行超分支滚环扩增法反应条件的优化,得出的本研究最适反应条件为:锁式探针在T4 DNA连接酶作用下37℃连接20 min,接下来的超分支滚环扩增法在Bst DNA聚合酶大片段作用下61℃反应40 min,即能够实现靶序列的有效检出。灵敏度试验表明,超分支滚环扩增法所能检测到的最低模板量接近1 copy。在4种病毒中进行的特异性试验表明,本方法能够保证对传染性脾肾坏死病的特异性检测。 相似文献
13.
为建立传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)灭活快速检验方法,从ISKNV感染CPB细胞系转录谱筛选并经q RT-PCR验证表达量最高的病毒ORF099基因作为快速检测靶基因。以质粒p MDORF099为标准品,采用q PCR方法绘制了CT值与质粒拷贝数的标准曲线,其线性方程为CT=–3.42lgx+39.455,最低检测限为3拷贝/μL,结果显示组间和组内变异系数均小于2%,表明该方法具有较高的灵敏度和较好的重复性。将ISKNV病毒悬液10倍稀释成100~103拷贝/m L,分别取1 m L病毒稀释液接种CPB细胞,在第7、9和11天提取细胞总RNA,经基因组DNA去除试剂盒去除残留DNA后采用qRT-PCR方法检测ORF099基因转录本,结果显示在第7天即可从接种1个拷贝病毒的细胞中检测出ISKNV ORF099转录本。将3个浓度梯度(0.05%、0.1%、0.2%)的甲醛灭活ISKNV制备的模拟样品以及实验室制备的3批次ISKNV细胞灭活疫苗样品接种CPB细胞9 d,采用上述快速检验方法进行检测。0.05%、0.1%甲醛灭活模拟样品可检测到ISKNV ORF099基因转录本,其他样品均未检测到。而细胞盲传实验显示,0.1%终浓度甲醛灭活ISKNV接种细胞盲传3代未出现CPE,鱼体安全实验显示接种鱼体后无临床发病症状和实验鱼死亡,表明本研究建立的病毒灭活快速检验方法比细胞盲传法和鱼体安全实验具有更高的灵敏度,与传统检测方法相比具有灵敏度高、耗时短、检测效率高等优点,对提高ISKNV灭活疫苗生产效率具有重要意义。 相似文献
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鳜(Siniperca chuatsi)传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)是鳜暴发性传染病的主要病原,给鳜养殖业造成了严重的经济损失,因此快速、灵敏的检测方法对鳜养殖业的发展具有非常重要的意义.根据鳜ISKNV主要衣壳蛋白(MCP)基因序列设计了2对引物,利用巢式PCR方法对病鱼脾肾组织进行扩增,建立了ISKNV快速特异的巢式PCR检测方法.应用该方法对含MCP基因的质粒进行倍比稀释后检测扩增的灵敏度可达到5 fg;巢式PCR检测的灵敏度是一步法PCR的104倍以上. 相似文献
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为探究花鲈(Lateolabrax maculatus)干扰素刺激基因 15 (Interferon-stimulated gene 15, ISG15)在抵抗病毒过程的免疫应答反应, 本研究克隆、鉴定了花鲈 ISG15 基因(LmISG15), 并对其进行生物信息学分析, 获得了 LmISG15 在各组织中的表达特征及其在受到传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus, ISKNV)感染后的时空表达特征。结果显示, 该基因全长 1625 bp, ORF 为 480 bp, 编码 160 个氨基酸, 分子质量为 17.5 kD, 理论等电点为 9.41。LmISG15 的氨基酸序列较为保守, 与眼斑拟石首鱼(Sciaenops ocellatus)和条石鲷(Oplegnathus fasciatus)相似度分别为 74.07%和 71.88%。LmISG15 在花鲈 10 种组织中均有表达, 在心脏中表达量最高, 其次在脑、中肾和鳃中的表达量较高, 在肌肉中表达量最低。注射 ISKNV 后, 花鲈头肾组织中病毒拷贝数升高, 同时 LmISG15 在花鲈肝脏、头肾和鳃中的表达量显著上调(P＜0.05)。研究表明, LmISG15 参与了抵抗病毒刺激的免疫应答过程。 相似文献
16.
为了建立鳜传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)疫苗抗原含量的ELISA检测方法,制备了3株抗ISKNV主衣壳蛋白(MCP)的单克隆抗体,鉴定了其生物学特性。将大肠杆菌表达的重组MCP纯化复性后,连续3次免疫BALB/c小鼠,然后将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,经过克隆、筛选,获得3株能稳定分泌抗ISKNV MCP蛋白的单克隆抗体阳性细胞株,分别命名为5F1、3D9和5B4,均为Ig G1亚型。间接ELISA实验表明,3株单抗可特异性识别ISKNV,与鳜弹状病毒、大鲵虹彩病毒等无交叉反应。将5F1株免疫小鼠后制备腹水,以重组MCP和ISKNV细胞培养物上清液为检测抗原,ELISA检测腹水效价分别为1∶51 200和1∶400。间接免疫荧光(IFA)和Western Blotting鉴定结果显示,5F1能够与ISKNV病毒发生特异性反应,并初步确定5F1单抗株制备的腹水用于IFA的使用浓度为1∶200、Western Blotting的使用浓度为1∶1000。结果证实,成功制备了抗ISKNV MCP的单克隆抗体,可特异性识别ISKNV病毒粒子和MCP蛋白,为建立ISKNV疫苗抗原含量检测方法奠定了基础。 相似文献
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采用MTT颜色反应法研究传染性脾肾坏死病毒（ISKNV）、伴刀豆球蛋白A（concanavallin A,ConA)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS）在离体状态下对健康和ISKNV感染后存活30d或60d的鳜的头肾淋巴细胞转化的影响。结果表明，ConA和LPS能促进健康鳜头肾淋巴细胞的转化，而对感染后存活30d或60d的鳜头肾淋巴细胞没有作用；纯化的ISKNV对健康鳜头肾淋巴细胞没有促进淋巴细胞转化的作用，但对ConA的作用有抑制，对感染后存活的30d或60d的鳜头肾淋巴细胞，纯化的ISKNV有一定的促进转化的作用，感染存活的鳜头肾中有对ISKNV的免疫记忆性T细胞。另外，用建立的ISKNV PCR检测方法对健康和ISKNV感染后存活的鲜组织进行了检测，结果显示，健康鳜为阴性，而ISKNV感染后存活的鱼，头肾、后肾、脾脏和部分鱼的心脏为阳性。ISKNV在鳜体内形成潜伏感染。 相似文献
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Infectious spleen and kidney necrosis virus (ISKNV), family Iridoviridae, genus Megalocytivirus, may cause high mortality rates such as those seen in mandarin fish, Siniperca chuatsi. ISKNV has attracted much attention due to the possible environmental threat and economic losses it poses on both cultured and wild populations. We have investigated the pathogenicity of ISKNV‐like agent Megalocytivirus, isolated from infected pearl gourami, in golden mandarin fish, Siniperca scherzeri – a member of the Percichthyidae family – and in another Percichthyidae species, S. chuatsi. Fish were challenged with four different doses of ISKNV‐like agent Megalocytivirus (1, 10, 100 or 1000 μg per fish) over a 30‐day period, and cumulative fish mortalities were calculated for each group. No significant mortality was observed for fish challenged with the lowest dose (1 μg per fish) relative to a control group. However, all other challenged groups showed 100% mortality over a 30‐day period in proportion to the challenge dose. Quantitative real‐time PCR was performed to measure mRNA expression levels for six immune‐related genes in golden mandarin fish following ISKNV‐like agent challenge. mRNA expression levels for IRF1, Mx, viperin and interleukin 8 significantly increased, while mRNA levels for IRF2 and IRF7 remained constant or declined during the challenge period. 相似文献
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First description of a natural infection with spleen and kidney necrosis virus in zebrafish 
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下载免费PDF全文 Roberto Bermúdez Ana Paula Losada Ana Manuela de Azevedo Jorge Guerra‐Varela David Pérez‐Fernández Laura Sánchez Francesc Padrós Barbara Nowak María Isabel Quiroga 《Journal of fish diseases》2018,41(8):1283-1294
Zebrafish has become a popular research model in the last years, and several diseases affecting zebrafish research facilities have been reported. However, only one case of naturally occurring viral infections was described for this species. In 2015, infectious spleen and kidney necrosis virus (ISKNV) was detected in zebrafish from a research facility in Spain. Affected fish showed lethargy, loss of appetite, abnormal swimming, distention of the coelomic cavity and, in the most severe cases, respiratory distress, pale gills and petechial haemorrhages at the base of fins. Cytomegaly was the most relevant histopathological finding in organs and tissues, sometimes associated to degenerative and necrotic changes. ISKNV belongs to the relatively newly defined genus Megalocytivirus, family Iridoviridae, comprising large, icosahedral cytoplasmic DNA viruses. This is the first case of naturally occurring Megalocytivirus infection in zebrafish research facilities, associated with morbidity. The virus has been identified based on both pathologic and genetic evidence, to better understand the pathogenesis of the infection in zebrafish and the phylogenetic relationship with other iridoviruses. Given the ability of megalocytiviruses to cross‐species boundaries, it seems necessary to implement stringent biosecurity practices as these infections may invalidate experimental data and have major impact on laboratory and cultured fish. 相似文献