共查询到20条相似文献，搜索用时 31 毫秒
1.
本试验旨在研究不同浓度（0、0.5、2.0、5.0 μmol/L）白藜芦醇（resveratrol,RES）对绵羊卵母细胞体外受精（in vitro fertilization,IVF）、卵母细胞抗氧化能力及卵丘细胞分泌类固醇激素的影响。绵羊卵母细胞在含不同浓度RES的体外成熟（in vitro maturation,IVM）液中培养24 h以后进行体外受精,并收集IVM液,测定超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）的活性及脂质过氧化产物丙二醛（monochrome display adapter,MDA）的含量;用酶联免疫法测定雌二醇（estradiol,E2）和孕酮（progesterone,P4）的浓度。研究结果表明,与对照组相比,在IVM液中添加0.5 μmol/L RES显著提高卵裂率（P<0.05）,但对受精率和囊胚率没有显著影响（P>0.05）;5.0 μmol/L RES显著降低受精率、卵裂率和囊胚率（P<0.05）,对胚胎发育有抑制作用;在IVM和体外培养（in vitro culture,IVC）液中分别添加0.5 μmol/L RES均显著提高受精率、卵裂率和囊胚率（P<0.05）。与对照组相比,在IVM液中添加RES对卵丘细胞分泌E2有一定的抑制作用,5.0 μmol/L RES显著降低E2浓度（P<0.05）;0.5 μmol/L RES显著提高卵丘细胞P4分泌量（P<0.05）。0.5和2.0 μmol/L RES增加SOD和GSH-Px等酶的活性,但与对照组相比无显著差异（P>0.05）,却显著降低MDA含量（P<0.05）;而5.0 μmol/L RES显著降低抗氧化酶活性并增加MDA含量（P<0.05）。综上所述,在IVM和IVC液中同时添加0.5 μmol/L RES,通过增强卵母细胞抗氧化能力和P4的浓度,并降低MDA含量,从而提高胚胎卵裂率和囊胚率。 相似文献
2.
[目的] 研究白藜芦醇（resveratrol,RES）对水牛卵丘细胞体外培养过程中细胞增殖活力、激素分泌、卵丘扩展及抗凋亡和抗氧化能力的影响。[方法] 用不同浓度（0（对照组）、1、10、20、30、40、50和60 μmol/L）RES培养卵丘细胞,用CCK-8试剂盒测定细胞增殖活力,筛选最佳RES处理浓度及时间用于后续试验。用ELISA法测定培养液中卵丘细胞分泌的雌二醇（estradiol,E2）和孕酮（progesterone,P4）的含量,实时荧光定量PCR法测定卵丘细胞扩展、凋亡和抗氧化相关基因的相对表达量。[结果] 与对照组相比,在体外培养24~36 h内,1、10和20 μmol/L RES组水牛卵丘细胞的增殖活力均有升高趋势,10 μmol/L RES处理36 h细胞活力最强,因此用于后续试验中细胞的处理。体外培养36 h时,10 μmol/L RES组细胞增殖能力和E2、P4的分泌显著增加（P<0.05）;10 μmol/L RES组卵丘细胞扩展相关基因穿透素3（PTX3）、前列腺素内过氧化物合酶2（PTGS2）、抗凋亡基因B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和超氧化物歧化酶1（SOD1）基因mRNA相对表达量显著或极显著增加（P<0.05;P<0.01）,而促凋亡基因Bcl-2相关蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）和p21的表达量显著或极显著降低（P<0.05;P<0.01）,透明质酸合酶2（HAS2）和过氧化氢酶（CAT）的表达量无显著差异（P>0.05）。[结论] 培养液中添加10 μmol/L RES能够提高水牛卵丘细胞体外培养的增殖活力,促进卵丘细胞激素分泌和卵丘细胞扩展,并增强卵丘细胞抗氧化能力并减少细胞凋亡。 相似文献
3.
研究旨在探讨单宁酸对猪卵母细胞体外成熟质量及其胚胎发育能力的影响。在猪卵丘卵母细胞复合体（COCs）体外成熟培养液中添加不同浓度（0、1、10、100 μg/mL）单宁酸培养42 h后,检测COCs的扩散程度和卵丘细胞扩散指数,统计COCs的体外成熟率,检测成熟卵母细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）、活性氧（reactive oxygen species,ROS）和生长分化因子9（growth differentiation factor 9,GDF9）的水平,并统计孤雌激活及体外受精胚胎48和168 h的卵裂率、囊胚率及囊胚总细胞数。结果显示,与对照组相比,10 μg/mL单宁酸组卵丘细胞扩散指数显著提高（P<0.05）,100 μg/mL单宁酸组显著降低（P<0.05）;1和10 μg/mL单宁酸组卵母细胞成熟率差异不显著（P>0.05）,100 μg/mL单宁酸组卵母细胞成熟率显著降低（P<0.05）;1和10 μg/mL单宁酸组GSH和GDF9水平显著提高（P<0.05）,ROS水平显著降低（P<0.05）。孤雌胚胎和体外受精胚胎发育能力结果显示,与对照组相比,各单宁酸组卵裂率差异不显著（P>0.05）,10 μg/mL单宁酸组孤雌胚胎囊胚率及体外受精胚胎囊胚率显著提高（P<0.05）,100 μg/mL单宁酸组孤雌胚胎囊胚细胞数及体外受精胚胎囊胚细胞数均显著低于其他各组（P<0.05）。以上结果表明,10 μg/mL单宁酸可通过提高卵丘细胞扩散能力及GSH和GDF9水平、降低卵母细胞内ROS水平,改善猪卵母细胞成熟质量,提高孤雌胚胎及体外受精胚胎的发育能力。 相似文献
4.
试验旨在探讨藏红花素（crocin）的抗氧化应激作用对小鼠卵母细胞体外成熟及后续胚胎发育能力的影响。在体外成熟（IVM）培养液中添加不同浓度藏红花素（0、5、10、15、20、25、30 μmol/L），小鼠卵母细胞在体外成熟培养12 h后，检测卵母细胞第一极排出情况、卵母细胞胞质内活性氧（ROS）和谷胱甘肽（GSH）含量，并进行体外受精（IVF）；体外受精后6 h统计受精率，24 h统计卵裂率，96 h统计囊胚率。结果显示，与对照组相比，10、15 μmol/L藏红花素显著提高了卵母细胞第一极体排出率（P<0.05）；当藏红花素浓度继续增加时，卵母细胞的第一极体排出率下降，30 μmol/L藏红花素显著降低了卵母细胞第一极体排出率（P<0.05）；5、10、15 μmol/L藏红花素均显著降低了卵母细胞ROS含量（P<0.05），10、15 μmol/L藏红花素均显著提高了卵母细胞GSH含量（P<0.05）。与对照组相比，10 μmol/L藏红花素组受精率、卵裂率、囊胚率差异均不显著（P>0.05），15、20、25、30 μmol/L藏红花素均显著降低受精率和囊胚率（P<0.05），对卵裂率影响不显著（P>0.05）。结果表明，在小鼠卵母细胞体外成熟培养液中添加10 μmol/L藏红花素可以显著增加第一极体排出率，显著降低卵母细胞ROS含量、提高卵母细胞GSH含量，但对受精后的胚胎发育无显著影响。 相似文献
5.
【目的】研究柠檬苦素(limonin,Lim)对小鼠卵母细胞体外成熟(IVM)及后续体外受精(IVF)胚胎发育潜能的影响,旨在为体外成熟培养系统的优化提供参考。【方法】在小鼠体外成熟培养液中添加不同浓度的Lim(0、10、20、50 μmol/L),成熟培养12 h后统计小鼠卵母细胞第一极体(PBI)排出率,筛选体外成熟培养液中添加Lim的最适浓度;在体外成熟培养液中添加最适浓度的Lim,以0 μmol/L Lim为对照组,成熟培养12 h,通过免疫荧光染色检测活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)以及线粒体膜电位(MMP)水平;通过实时荧光定量PCR检测卵母细胞抗氧化及凋亡相关基因的mRNA表达水平。将最适Lim组及对照组卵母细胞体外成熟24 h后进行体外受精,于体外受精24 h和3.5 d分别统计胚胎卵裂率和囊胚率,并用Fluorescein-dUTP和Hoechst 33342染色分别检测囊胚总细胞数及囊胚内凋亡细胞比率。【结果】与0 μmol/L Lim组相比,20 μmol/L Lim组小鼠卵母细胞PBI排出率显著升高(P＜0.05),后续试验均用20 μmol/L Lim进行处理。与对照组组相比,20 μmol/L Lim组小鼠卵母细胞内ROS水平显著降低(P＜0.05),GSH、MMP水平均显著增加(P＜0.05),抗氧化相关基因(GPx3、CAT和Prdx3)、抗凋亡相关基因(Bcl-2、Bcl-xl)表达水平均显著上调(P＜0.05),促凋亡相关基因(Caspase-3)表达水平显著下调(P＜0.05);体外受精胚胎的卵裂率、囊胚率、囊胚总细胞数均显著增加(P＜0.05),囊胚内细胞凋亡比率显著下降(P＜0.05)。【结论】在体外成熟培养液中添加20 μmol/L Lim可以通过抑制氧化应激和细胞凋亡、增加MMP水平提高小鼠卵母细胞质量,从而提高体外受精胚胎的发育潜力。 相似文献
6.
本试验旨研究在体外培养（in vitro culture，IVC）中添加芝麻素（sesamin，SES）对小鼠早期胚胎体外发育的影响。采集6周龄雌性昆明小鼠受精卵，随机分为对照组和不同浓度（10、50、100 μmol/L）SES组。采用Fluorescein-dUTP和Hoechst 33342免疫荧光染色分别检测囊胚内细胞凋亡率和总细胞数；采用DCFH-DA检测早期胚胎内活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平；采用CMF2HC检测早期胚胎内谷胱甘肽（glutathione，GSH）水平；采用JC-1检测早期胚胎线粒体膜电位强度。结果显示，不同浓度SES组分裂率和囊胚率较对照组均有提高，但无显著差异（P>0.05）；50 μmol/L SES组细胞数较对照组显著提高（P<0.05），细胞凋亡率较对照组显著降低（P<0.05）；与对照组相比，50 μmol/L SES组ROS水平显著降低（P<0.05），GSH水平和线粒体膜电位水平显著提高（P<0.05）。结果表明，在IVC中添加SES可提高囊胚内细胞数、减少细胞凋亡率，降低细胞内ROS水平，提高细胞内GSH水平，改善早期胚胎线粒体功能，减少胚胎氧化应激的损伤，提高小鼠早期胚胎发育质量。 相似文献
7.
AREG对绵羊小腔卵泡卵母细胞体外成熟的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
旨在研究双调蛋白（AREG）对绵羊小腔卵泡卵母细胞体外成熟（IVM）的影响。本研究从屠宰场绵羊卵巢上采集小腔和中腔卵泡的卵母细胞进行试验，利用自发荧光检测卵母细胞的NAD （P） H和FAD++水平，利用JC-1检测卵母细胞的线粒体膜电位；两种来源的卵母细胞经体外成熟后，比较其卵丘扩展指数（CEI）、第一极体排出率（MII%）；比较AREG、AREG+GDF9、AREG+BMP15、AREG+GDF9+BMP15、GDF9+BMP15对小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的CEI、MII%及卵母细胞线粒体膜电位的影响；检测了AREG+GDF9+BMP15对小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的NAD （P） H和FAD++水平及其受精后发育能力的影响。结果表明，成熟前，小腔卵泡卵母细胞的线粒体膜电位和FAD++水平均显著低于中腔卵泡卵母细胞（P<0.05）；体外成熟培养后，小腔卵泡卵母细胞的CEI和MII%均显著低于中腔卵泡卵母细胞（P<0.05）。与对照组相比，AREG+GDF9+BMP15显著提高了小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的CEI、MII%和线粒体膜电位（P<0.05），且与中腔卵泡卵母细胞组差异不显著（P>0.05）；另外，AREG+GDF9+BMP15显著提高了小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的NAD （P） H和FAD++水平（P<0.05），且与中腔卵泡卵母细胞组差异不显著（P>0.05）。与对照组相比，在成熟液中添加AREG+GDF9+BMP15可以明显提高小腔卵泡卵母细胞体外受精后的卵裂率和囊胚率（分别为（43.79±3.69）%、（28.54±4.31）%和（78.99±1.12）%、（47.46±2.50）%，P<0.05），而且与中腔卵泡卵母细胞组无显著差异（P>0.05）。综上表明，绵羊小腔卵泡卵母细胞的代谢水平及IVM质量较低， AREG在GDF9和BMP15的协同作用下可以显著提高小腔卵泡卵母细胞的代谢水平及IVM质量，并进一步提高小腔卵泡卵母细胞体外受精后的发育能力。 相似文献
8.
ZHAO Xi NURIBIYAMU&# Maimaitituoheti SONG Yukun AIRIXIATI&# Dilixiati ZHANG Bo AERMAN&# Haire ABULIZI&# Wusiman 《中国畜牧兽医》2007,47(10):3289-3296
The purpose of this study was to investigate the effect of growth differentiation factor 9 (GDF9) on the gene expression of cumulus cells expansion and hormone receptors as well as hormone secretion,in order to provide evidence for the role of GDF9 in the development of sheep cumulus cells.Sheep cumulus cells were used as the research object in this study,and were cultured for 48 h by adding different concentrations (0,50,100,200,400 ng/mL) GDF9 to low serum cell culture medium.Total RNA were extracted from the cells,using β-actin as the reference gene,Real-time quantitative PCR technology were used to detect the cumulus cells expansion related genes hyaluronic acid synthase gene 2 (HAS2),prostaglandin lead oxide synthase 2 (PTGS2),pentraxin 3 (PTX3) and hormone receptor genes follicle-stimulating hormone receptor (FSHR),luteinizing hormone receptor (LHR) and estrogen receptors (E2R).Using the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method to test the content of E2 and P4.The results showed that HAS2,PTX3,FSHR,E2R and LHR mRNA relative expression of 200 ng/mL GDF9 group was extremely significantly higher than the control group and other GDF9 groups (P<0.01),PTGS2 mRNA relative expression was extremely significantly higher than the control group and 50,400 ng/mL GDF9 groups (P<0.01),and significantly higher than 100 ng/mL GDF9 group (P<0.05).When added 400 ng/mL GDF9,the relative mRNA expression of all the mentioned-above genes were all extremely significantly lower than that of the 200 ng/mL GDF9 group.Moreover,the E2 secretion level was extremely significantly higher than that of the control group and 50 ng/mL GDF9 group (P<0.01),significantly higher than that of the 100 ng/mL GDF9 group(P<0.05),while had no significant difference from the 200 ng/mL GDF9 group (P>0.05).When added 100,200 and 400 ng/mL GDF9,the concentration of P4 was significantly higher than the control group (P<0.05),and there was no significant difference from the 50 ng/mL group (P>0.05),and there was no significant difference between 100,200 and 400 ng/mL GDF9 groups (P>0.05).To sum up,GDF9 could promote the expansion of sheep cumulus cells and participated in the regulation of hormone secretion of sheep cumulus cells. 相似文献
9.
旨在探讨KDM1A对牦牛卵母细胞减数分裂成熟及其发育潜能的影响。本研究在体外成熟液中添加不同浓度的KDM1A特异性抑制剂GSK-KDM1A,牦牛卵丘-卵母细胞复合体（COCs）体外培养24 h后,观察卵丘细胞的扩展和第一极体的排出情况;利用免疫荧光检测体外培养过程中卵母细胞内KDM1A的表达模式;采用实时荧光定量PCR检测体外培养卵母细胞内Kdm1a、Oct-4、Sox-2以及Nanog的表达水平;体外培养成熟后的牦牛卵母细胞进行体外受精,观察其卵裂率与囊胚形成率。结果显示,体外培养24 h后,GSK-KDM1A组的卵丘细胞扩展程度显著低于对照组（P<0.05）,而320 nmol·L-1组的卵丘细胞扩展程度和第一极体排出率均显著低于160 nmol·L-1组（P<0.05）。在卵母细胞体外成熟过程中,Kdm1a呈现动态表达模式,MⅠ期的表达水平显著低于GV和MⅡ期（P<0.05）;添加GSK-KDM1A能显著抑制卵母细胞中KDM1A蛋白的表达（P<0.05）,320 nmol·L-1组各时间点KDM1A的表达量均显著低于160 nmol·L-1组（P<0.05）。GSK-KDM1A组卵母细胞内Oct-4与Sox-2的表达水平显著高于对照组（P<0.05）,但Nanog的表达水平无显著差异（P>0.05）。牦牛卵母细胞体外成熟后,GSK-KDM1A组的卵裂率显著低于对照组（P<0.05）,但囊胚形成率无显著变化（P>0.05）。综上表明,KDM1A参与调控牦牛卵母细胞减数分裂成熟过程,GSK-KDM1A能有效抑制KDM1A的表达,影响卵母细胞减数分裂成熟及其发育潜能,揭示KDM1A在此过程中扮演重要角色。 相似文献
10.
本试验旨在探究生长分化因子9（GDF9）对卵丘细胞扩展相关基因和激素受体基因表达量及激素分泌的影响,为GDF9在绵羊卵泡发育中的作用提供依据。以绵羊卵丘细胞为研究对象,通过在低血清细胞培养液中添加不同浓度（0、50、100、200、400 ng/mL）的GDF9,培养绵羊卵丘细胞48 h后,提取细胞总RNA,利用实时荧光定量PCR技术,以β-actin为内参基因,检测卵丘细胞扩展相关基因透明质酸合酶2（HAS2）、前列腺素内过氧化物合酶2（PTGS2）、穿透素3（PTX3）及激素受体相关基因卵泡刺激素受体（FSHR）、促黄体生成素受体（LHR）和雌激素受体（E2R）的mRNA相对表达量;利用酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养液中卵丘细胞分泌的雌二醇（E2）和孕酮（P4）含量。结果显示：在细胞培养液中添加200 ng/mL GDF9时,HAS2、PTX3、FSHR、E2R和LHR的mRNA相对表达量极显著高于对照组与其他处理组（P<0.01）;PTGS2 mRNA相对表达量极显著高于对照组、50和400 ng/mL GDF9组（P<0.01）,显著高于100 ng/mL GDF9组（P<0.05）。当添加400 ng/mL GDF9时,各基因mRNA相对表达量均极显著低于200 ng/mL GDF9组（P<0.01）;E2分泌量极显著高于对照组与50 ng/mL GDF9组（P<0.01）,显著高于100 ng/mL GDF9组,与200 ng/mL GDF9组差异不显著（P>0.05）。100、200和400 ng/mL GDF9组P4分泌量显著高于对照组（P<0.05）,与50 ng/mL GDF9组没有显著差异（P>0.05）,且3组之间差异不显著（P>0.05）。综上所述,GDF9能够促进绵羊卵丘细胞扩展,并参与绵羊卵丘细胞激素分泌的调控。 相似文献
11.
The purpose of this study was to explore the effects of KDM1A on the meiotic maturation and developmental potential of yak oocytes. The specific inhibitor GSK-KDM1A of KDM1A was added into in vitro maturation medium of yak oocytes. After 24 h in vitro culture of yak cumulus oocyte complexes (COCs), the expansion of cumulus cells and the extrusion of the first polar body were observed. The expression level of KDM1A in oocyte was measured by immunofluorescence during in vitro culture. The expression levels of Kdm1a, Oct-4, Sox-2 and Nanog in oocytes were detected by RT-qPCR. Then, yak oocytes were fertilized after in vitro culture, and the cleavage rate and blastocyst formation rate were observed, respectively. The results showed that the cumulus cells expansion in GSK-KDM1A groups were significant lower than those in control group (P<0.05) after 24 h culture, and the cumulus cells expansion and the first polar body extrusion rate in 320 nmol·L-1 group were significantly lower than those in 160 nmol·L-1 group (P<0.05). During oocyte in vitro maturation, Kdm1a showed dynamic expression profile, and the expression level of Kdm1a in MⅠ-stage was significantly lower than that in GV-stage and MⅡ-stage (P<0.05). The GSK-KDM1A could significantly inhibit the expression of KDM1A protein in oocytes (P<0.05), and the expression of KDM1A in 320 nmol·L-1 group was significantly lower than that in 160 nmol·L-1 group (P<0.05). The expression levels of Oct-4 and Sox-2 in GSK-KDM1A group were significantly higher than that in control group (P<0.05), but there was no significant difference in the expression of Nanog (P>0.05). After 24 h culture, the cleavage rates of oocytes in GSK-KDM1A groups were significantly lower than those in control group (P<0.05), while the blastocyst formation rate was not significantly different (P<0.05). In conclusion, KDM1A is involved in regulating the meiotic maturation process of yak oocytes. GSK-KDM1A can effectively inhibit the expression of KDM1A, affect the meiotic maturation and developmental potential of oocytes, which reveal that KDM1A plays an important role in this process. 相似文献
12.
体外成熟液中添加PAF对牦牛卵母细胞发育能力及基因表达的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
旨在探讨体外成熟（IVM）液中添加血小板活化因子（PAF）对牦牛卵母细胞发育能力及基因表达影响。本试验将牦牛1 025个卵丘-卵母细胞复合体（COCs）分为4组,分别在含不同浓度PAF（0、10-8、10-7和10-6mol·L-1）的IVM液中成熟后,与奶牛精子体外受精（IVF）和体外培养（IVC）,比较分析各组卵母细胞成熟率、卵裂率和囊胚率以及COCs和胚胎中抗凋亡（BCL-2）、促凋亡（BAX）、表皮生长因子（EGF）及其受体（EGFR）、转录因子（OCT-4和NANOG）和c-fos等基因的表达量差异。结果表明,IVM液中PAF浓度为10-7mol·L-1组的卵母细胞成熟率（（92.16±0.19）%）、卵裂率（（77.20±0.85）%）和囊胚率（（46.71±0.68）%）显著高于其他组（P<0.05）。qPCR结果显示,在该组成熟的COCs中BCL-2、EGF、EGFR、c-fos表达量显著上调（P<0.05）,而促凋亡基因BAX表达量显著下调（P<0.05）,囊胚中EGF、EGFR、OCT-4基因表达量显著上调（P<0.05）。各组间2-、4-、8-细胞、桑椹胚和囊胚中BCL-2、BAX和NANOG表达量差异不显著,但桑椹胚和囊胚中BCL-2表达量均明显下调,而BAX表达量均明显上调。综上所述,IVM液中适宜浓度PAF（10-7mol·L-1）可以促进牦牛卵母细胞成熟和胚胎发育,调控细胞凋亡和增殖相关基因的表达。 相似文献
13.
旨在探索牦牛卵母细胞成熟过程中细胞色素P450芳香化酶(cytochrome P450arom, CYP19A1)对内源性雌激素(17β-estradiol, E2)分泌、卵母细胞自噬和后续胚胎发育能力的影响。本研究在牦牛卵丘卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes, COCs)体外成熟过程中,分别用等体积生理盐水、最佳浓度E2(10-7 mol·L-1)、CYP19A1诱导剂黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1, AFB1)、CYP19A1抑制剂双酚A(bisphenol A, BPA)处理,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qRT-PCR)、Western blot和免疫荧光技术检测各组成熟COCs中CYP19A1表达水平,酶联免疫吸附方法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测诱导和抑制CYP19A1处理组牦牛成熟COCs培养液中E2水平;分析不同处理组C... 相似文献
14.
旨在探讨玻璃化冷冻-解冻对牦牛未成熟卵母细胞发育能力及卵丘-卵母细胞复合体（COCs）转录组的影响，为完善牦牛COCs冷冻保存技术提供理论依据。本研究将未经成熟培养的牦牛COCs进行玻璃化冷冻-解冻后分为2组，A组：COCs体外成熟（IVM）后用普通牛精子进行体外受精（IVF），获得的受精卵在G-1胚胎培养液中培养72 h后转入G-2培养液培养96 h；B组：IVF后，受精卵在G-1培养液培养120 h后转入G-2培养液培养48 h；以未进行冷冻处理的新鲜COCs作为对照组（C组）：IVF后，受精卵在G-1培养液培养72 h后转入G-2培养液培养96 h。对牦牛新鲜COCs（n=3）和玻璃化冷冻-解冻的COCs（n=3）进行扩增、建库和转录组测序（RNA-seq）分析。结果发现，B组的卵裂率、囊胚率显著高于A组（P<0.05），但A组和B组的卵裂率、囊胚率均显著低于C组（P<0.05）。以|log2（fold change）|≥ 2，Q<0.05为阈值，牦牛冻融COCs相对于新鲜COCs共筛选出851个差异表达基因（DEGs），其中上调846个，下调5个。GO分析表明，DEGs主要富集于生物过程、细胞组分和分子功能3大类；KEGG注释结果表明，DEGs富集到258条通路，其中16条通路显著富集（P<0.05）。研究表明，IVF后在G-1培养液中培养120 h可以提高牦牛玻璃化冷冻卵母细胞的后续发育能力；玻璃化冷冻影响牦牛COCs转录组，从而降低卵母细胞的发育潜力。该发现为完善牦牛COCs玻璃化冷冻技术提供了一定的理论基础。 相似文献
15.
试验旨在研究培养液中添加虾青素（AX）对小鼠胚胎体外发育和相关基因表达的影响。试验选用23~25 g的ICR系雌性小鼠,利用超数排卵,取卵母细胞进行体外受精,受精1 h后将受精卵随机分组、分别移入浓度为0、5、10、25、50 μmol/L的虾青素培养液中进行体外发育培养,在培养24和96 h后分别观察并统计各组的卵裂率和囊胚率;体外培养至96 h后,对囊胚进行细胞计数,统计囊胚细胞数差异;提取各组囊胚总RNA,利用实时荧光定量PCR技术对各组胚胎的TGF-β和Bcl-2基因的相对表达量进行检测。结果显示,添加10 μmol/L虾青素能够改善小鼠胚胎体外发育环境且显著提高胚胎卵裂率和囊胚率（P<0.05）;显著提高囊胚的细胞数（P<0.05）;极显著提高TGF-β基因表达量（P<0.01）。结果表明,添加10 μmol/L虾青素有利于小鼠胚胎体外发育,可用于改善小鼠胚胎体外发育环境;TGF-β和Bcl-2基因很可能参与了胚胎发育过程中的相关调控。 相似文献
16.
18.
旨在探究双氢睾酮（dihydrotestosterone,DHT）是否通过调节孕酮（progesterone,P4）、雌二醇（oestrogen,E2）和细胞凋亡参与影响绵羊子宫功能,以揭示其在绵羊生殖生理中的潜在作用。本试验以1.5岁左右的雌性小尾寒羊为试验动物,检测卵泡期、黄体期和妊娠期子宫中DHT合成酶和雄激素受体（androgen receptor,AR）的表达变化。随后,体外培养绵羊子宫内膜上皮细胞,并用DHT （10-10~10-7 mol·L-1）和AR拮抗剂氟他胺（Flu,10-8 mol·L-1）处理（n=3）。通过酶联免疫吸附试验、细胞免疫荧光、蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR检测P4和E2水平、合成酶和受体表达。此外,还检测经DHT和Flu处理后,绵羊子宫内膜上皮细胞中凋亡因子Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein,Bax）、B细胞淋巴瘤蛋白2（B cell lymphoma protein 2,Bcl-2）、半胱天冬酶3（caspase 3,CASP3）和活化半胱天冬酶3（active-caspase 3,Act-CASP3）的表达变化。结果表明,绵羊子宫不同时期DHT的合成和AR的表达存在差异,妊娠期子宫DHT合成及AR表达显著低于卵泡期和黄体期（P<0.05）。10-10~10-7 mol·L-1DHT处理后,P4合成酶表达显著上调（P<0.05）,在10-8~10-7 mol·L-1 DHT时P4合成显著增加（P<0.05）,在10-10~10-8 mol·L-1 DHT时孕酮受体蛋白表达显著增加（P<0.05）,但10-7mol·L-1 DHT时孕酮受体蛋白表达显著下降（P<0.05）;在10-8~10-7 mol·L-1 DHT时E2相关合成酶显著减少,并且E2水平显著下降（P<0.05）,在10-9和10-7 mol L-1 DHT时E2受体ERα蛋白显著下调（P<0.05）,在10-10~10-7 mol·L-1 DHT时ERβ和GPER显著增加（P<0.05）。经Flu处理后部分解除DHT对P4和E2的调控。此外,10-10~10-7 mol·L-1 DHT显著促进子宫内膜上皮细胞凋亡（P<0.05）。本研究证实DHT至少部分通过AR调节P4和E2合成及受体表达,影响细胞凋亡,参与调节子宫功能,这为进一步阐明雄激素参与调节子宫功能提供了新的基础和相关数据。 相似文献
19.
【目的】研究乙草胺对小鼠卵母细胞体外成熟的影响,为研究体内乙草胺对卵母细胞质量的影响提供参考。【方法】将收集的卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)置于含有不同浓度(0(对照组)、10、50、100、130、200 μmol/L)乙草胺的体外成熟培养液中培养14 h,统计卵母细胞第一极体排出率,进行体外受精后,统计体外受精胚胎的囊胚率,筛选出适宜于卵母细胞体外培养的乙草胺浓度。将COCs在对照组和筛选出的适宜浓度的乙草胺组成熟培养液中培养14 h后,利用DCFH-DA检测卵母细胞活性氧(ROS)水平;利用CellTrackerTM蓝色染料检测卵母细胞谷胱甘肽(GSH)水平;利用JC-1染色法检测卵母细胞线粒体膜电位水平(mitochondrial membrane potential,MMP);利用实时荧光定量PCR检测卵母细胞内凋亡相关基因的表达水平,利用Hoechst 33342染色检测体外受精胚胎的囊胚细胞总数,用Fluorescein-dUTP染色法检测囊胚细胞凋亡率。【结果】与对照组相比,100、130、200 μmol/L乙草胺组卵母细胞的第一极体排出率显著降低(P＜0.05),100和130 μmol/L乙草胺组体外受精胚胎的囊胚率显著降低(P＜0.05),200 μmol/L乙草胺组体外受精胚胎未发育到囊胚期,因此选择100和130 μmol/L乙草胺进行后续试验。与对照组相比,在100和130 μmol/L乙草胺组中,卵母细胞ROS水平显著升高(P＜0.05),GSH水平及MMP显著降低(P＜0.05),卵母细胞中促凋亡基因Caspase-9的相对表达量显著升高(P＜0.05),而抗凋亡基因Bax、Bcl-2的相对表达量显著降低(P＜0.05);100和130 μmol/L乙草胺组囊胚细胞总数显著降低(P＜0.05),囊胚细胞凋亡率显著升高(P＜ 0.05)。【结论】乙草胺通过提高卵母细胞内ROS及促进卵母细胞凋亡降低卵母细胞的质量,从而影响卵母细胞受精后胚胎的发育潜力。 相似文献
20.
旨在探索SIRT1在牦牛卵母细胞体外成熟与老化过程中的作用。本研究在体外成熟液中分别添加SIRT1特异性激动剂SRT2104（SRT组）和特异性抑制剂Inauhzin（INZ组），牦牛卵丘卵母细胞复合体（COCs）体外培养24 h后，观察卵丘细胞的扩展和第一极体的排出情况；利用免疫荧光检测体外培养24与36 h后卵母细胞内的ROS水平；采用实时荧光定量PCR法检测体外培养24与36 h后卵母细胞内SIRT1、FOXO3a、SOD2以及Bax的表达水平；体外培养24与36 h后的牦牛卵母细胞进行体外受精，观察并统计其卵裂率与囊胚形成率。结果显示，体外培养24 h，SRT组的卵丘细胞扩展程度显著高于对照组（P<0.05），而INZ组的卵丘细胞扩展程度和第一极体排出率显著低于对照组（P<0.05）。随着体外培养时间的增加，卵母细胞内的ROS水平显著增加（P<0.05）；添加SRT2104能显著抑制卵母细胞中ROS水平的积累（P<0.05），而添加Inauhzin则显著上调卵母细胞内的ROS水平（P<0.05）。体外培养24 h后，SRT组SIRT1、FOXO3a与SOD2的表达水平显著高于对照组（P < 0.05），但Bax的表达水平显著降低（P<0.05）；INZ组的SIRT1、FOXO3a与SOD2表达均显著低于对照组（P<0.05），但Bax的表达水平显著上调（P<0.05）。牦牛卵母细胞体外培养24 h后，SRT组的卵裂率与囊胚形成率显著高于INZ组和对照组（P<0.05）；卵母细胞体外培养36 h后，INZ组的卵裂率和囊胚形成率显著低于其他组（P<0.05）。综上表明，SIRT1参与了牦牛卵母细胞的体外成熟，在体外培养液中适当添加SIRT1激动剂，有利于卵母细胞体外成熟及缓解老化，同时改善早期胚胎的发育能力。 相似文献