鸡肌肉组织中左氧氟沙星残留ELISA检测方法的研究     

蒋兴东  陈玉飞  涂健  彭开松  王涓  樊磊  祁克宗 《中国兽药杂志》2008,42(5)

用N-羟基琥珀酰亚胺法把左氧氟沙星(LVL)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫抗原,免疫新西兰大白兔得到LVL的多克隆抗体,建立了LVL间接竞争ELISA方法.结果表明:抗LVL血清效价达1: 212以上,得到标准曲线的线性回归方程为y=-0.289 4x+0.049 5(R2=0.987 8),50%抑制浓度(IC50)为64 ng/mL,最低检测限(LOD)为10 ng/mL,标准曲线的线性范围为10～1 000 ng/mL.批内变异系数为3.51%～7.46%,批间变异系数为8.66%～11.89%,鸡肌肉中的LVL添加浓度在10～1 000 ng/ml范围内时,回收率为73.5%～84.36%.本试验建立的ELISA方法能够满足左氧氟沙星兽药残留检测要求.  相似文献   

鸡肌肉组织中左氧氟沙星兽药残留ELISA检测方法的研究     

蒋兴东 《中国兽药杂志》2008,42(5):5-10

用N-羟基琥珀酰亚胺法把左氧氟沙星（LVL）与牛血清白蛋白（BSA）偶联制备免疫抗原,免疫新西兰大白兔得到LVL的多克隆抗体,建立了LVL间接竞争ELISA方法。结果表明：抗LVL血清效价达1∶212以上,得到标准曲线的线性回归方程为y=-0.289 4x＋0.049 5（R2=0.987 8）,50%抑制浓度（IC50）为64 ng/mL,最低检测限（LOD）为10 ng/mL,标准曲线的线性范围为10～1 000 ng/mL。批内变异系数为3.51%～7.46%,批间变异系数为8.66%～11.89%,鸡肌肉中的LVL添加浓度在10～1 000 ng/ml范围内时,回收率为73.5%～84.36%。本试验建立的ELISA方法能够满足左氧氟沙星兽药残留检测要求。  相似文献   

饲料中磺胺二甲嘧啶的检测-ELISA方法     

魏书林  何继红  杨君宏  朱高群 《中国饲料》2007,(14):32-33

本研究以磺胺二甲嘧啶的单克隆抗体为核心试剂建立ELISA检测方法,可检测鸡饲料和猪饲料中的磺胺二甲嘧啶。ELISA方法的标准曲线为:y=-29.448x 74.565,R2=0.9917,IC50=6.8ng/mL,线性范围为0.7～71.3ng/mL,检测限为0.3ng/mL。选择磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L,pH7.4)为提取溶剂,以0.1、1μg/g和10μg/g的浓度添加于空白的鸡和猪配合饲料时,其回收率为73.3～107.3%,变异系数为0.9%～19.2%。  相似文献   

恩诺沙星酶联免疫吸附检测方法(ELISA)的建立及其与HPLC方法的比较研究     

刘春娥  林洪  曹立民  吕朋  刘峰 《中国动物检疫》2009,26(9):44-46

建立了恩诺沙星残留检测的酶联免疫吸附检测方法(ELISA),并对方法的准确度和灵敏度等指标进行了评价,确定方法的最低检出限(LOD)为1ng/mL,线性范围为1ng/mL-1000ng/mL。以虾肉为样本进行的加标实验表明,在5ng/mL-200ng/mL的加标浓度下,孔间变异系数为9.8%-17.4%,批间变异系数为11.9%-23.4%,添加回收率为60.07%-120.8%。对ELISA和高效液相色谱(HPLC)的检测性能进行了比较,并通过水产品、畜禽等市售食品的同步检测进行了验证,结果表明在实验范围内,二种方法之间呈现较好的相关性,R2=0.9896,这表明建立的ELISA检测方法有较高的可信度是比较高的,可以有效地反映药物的残留情况。  相似文献   

恩诺沙星ELISA快速检测方法的建立   总被引：12，自引：0，他引：12  

刘红  曾振灵  杨桂香  陈杖榴 《中国兽药杂志》2006,40(11):13-15

采用活酯法合成酶标记半抗原（ENR-HRP），紫外扫描分析和ELISA方法鉴定，结合比为1．6：1。选择ENR-HRP与游离ENR相竞争的模式建立检测ENR残留的ELISA检测方法，其最佳工作条件为：二抗的包被浓度为2μg／mL，抗体工作浓度1：1000，酶标半抗原工作浓度1：500。标准曲线在0．423～1000ng／mL之间线性关系良好，其IC50为33．76ng／mL，回归方程为Y=-0．07769lnx＋0．770801，相关系数r=0．99153，最低检测限0．423ng／mL。单抗对达氟沙星、培氟沙星、麻保沙星有少许交叉，特异性较好。ELISA检测方法批内平均变异系数为5．75％，批间平均变异系数为10．69％，重复性较好。  相似文献   

猪表皮生长因子间接竞争ELISA检测方法的建立     

张万江  王秀梅  杨桂香 《动物医学进展》2008,29(3):25-28

为建立酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测猪血清或尿液中猪表皮生长因子(porcinee pidermal growth factor,pEGF)的含量,以pEGF为包被原,人表皮生长因子(hu-mane pidermal growth factor,hEGF)为竞争抗原,两者与一定量的抗pEGF多抗反应。结果表明,理想的包被抗原浓度为0.625μg/mL,抗pEGF工作浓度为1∶64000,酶标二抗工作浓度为1∶20000,可检测的最适范围为0.4ng/mL~32ng/mL,最低检测限为1ng/mL,批内和批间变异系数分别为3.50%和5.22%。得到回归方程y=-34.53x 76.06(R2=0.993)和标准曲线,从而建立了快速定量测定pEGF含量的酶联免疫吸附试验方法。  相似文献   

二氟沙星残留检测的Ci-ELISA方法建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

潘孝成  祁克宗  朱良强  赵瑞宏 《中国畜牧兽医》2007,34(10):127-129

以合成的二氟沙星（DIF）人工抗原为基础，制备出了高效价抗DIF血清（1∶29×104），并建立了DIF间接竞争酶联免疫吸附测定法(Ci-ELISA法)。标准曲线的线性回归方程为y=-0.223x+0.9631(r=0.9929)，中值（I50）=119.21 ng/ml，最低检测限（LOD）=1.14 ng/ml，线性范围为1.14~10000 ng/ml，方法的平均批内变异系数（CV）为4.83%,平均批间CV为10.69%。DIF以浓度15~10000 ng/ml在鸡肉中添加时，回收率为81.24%~90.64%，变异系数为8.18%~11.75%。  相似文献   

鸡粪中恩诺沙星和环丙沙星的HPLC检测方法   总被引：3，自引：0，他引：3  

吴俊伟  廖兰  饶勇 《中国畜牧杂志》2007,43(15):60-64

建立并验证了鸡粪中恩诺沙星及其主要代谢产物环丙沙星的HPLC检测方法。鸡粪匀浆后经氨-乙腈-水溶液提取、三氯乙酸溶液沉淀和酸化,样液经Strata-XC浓缩和净化后进行高效液相色谱-荧光检测器分析。方法的回收率CIP为90.5%,ENR为91.1%;批内变异系数CIP为5.5%,ENR为5.7%;批间变异系数CIP为7.4%,ENR为9.6%;CIP和ENR的最低检测限(LOD)<0.02mg/kg,最低定量限(LOQ)<0.10mg/kg。应用所建立的方法对鸡口服恩诺沙星溶液后鸡粪中的ENR和CIP的含量进行了检测。  相似文献   

孔雀石绿间接竞争ELISA检测方法的建立     

王权  郭德华  李健  蒋蔚  赵新宇 《畜牧与兽医》2010,42(2)

采用无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)单克隆抗体建立了水产品中孔雀石绿(Malachite green,MG)残留的间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法。结果表明,LMG-McAb最佳稀释倍数为1∶80 000,包被抗原最佳质量浓度为0.80μg/mL;竞争反应时的LMG理想稀释液为40%乙腈水溶液;标准曲线呈线性相关,相关系数R2=0.9823,最适检测范围1 ng/mL~256 ng/mL,最低检测限为1.29 ng/mL,批内和批间变异系数分别为4.307%和4.566%;鳗鱼肉样的平均添加回收率为90%~110%;该检测方法与隐性结晶紫、孔雀石绿、结晶紫的交叉反应(CR%)分别为40.67%、13.50%和5.89%,与其他抗生素无交叉反应。  相似文献   

抗大田软海绵酸单克隆抗体的制备与间接竞争ELISA的建立     

王权  闫叶娜  黄克和 《畜牧与兽医》2010,42(8)

用大田软海绵酸(okadaic acid,OA)与牛血清白蛋白(BSA)的偶联物OA-BSA作为免疫原,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备OA单克隆抗体,并以纯化的抗体为探针建立了检测OA的快速、灵敏、简便的间接竞争ELISA(ciELISA)。回归方程和相关系数分别为:y=-0.3949x+0.6312,R2=0.9806;线性范围为0.3125~20 ng/mL;对OA的最低检出质量浓度为0.175 ng/mL;批内和批间变异系数分别为2.09%和3.27%;扇贝肉样的添加回收率为74.2%~80.8%;与鳍藻毒素(DTX1)的交叉反应(CR%)为51.82%,与石房蛤毒素(STX)无交叉反应。结果表明,建立了OA间接竞争ELISA检测方法,可用于海产品中OA残留检测。  相似文献   

恩诺沙星免疫抗原的制备与鉴定     

宓晓黎  李利东  黄丽俊  杜姝莲  袁建兴 《中国动物检疫》2010,27(6):43-45

通过N-羟基琥珀酰亚胺活化酯法合成恩诺沙星免疫抗原,用聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外光谱和酶联免疫法分析对恩诺沙星免疫抗原的结构、分子量、免疫原性等特征进行鉴定。经紫外光谱分析恩诺沙星-牛血清白蛋白偶联比为5:1,紫外光谱峰形发生变化并位移。间接酶联免疫法分析证明其免疫兔所获得的抗体与恩诺沙星有良好的特异性,半数抑制浓度为60ng/mL。实验结果表明成功合成了恩诺沙星免疫抗原,并获得了抗恩诺沙星抗体,为ELI SA或TRFI A等免疫方法的进一步研究提供了试验基础。  相似文献   

动物源性食品中齐帕特罗一步法ELISA试剂盒的研制     

董李学  葛怀礼  郑百芹  李爱军  张建民  蒙君丽  苗建民  李亮 《中国畜牧兽医》2013,40(3):242-246

本研究依据直接竞争ELISA原理建立了齐帕特罗一步法ELISA试剂盒。以齐帕特罗与载体蛋白偶联物作为免疫原免疫新西兰大白兔制得齐帕特罗多克隆抗体,棋盘包被法确定其最佳抗体包被浓度、酶标抗原工作浓度、包被条件、反应时间、底物显色时间等,并对试剂盒的各项技术指标进行确认。结果表明,成功组装了齐帕特罗一步法ELISA试剂盒,并建立了尿液、饲料、奶粉和奶汁,以及组织等样品的前处理方法,检测限均远低于1 μg/kg。该试剂盒线性检测范围为0.15～10 ng/mL,IC₅₀浮动范围0.43～0.79 ng/mL,样品板内、批内、批间的变异系数均小于15%,平均回收率在70%～110%之间,与其同类药物的交叉反应率均小于0.1%。提示,本试验研制的试剂盒重复性、特异性、稳定性等各项指标均符合技术要求,可用于动物源性食品中齐帕特罗药物残留的检测。  相似文献   

氟喹诺酮类药物多残留间接竞争ELISA检测方法的建立   总被引：3，自引：0，他引：3  

姜金庆  杨雪峰  王自良  常新耀  王三虎  刘兴友 《中国预防兽医学报》2011,33(11)

为建立同时检测多种氟喹诺酮药物的免疫学分析方法,本研究以碳二亚胺(EDC)二步法合成环丙沙星人工抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立氟喹诺酮类药物多残留检测方法.标准曲线在PBS中的线性检测范围为0.2 ng/mL～376 ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为8 ng/mL,检测限(LOD)为0.1 ng/mL;抗体对恩诺沙星、诺氟沙星和培氟沙星均能特异性识别,IC50值分别为7.3 ng/mL、10.6 ng/mL、和13.2 ng/mL;标准品稀释液中NaOH和甲醇的最高容忍度分别为10％和30％;牛奶基质中添加5 ng/mL、20 ng/mL和50 ng/mL的标准品,环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星和培氟沙星的回收率分别为93％～108％、96％～110％、92.5％～104％和93％～102％.  相似文献   

恩诺沙星完全抗原的合成及兔源多抗血清的制备     

刘莉  张家禾  袁维峰  孟婷 《中国畜牧兽医》2014,41(6):38-41

为了合成恩诺沙星（enrofloxacin,EFLX）完全抗原,制备兔源多克隆抗体血清,试验通过活化酯法将小分子的EFLX偶联到牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白(OVA)上,形成偶联物EFLX-BSA和EFLX-OVA,以EFLX-BSA为免疫原免疫兔,以EFLX-OVA为检测原通过ELISA方法检测兔血清效价。结果表明,免疫兔血清效价都在1∶51200以上,其中2号兔效价最高,达到1∶204800,敏感性好,半数抑制浓度IC₅₀为169.91 ng/mL,检测范围为37.52～302.31 ng/mL。本试验成功制备了EFLX完全抗原,获得了敏感的兔源多克隆抗体血清,为以后ELISA试剂盒和胶体金试纸条的研发奠定了基础。  相似文献   

苯乙醇胺A单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立   总被引：1，自引：1，他引：0  

项自来  王玲  夏苏干  邹辉  顾建红  袁燕  刘学忠  刘宗平  卞建春 《中国畜牧兽医》2019,46(3):849-857

为制备苯乙醇胺A(phenylethanolamine A,PA)单克隆抗体,建立一种针对苯乙醇胺A的快速、简便、灵敏度高的检测方法,本试验采用重氮化法将制备的苯乙醇胺A衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联作为免疫原和包被原。利用弗氏佐剂充分乳化免疫原(PA-BSA),按常规免疫程序免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠,选择血清抗体效价较高的小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞以PEG法进行细胞融合。结果显示,经3次细胞亚克隆筛选后,最终筛选出一株可稳定分泌抗苯乙醇胺A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为D6H8,利用此细胞以小鼠体内诱生法制备抗体。经鉴定,D6H8腹水抗体亚型为IgG1,轻链为κ链;纯化后的抗体与沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、盐酸异丙肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素均无明显的交叉反应(CR<0.18%),表明该抗体特异性良好。利用此抗体建立针对苯乙醇胺A药物残留检测的间接竞争ELISA方法,结果表明,腹水抗体效价为1∶12 800,猪肉中苯乙醇胺A添加浓度在5～1 000 ng/mL时线性关系良好,标准工作曲线为y=0.3861x-0.1845 (R^2=0.990),其IC₅₀为58.88 ng/mL,LOD为3.83 ng/mL,回收率在85.96%～104.32%之间。综上所述,本试验成功建立了检测苯乙醇胺A药物残留的间接竞争ELISA方法,该方法灵敏度高、稳定性较好。  相似文献   

建立水产品中己烯雌酚残留ELISA检测方法     

赵新宇  王权  闫叶娜 《中国畜牧兽医》2010,37(10):43-47

本试验利用己烯雌酚(DES)单克隆抗体,通过优化反应条件,加标回收试验,确定ELISA检测方法相关参数,建立了己烯雌酚残留的酶联免疫吸附(ELISA)检测法。试验结果显示,包被抗原最佳浓度为2μg/mL,DES单克隆抗体最佳稀释倍数为1∶3×104;标准曲线呈线性相关,相关系数R2=0.9956,IC50=1.103 ng/mL,最适检测范围为0.125~128 ng/mL,检测敏感度为0.077 ng/g;批内和批间变异分别为6.14%和7.48%;鳝鱼肌肉组织的加标回收率为77.6%~94.6%;特异性试验结果表明,该单抗与己烯雌酚单羧丙基醚交叉反应率为112.7%,与其它水产禁用药物交叉反应率0.1%。  相似文献   

沙丁胺醇残留的酶联免疫检测方法的建立   总被引：6，自引：0，他引：6  

孙海新  凌红丽  王雷  王宏华  赵玉惠  董瑞娥 《中国动物检疫》2009,26(12):44-47

用自主制备的沙丁胺醇特异性抗体建立了针对沙丁胺醇残留的间接竞争酶联免疫检测方法,对该检测体系的灵敏度、准确度、精密度、特异性等性能进行了测定,并与高效液相色谱方法进行了对比性分析。结果显示:沙丁胺醇药物残留的间接竞争酶联免疫检测体系的检测范围为1～80ng/mL,灵敏度为0.58ng/mL,检测限为1ng/mL,回收率为70～99%,与盐酸克仑特罗、硫酸特布他林交叉反应率分别为107%、10%,与盐酸莱克多巴胺及肾上腺素的交叉反应率小于0.01%;采用HPLC方法进行沙丁胺醇药物残留的检测时,其检测范围为10μg/mL～200μg/mL,检测限为1μg/mL,回收率为80～95%。该方法与高效液相色谱法相比灵敏度较高,特异性强,检测结果准确度相近,但是在检测结果稳定性方面逊与HPLC方法。  相似文献   

HPLC-MS/MS法研究恩诺沙星在鸡蛋中残留消除规律     

侯轩  周炜  陈勇  张航俊  郭炫君  张晓丽  周芷锦 《畜牧与饲料科学》2020,41(5):46-51

建立了高效液相色谱—串联质谱法（HPLC-MS/MS）检测鸡蛋中恩诺沙星、环丙沙星残留的方法。鸡蛋样品经1%乙酸乙腈提取、正己烷除脂, 用HPLC-MS/MS进行检测。恩诺沙星、环丙沙星在0.5~500 ng/mL浓度时线性关系良好（r≥0.999）;恩诺沙星回收率为87.7%~99.1%、环丙沙星的回收率为89.1%~101.4%, 检测限为0.5 μg/kg, 定量限为1.0 μg/kg。应用该方法初步研究了恩诺沙星及其代谢物环丙沙星在鸡蛋中的残留消除规律。结果表明, 给药后鸡蛋中恩诺沙星及其代谢物蓄积迅速, 停药8 d后痕量恩诺沙星代谢缓慢, 25 d后恩诺沙星代谢完全。  相似文献   

Establishment of ELISA Detection Method for Neomycin in Import and Export Animal     

SUN Ming-jun  QIU Fang  ZHANG Jin-ling  ZHENG Xiao-long 《中国畜牧兽医》2016,43(12):3163-3169

This experiment used carbodiimide get egg albumin synthesis of artificial antigens coupling neomycin,through square test to determine the best antigen packaged concentration and antibody dilution ratio,mass concentration logarithm of neomycin as abscissa,inhibition rate of antibody as the ordinate drawing standard curve,established ELISA fast detection techniques of neomycin in edible animal for import and export.Methods of recovery and specific test had been done in further research.Results showed that the test dilution ratio of optimum synthetic antigen was 1:200,the best dilution multiple of antibodies was 1:2 000, half inhibitory concentration(IC₅₀) was 6.99 ng/mL;The minimum detection limit of the method was 40 ng/mL,and cross reaction rate of gentamicin, kanamycin, streptomycin,tobramycin,amikacin and dihydrostreptomycin were less than 0.1%,the average of recovery rate was 83.77%.The range of standarding curve in 1.5~40 ng/mL was linear,the correlation coefficient was 0.987,the equation of standarding curve was y=-37.66x+94.592;Compared with HPLC method,the operation was simple and fast.The test results showed that the enzyme-linked immunosorbent method of detecting neomycin was rapid,efficient and specific.  相似文献