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[目的]探讨适于SSR分析的大豆干种子DNA提取的最佳方法。[方法]以2个大豆品种的干种子为材料,分别采用改良SDS法和CTAB法提取大豆基因组DNA,用1％琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量,用紫外分光光度计分别测定其DNA在A230、A260和A280下的吸光值,根据A260／A230和A260／A280的比值检测DNA的纯度和浓度,并分别以两种DNA为模版进行SSR—PCR扩增。[结果]相同DNA提取条件下,SDS法提取DNA样品的纯度和浓度均高于CTAB法,SDS终浓度为2％（W／V）,水浴15min,氯仿／异戊醇抽提2次时所提取大豆种子DNA的纯度及浓度最高,其DNA的0D260／0D280值为1．86,SDS法所提的DNA泳带分布较集中,无拖尾现象,其DNA浓度能够满足SSR扩增模板的需求。[结论]SDS浓度为2％（W／V）,水浴15min,氯仿／异戊醇抽提2次时提取大豆干种子DNA的浓度和纯度都较高,可以满足后续的各种分子生物学操作的要求。 相似文献
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快速提取玉米DNA方法的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
[目的]为了探索一种快速、简便,能够用于SSR分析的玉米DNA提取法。[方法]采用改进的常规DNA提取法和DNA快速提取法提取玉米种子胚和黄化苗叶片中的DNA,进行SSR分析,通过琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳对SSR产物进行检测。[结果]用常规法提取时,用氯仿∶异戊醇(24∶1)抽提1次就可获得质量好和浓度高的DNA;无须抽提,直接吸取上清液,可得到高浓度的DNA,也能满足SSR分析的需要;同样的提取法,SDS的提取效果比CTAB好。对快速提取法进行分析表明,相同的提取液和提取方法,采用种子胚提取的DNA浓度和质量明显高于叶片DNA。[结论]该研究为SSR在玉米种质及纯度鉴定上的应用提供了技术上的保证,有利于该项技术的普及和推广。 相似文献
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小麦DNA提取方法的比较 总被引：1，自引：0，他引：1
目的 用4种方法 对小麦DNA进行提取,从中选取最好的方法 ,满足小麦材料进行分子标记的检测.方法 以小麦幼叶为材料,采用CTAB法1、CTAB法2、CTAB法3和NaOH法,提取小麦基因组DNA.结果 NaOH法提取DNA用时短,方法 简单,但常有DNA样品扩增不出PCR产物的情况;CTAB法提取的DNA质量较高,而且CTAB法3在省略了65℃温浴并将两次氯仿∶异戊醇抽提改为一次抽提,缩短了试验时间,降低了试验成本,提取的DNA可以满足实验需要.结论 试验表明,用CTAB法3提取小麦DNA,既缩短了时间又满足进行分子标记检测的需要. 相似文献
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玉米干种子基因组DNA提取方法的改进 总被引：2，自引：0，他引：2
《山西农业科学》2017,(12):1903-1906
为了实现玉米干种子基因组DNA快速提取,针对玉米干种子淀粉含量高的特点,对传统核酸CTAB提取方法进行了优化与改良,将提取的DNA进行分光光度计及琼脂糖凝胶电泳检测。结果显示,DNA的OD_(260)/OD280值为1.79~1.95,OD_(260)/OD230值为1.90~2.15;琼脂糖凝胶电泳图谱清晰,条带无拖尾现象,说明采用改良方法提取的DNA质量高、无降解。以改良方法提取的DNA样品作为模板进行分子标记检测试验,结果清晰稳定,进一步证明采用改良CTAB法直接从玉米干种子中提取的DNA可以满足SSR和SNP等分子试验的要求。 相似文献
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作物种子DNA的提取及分子标记分析 总被引：1，自引：0，他引：1
为寻找适用于分子标记快速检测作物种子DNA的方法.本研究采用改良CTAB法、SDS法和碱提法分别提取4种农作物(玉米、水稻、大豆和高粱)种子DNA,用于RAPD、SSR标记检测.结果表明CTAB法较SDS法更适合于提取玉米胚和高粱种子DNA用于RAPD检测;碱提法提取大豆和水稻种子DNA纯化后,用于RAPD检测得到清晰扩增条带.三种DNA提取方法对作物种子提取的DNA均适用于SSR标记检测.根据分子标记方法选择不同DNA的提取方法提取作物种子DNA,才能快速获得准确有效的分子标记检测结果. 相似文献
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野生玫瑰基因组DNA提取及CDDP引物筛选 总被引：1，自引：1，他引：0
《山东农业科学》2016,(11)
野生玫瑰中多糖多酚含量较高,DNA提取较为困难,本试验在植物基因组DNA CTAB提取法的基础上,通过延长水浴时间、调整氯仿-异戊醇(24∶1)抽提次数为2~3次等一系列方法提高野生玫瑰基因组DNA的提取纯度。以2×Es Taq Master Mix(含染料)10μL,40 ng/μL DNA模板1μL,10 pmol/μL引物1μL,dd H2O 8μL为CDDP-PCR反应体系,对21条CDDP引物进行多态性筛选。结果表明,用改良的CTAB法提取的野生玫瑰基因组DNA纯度较高;21条CDDP引物中有16条对野生玫瑰品种的鉴别能力较高。本研究为野生玫瑰CDDP分子标记及后续各种分子生物学研究奠定基础。 相似文献
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羊肺炎支原体基因组DNA几种提取方法的比较 总被引：1，自引：0，他引：1
为了筛选支原体基因组DNA最优提取方法以便用于支原体的检测和分子鉴定,本试验采用两种试剂盒、CTAB法、高盐法、酚/氯仿/异戊醇法和煮菌法对3批两种支原体液体培养物进行总DNA提取,通过检测基因组DNA纯度和PCR产物比较其提取效果。结果显示:6种方法提取的支原体基因组DNA均能用于PCR。进口试剂盒和CTAB法获得的DNA纯度最高,酚/氯仿/异戊醇法、高盐法和国产试剂盒次之,煮菌法省时但质量较差,酚/氯仿/异戊醇法较慢。CTAB法和高盐法可快速获得优质的基因组DNA,可作为提取支原体基因组DNA的首选方法。 相似文献
10.
山桐子富含大量初生与次生代谢产物,常规方法提取高质量DNA比较困难。该文以CTAB法为框架,裂解前进行PEG洗脱,并优化与简化后续CTAB法操作步骤,形成适宜山桐子高质量DNA提取的改良CTAB法。在此基础上,该文以山桐子幼叶为材料,比较SDS法、CTAB法、试剂盒法、改良CTAB法提取山桐子DNA效果。结果显示,改良CTAB法提取的山桐子DNA浓度高、纯度高,DNA浓度可高达417.5~470.5 ng·μL-1,平均为438.93 ng·μL-1,为试剂盒法的8.5倍;所提各样本DNA蛋白质污染、DNA糖类与盐污染得到较好的控制,DNA完整,DNA质量显著优于其他方法。通过本文改良CTAB法,提取的山桐子DNA可以满足简单重复序列(SSR)标记分型、简化基因组测序等相关分子试验所需,为山桐子分子生物学的开展提供了基础。 相似文献