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1.
用ＥｃｏＲＩ酶切ＰＲ５Ｂ４质粒，采用“Ｖ”字形内槽电洗脱法回收约０．８０４Ｋｂ牛冠状病毒基因工程抗体４Ｈ１２／１Ｄ４单链基因片段，并将其插入载体质粒ＰＥＴ－１７ｂ的ＥｃｏＲＩ位点构成重组质粒ＰＥＴ－Ｄ４，将重组质粒转化ＤＨ５α感受态细胞，在ＩＰＴＧ的诱导下表达，细菌裂解物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳筛选，发现含ＰＥＴ－Ｄ４细菌经诱导新增一条约２８ＫＤα蛋白带，该蛋白带与设计基因工程抗体的大小相符，经光密度扫描，表达量约占菌体总蛋白的１４％ 相似文献
2.
人雄激素受体LBD基因融合表达产物的分离制备 总被引：1，自引：1，他引：1
利用硫氧还蛋白事例表达系统,将编码人雄激素受体（ｈＡＲ）激素结合区（ＬＢＤ）的基因（编码ｈＡＢ５８４－９１８氨基酸）插入质粒ｐＴｒｘ Ｆｕｓ中ｔｒｘＡ基因的３′端,重组后的质粒ｐＴｒｘＡＲ导入Ｅ．ｃｏｌｉ ＧＩ７２４中,经Ｔｒｐ诱导,该转化的菌株表达一融合蛋白。通过制备包含体,再利用制备型ＳＤＳ－ＰＡＧＥ或Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００柱层析都可较好地纯化分离该融合表达产物（达到ＳＯＳ电泳单点纯）, 相似文献
3.
采用固相亚磷酸三酯法人工化学合成了人胰岛素样生长因子－Ⅰ（ｈｕＩＧＦ－Ｉ）基因的４条寡核苷酸 片段，再通过片段１、２与３、４末端互补配对和Ｋｌｅｎｏｗ酶促补平及酶切连接成为完整的ｈｕＩＧＦ－ＩＤＮＡ片段，用 ＥｃｏＲ Ｉ／ＰｓｔＩ酶切后克隆于 ｐＧＥＭ Ｔ－Ｅａｓｙ Ｖｅｃｔｏｒ，经测序证明所得 ＤＮＡ序列与设计的序列完全一致；选用植物 偏爱密码子校正了启始密码子ＡＴＧ下游的６个密码子，并在ＡＴＧ处增加Ｋｏｚａｋ序列后，插入ｐＢＩ１２１的ＢａｍＨＩ／ ＳａｃＩ位点，构建了以 ３５Ｓ为启动子的植物表达载体；以 Ｈｉｎｄ ＩＩ／ＥｃｏＲＩ切下“３５Ｓ－Ｋｏｚａｋ－ＩＧＦ－Ｉ－ＮＯＳ（ｔｅｒ．）”插入 ｐＣＡＭＢＩＡ２３００之Ｈｉｎｄ ＩＩ／ＥｃｏＲ Ｉ位点，构建成ｈｕＩＧＦ－Ｉ植物表达载体；通过ＣａＣｌ２直接转化法将表达载体导入农 杆菌ＥＨＡ１０５（Ｒｉｆ．ｒ），并以菌落原位杂交技术和 ＤＮＡ ｄｏｔ ｂｌｏｔ对重组农杆菌进行了筛选，所获得的重组农杆菌菌株为培育ｈｕＩＧＦ－Ｉ豆药用植物奠定了基础。 相似文献
4.
本文报道采用反转录酶—聚合酶链式反应，体外扩增芜菁花叶病毒（ＴｕＭＶ）外壳蛋白基因及其克隆，并在大肠杆菌中获得表达的结果；从抗州市郊区感病的油菜上分离到一株致病力极强的芜菁花叶病毒分离物，提纯后，经５０ｎｇ／ｍＬ蛋白酶Ｋ和０．５％ＳＤＳ处理，苯酚／氯仿和氯仿抽提两次，酒精沉淀，获得了纯化的病毒ＲＮＡ，该ＲＮＡ与ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）＿（１５）退火后，在ＡＭＶ反转录酶的作用下合成了单链ｃＤＮＡ，然后加入用以扩增ＴｕＭＶ－ＣＰ基因的上下游引物，３５个循环后，得到了一条长约０．８５ｋｂ的片段，将该片段克隆到ｐＵＣ１８质粒的ＳａｌⅠ限制性酶切位点，分析了限制性酶切图谱，分析表明该片段含有ＥｃｏＲⅠ和ＸｂａⅠ以及引物设计时带人的ＭｃｏⅠ三个酶切位点，该片段克隆到大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）原核表达载体ｐＫＫ２３３－２质粒的ＮｃｏⅠ和ＨｉｎｄⅡ位点后，经ＩＰＴＧ诱导，以该病毒的抗血清为第一抗体，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测该基因的表达产物，结果表明该基因的表达产物为ＴｕＭＶ－ＣＰ蛋白，因而认为所获得的扩增片段确为芜菁花叶病毒外壳蛋白基因。 相似文献
5.
选用ＦＰＶ２８２Ｅ４株ＢａｍＨＩ７．３ｋｂ含非必需区片段，经ＸｂａⅠ酶切，将Ａ、Ｂ、Ｃ３个片段亚克隆于ＫＳ（—）质粒中，同时使Ｄ片段自身环化，获得ＫＳＦａ、ＫＳＦｂ、ＫＳＦｃ、ｐＵＣＦｄ４个重组克隆，经酶切鉴定证明亚克隆正确。为以ＦＰＶ基团组非必需区的ＢａｍＨＩ７．３ｋｂ片段中ＢｇｌⅡ片段所在区域构建重组载体质粒和体内重组表达外源基因的研究以及非必需区的核苷酸序列分析奠定基础 相似文献
6.
旋毛虫肌幼虫ES抗原基因TSPGⅡ在真核细胞中的表达 总被引：2，自引：0，他引：2
用限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ从克隆载体ｐＵＴＳⅡ中工出一个０．９８８ｋｂＴＳＰＧⅡ基因,经ＥｃｏＲⅠ和ＢｓｔＸⅠ酶切鉴定;表达载体用相同的酶切,经琼脂糖凝胶电泳,分别回收ＴＳＰＧⅡ基因和ＰＳＶ．ＳＰＯＲＴⅠ表达载体,用Ｔ４ＤＮＡ连接酶定向接连,转化大肠杆菌感受态细胞,挑取重组,经ＥｃｏＲⅠ,ＢｓｔＸⅠ和ＨｉｎｄⅢ酶切鉴定,构建了重组表达质粒ＰＳＶ．ＴＳⅡ。利用脂质体作载体,将重且表达质粒转 相似文献
7.
以戊二醛法制备ＢｕｒｓｉｎＫＬＨ，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞，以ＰＥＧ为融合剂，与ＳＰ２融合，用间接ＥＬＩＳＡ法筛选出与Ｂｕｒｓｉｎ－ＢＳＡ结合、不与ＢＳＡ结合的２Ｆ９－４克隆株，经鉴定，抗体属性为ＩｇＭ，Ｋ轻链。水溶性Ｂｕｒｓｉｎ可阻抑２Ｆ９－４对鸡法氏囊的反应，切片标本经ＰＢＳ处理，反应性消失，免疫组织化学染色于法氏囊上获得特征性阳性结果。 相似文献
8.
利用低融点琼脂糖凝胶电泳，回收牛生长激素ｃＤＮＡ全序列，克隆于原核表达载体ＰＴ７７－７中Ｔ７启动子下游，转化大肠杆菌Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α，经分离，酶切分析，获得６个牛生长有质粒ＰＴＧＨ１－６，选取其中两质粒ＰＴＧＨ１１－２，转化Ｅ．ｃｏｌｉＫ８３＝ｐＧ１－２，４２℃诱导３０ｍｉｎ，收集，破裂菌体，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳检测，于２２ＫＤ处有一特异性蛋白带，经ＳｈａｍａｄｚｕＣＳ９３０扫描测定，其表达量 相似文献
9.
烟叶超氧物歧化酶的研究 总被引：7，自引：0，他引：7
从烟叶中提取的超氧物歧化酶（ＳＯＤ），经ＰＡＧＥ垂直板电泳后，用氮蓝四唑（ＮＢＴ）法活性染色，并经凝胶薄层扫描（λ＝５９５ｎｍ），结果显示粗酶液有６条同工酶谱带，经纯化后的酶只有一条谱带。此纯酶液置冰箱３６ｈ后，可获得长方形结晶。结晶酶液用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析（１．５ｃｍ×１００ｃｍ）和ＳＤＳ－和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得其分子量分别为２４８３０和２８９００。用等电聚焦电泳测得该酶等电点为６．８０。该酶在ｐＨ５～９范围内活性较稳定，在７５℃保温１５ｍｉｎ活性尚保留５４％。此酶对ＫＣＮ、氯仿－乙醇不敏感，但受到ＥＤＴＡ，Ｈ_２Ｏ_２的强烈抑制，表明烟叶中分离纯化得到的ＳＯＤ为酶分子中结合Ｆｅ的Ｆｅ－ＳＯＤ。 相似文献
10.
用限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ,从克隆载体ｐＵＴＳⅡ中切出一个０．９８８ｋｂＴＳＰＧⅡ基因,经ＥｃｏＲＩ和ＢｓｔＸＩ酶切鉴定,同时表达载体也用相同的酶进行酶切,经琼脂糖凝胶电泳,分别回收ＴＳＰＧⅡ基因和ｐＳＶ·ＳＰＯＲＴⅠ表达载体,用Ｔ４ＤＮＡ连接酶定向连接,转化大肠杆菌感受态细胞,挑取重组子,经ＥｃｏＲⅠ,ＢｓｔＸⅠ和ＨｉｎｄⅢ酶切鉴定,构建了重组表达质粒ｐＳＶ·ＴＳⅡ． 相似文献
11.
中药复方添加剂对ＡＡ仔鸡增重影响ＴＨＥＡＦＦＥＣＴＣＨＩＮＥＳＥＭＥＤＩＣＩＮＥＣＯＭＰＯＵＮＤＡＤＤＩＴＩＶＥＳＯＮＡＡＣＨＩＣＫＥＮＳＷＥＩＧＨＴＡＵＧＭＥＮＴ范天舒，郭贵强，杨贵军（哈尔滨市动力区农业局）（东北农业大学兽医系）从２０几个处方中筛... 相似文献
12.
经反应红１２０亲和层析纯化的小麦胆色素原脱氨酶（Ｐｏｒｐｈｏｂｉｌｉｎｏｇｅｎ ｄｅａｍｉｎａｓｅ,ＰＢＧＤ,ＥＣ．４,３,１,８）,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＩＥＦ－ＰＡＧＥ上均显示一条带,表明已ＰＢＧＤ纯化至均一,它的亚基分子量３６ＫＤ,ｐＩ为４．８。酶活性染色呈一条带,表明无同工酶存在。ＰＡＧＥ显示两条带,证明小麦幼苗中存在酶与底物结合的中间物。脲梯度电泳呈现之字形,在４ｍｏｌ／Ｌ的脲浓度下可使酶 相似文献
13.
甜瓜抗CMV转基因植株的分子生物学研究 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究建立了转目的基因植物基因整台及表达的分子生物学鉴定系统，并用报告基因检测、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ、ＰＣＲ特异扩增、Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ等方法，研究了用叶盘法经Ｔｉ质粒转化的甜瓜再生植株ＣＭＶ－ＣＰ基因的整合与表达。结果表明：再生植株基因组中整合了ＣＭＶ－ＣＰ基因，长度为１ｋｂ，并能有效表达。表达产物分子量为２４Ｋｄ，确为ＣＭＶ的外壳蛋白，其表达量占细胞总蛋白约５％。 相似文献
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一种更适合培养的番茄叶肉原生质体杨华杰吴定华（华南农业大学园艺系，广州，５１０６４２）ＡＫＩＮＤＯＦＭＯＲＥＳＵＩＴＡＢＬＥＭＥＳＯＰＨＹＬＬＰＲＯＴＯＰＬＡＳＴＦＯＲＣＵＬＴＵＲＩＮＧＯＦＴＯＭＡＴＯＳＰＥＣＩＥＳＹａｎｇＨｕａｊｉｅＷｕＤｉｎｇｈ... 相似文献
15.
鲁植雄 《南京农业大学学报》1996,19(4):124-126
乌米干燥参数的优化校青年基金资助项目收稿日期：１９９５１２０５鲁植雄（南京农业大学农业工程学院，南京２１００３２）ＯＮＤＲＹＩＮＧＰＡＲＡＭＥＴＥＲＳＯＦＢＬＡＣＫＧＬＵＴＩＮＯＵＳＲＩＣＥＬｕＺｈｉｘｉｏｎｇ（ＡｇｒｉｃＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＣ... 相似文献
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通过根癌农杆菌介导法获得新疆甜瓜抗病优质新品系 总被引：2，自引：0，他引：2
用新疆甜瓜无菌苗子叶块,通过根癌农杆菌介导法,将黄瓜花叶病毒外壳蛋白ｃＤＮＡ基因导入“新红心脆”等６个品种（系）,经卡那霉素筛选,获得大量Ｋｍ抗性植株,其中部分Ｋｍ抗性植株经Ｌｕｉｓ法检测,表达了胭脂碱合成酶活性。进一步经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,ＤＯＴ－Ｅｌｉｓａ,ＰＣＲ特异扩增。Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ等方法检测,结果证明了Ｋｍ抗性植株基因组中整合了ＣＭＶ－ＣＰ基因,长度为１ｋｂ,并能有效表达,表达产 相似文献
17.
本文作者构建了ｐＸＭ１和ｐＧＣＹ６两个质粒，其中质粒ｐＸＭ，含有高赖氨酸基因和ＧＵＳ报告基因，质粒ｐＧＣＹ６则由裂解多肽Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ｂ基因和ＧＵＳ基因组成。这两个基因均以ＣａＭＶ３５Ｓ作为启动子，以ＮＯＳ作为终止子。经纯化的质粒ＤＮＡ以ＰＥＧ法导入４个水稻品种：８９－２、Ｌａｃｃａｓｉｎ、Ｃｙｐｒｅｓｓ、台北３０９细胞悬浮系的原生质休中，组织化学检测结果表明，ＧＵＳ基因在原生质体、愈伤组织及 相似文献
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不同基因型甘蔗磷素吸收动力学特征研究初报 总被引：8，自引：0，他引：8
万美亮 《华南农业大学学报》1998,19(2):125-126
不同基因型甘蔗磷素吸收动力学特征研究初报万美亮邝炎华（华南农业大学生物技术学院,广州,５１０６４２）ＰＲＥＬＩＭＩＮＡＲＹＳＴＵＤＩＥＳＯＮＴＨＥＫＩＮＥＴＩＣＳＯＦＰＨＯＳＰＨＯＲＵＳＵＰＴＡＫＥＢＹＳＵＧＡＲＣＡＮＥＯＦＤＩＦＦＥＲＥＮＴＧＥＮ... 相似文献
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应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对畜型和禽型两个融合基因ＨＢｓＡｇ／ＬＨＲＨ的５′端分别作了改造，切去了融合基因起始密码ＡＴＧ前一段非编码序列６１个碱基，将改造后的融合基因插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｅ１１ＫＳ＋质粒中。琼脂糖凝胶电泳以及序列分析均表明改造和克隆成功。将改造后的融合基因克隆到含Ｔ７Ｐｒｏｍｏｔｅｒ强启动子的表达载体ｐＥＴ１５ｂ中，经异丙基硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导，在Ｅ．ｃｏｌｉＤＥ３中表达，表达量占菌体总蛋白的１０％，以兔抗ＬＨＲＨ抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测，出现阳性反应带。用抗ＨＢｓＡｇ抗体作ＥＬＩＳＡ检测，结果稀释１×１０－６时仍为阳性反应。 相似文献
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ＩＢＤＶ对ＳＰＦ鸡的致病性研究朱瑞良，张绍学，唐珂心，牛钟相，孙蕙兰，柴家前，常卫山，徐海花（牧医系）关键词：ＳＰＦ鸡，人工接种，ＩＢＤＶＰＡＴＨＯＧＥＮＩＣＩＴＹＯＦＩＢＤＶＴＯＳＰＦＣＨＩＣＫＥＮ￥ＺｈｕＲｕｉｌｉａｎｇ；ＺｈａｎｇＳｈａｏｘｕｅ... 相似文献