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1.
通过葡聚糖 Sephadex G-50凝胶过滤和反相高压液相层析等手段,对无指盘臭蛙皮肤分泌液进行分离纯化,得到了高纯度的多肽分离峰.分别采用体外培养的大鼠胰岛和INS-1胰岛β细胞系检测分离峰的促胰岛素释放活性.结果表明,所得多肽既可促进原代培养的大鼠胰岛分泌胰岛素,又可以促进INS-1细胞胰岛素释放;运用飞行质谱仪测定该促胰岛素释放肽的相对分子质量,其大小为1 868.此外,利用鸡胚尿囊绒毛膜(CAM)体内模型检测,发现该多肽还具有显著的抑制血管生成活性. 相似文献
2.
为了研究三氯化铬与大鼠胰岛细胞共培养对胰岛细胞活性与胰岛素分泌水平的影响,并对其影响机制进行探讨,以台盼蓝染色法和MTT法检测胰岛β细胞活性,以不同浓度葡萄糖刺激胰岛素释放评价三氯化铬对胰岛细胞功能的影响,同时以RT-PCR检测胰岛细胞的抗凋亡基因bcl-2的表达。结果发现,随培养液中三氯化铬浓度的增加,胰岛活性随之增加,凋亡率降低,但2.0μmol/L的活性有所降低,凋亡率与对照组没有显著差异(P>0.05)。低糖和高糖浓度环境中试验组与对照组的胰岛素分泌没有显著差异(P<0.05),RT-PCR发现试验组的bcl-2表达显著高于对照组(P<0.05)。2.0μmol/L CrCl3明显降低胰岛细胞的凋亡率,提高其存活率,改善胰岛功能。 相似文献
3.
目的观察口服和静脉注射重组hGLP-1类似物对糖尿病大鼠血糖、胰岛素及胰岛组织病变的影响。方法用链脲佐菌素（STZ）建立SD大鼠糖尿病模型,随机分为模型组、灌胃组和注射组,每组10只,分别给予生理盐水灌胃、重组hGLP-1类似物多肽灌胃、hGLP-1类似物基因重组载体尾静脉注射,观察4周内各组大鼠血糖、胰岛素、胰岛组织病理变化。结果与模型组比较,灌胃组和注射组的血糖水平在给药后1～4周明显下降,而血清胰岛素水平显著升高（P〈0.01）。灌胃组在各时间点的血糖、胰岛素水平与注射组相比,差异无统计学意义（P〉0.05）。HE染色发现,灌胃组和注射组大鼠的胰岛组织病变有所改善。结论重组hGLP-1类似物可降低糖尿病大鼠的血糖、提高血清胰岛素水平。 相似文献
4.
【目的】研究褪黑素对大鼠胰岛瘤细胞INS-1中胰岛素和Gαi/o蛋白基因表达的影响,探究褪黑素在m RNA水平对Gαi/o和Insulin1调节作用中可能存在的分子机制。褪黑素(melatonin,MT)是松果腺分泌的一种吲哚类神经内分泌激素,在机体内可调节胰岛素的分泌而使其呈现昼夜节律性分泌,影响葡萄糖昼夜代谢水平的变化进而维持机体血糖的相对恒定,故对于褪黑素影响胰岛素表达的研究可能会对褪黑素在胰岛素昼夜节律性分泌中的调控作用提供依据。【方法】将冻存的INS-1细胞复苏培养至第三代,INS-1细胞传代后,用RPMI1640培养基培养INS-1细胞约24—48 h,当细胞密度达60%—70%时,使用无血清无葡萄糖的RPMI1640洗2次,然后在INS-1细胞培养外液中分别加入不同浓度(0、10、20、30、50 mmol·L-1)的葡萄糖及100 nmol·L-1褪黑素和不同浓度葡萄糖孵育INS-1细胞12 h,观察和统计INS-1细胞的形态学变化。利用Easy Pure?RNA Kit提取INS-1细胞的总RNA,核酸蛋白测定仪测定细胞总RNA的浓度和纯度,其次利用甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测细胞的总RNA质量,Trans Script One-Step g DNA Removal and c DNA Synthesis Super Mix反转录合成c DNA。利用Primer Premier5.0引物设计软件,参考Gen Bank上已登录的基因序列进行Insulin1、Gαi1、Gαi2、Gαo、PKA和PKCα引物的设计。应用q RT-PCR法进行检测处理后的INS-1细胞Insulin1、Gαi1、Gαi2、Gαo、PKA和PKCαm RNA水平的变化。【结果】用含不同浓度葡萄糖培养液孵育INS-1细胞后,观察发现随着培养基中葡萄糖浓度含量的增加INS-1细胞突触的增长呈现先增加后减少的趋势,其中20 mmol·L-1葡萄糖处理组INS-1细胞突触的增长明显,而20 mmol·L-1葡萄糖和100 nmol·L-1褪黑素处理组INS-1细胞表面积增大,但突触增长却不明显;培养基中含不同浓度葡萄糖的处理组中,Insulin1 m RNA水平呈现先升后降的趋势,Gαi1 m RNA水平则呈现先降后升的趋势,其中20 mmol·L-1葡萄糖处理组,Insulin1 m RNA水平显著增加(P0.05),Gαi1 m RNA水平显著减少(P0.05),而Gαi2和Gαo则无显著变化(P0.05),因而Gαi1表现出与Insulin1 m RNA水平呈现负相关性而非Gαi2、Gαo与Insulin1 m RNA水平呈现负相关性;20 mmol·L-1葡萄糖和褪黑素处理组和20 mmol·L-1葡萄糖处理组相比,20 mmol·L-1葡萄糖和褪黑素处理组的Gαi1 m RNA水平显著增高(P0.05),且Insulin1和PKCαm RNA水平显著减少(P0.05),PKA m RNA水平则减少不显著(P0.05)。【结论】褪黑素能够抑制INS-1细胞Insulin1的表达,减少胰岛素的分泌导致INS-1细胞适应性增生。褪黑素与其受体结合后可促进Gαi1 m RNA水平增高而抑制PKCα的表达,使得Insulin1的表达受到抑制,胰岛素分泌减少,使血糖在夜间得以维持相对恒定。 相似文献
5.
【目的】简化胰岛的分离纯化方法,建立完善的胰岛评价体系。【方法】采用Ⅴ型胶原酶分离出Spra-gue-Dawley大鼠胰岛,并采用改良的3层Dextran不连续密度梯度离心法纯化胰岛。纯化的胰岛通过双硫腙(Dithi-zone,DTZ)染色进行计数及纯度检测,丫啶橙(AO)-碘化丙啶(PI)双染色法确定分离细胞的存活率,体外葡萄糖刺激释放胰岛素试验检测胰岛的分泌活性。采用Adobe Photoshop程序改进了常规的胰岛计数方法,并进行胰岛标准计数。【结果】平均每只成年Sprague Dawley大鼠的胰腺,可获得(3 840±24)当量数(IEQ)纯化胰岛,纯度可达到90%,细胞平均存活率达92%。【结论】采用改良的3层Dextran不连续密度梯度离心法及基于Adobe Photoshop程序的标准计数方法,可分别用于大鼠胰岛分离纯化和计数。 相似文献
6.
本实验旨在分析不同浓度的EETs对胰岛β细胞的影响,为防治2型糖尿病提供理论依据。体外培养MIN6小鼠胰岛瘤细胞,经不同浓度EETs处理细胞后,分别采用CCK-8法和ELISA法检测细胞活性和胰岛素含量。浓度为100 nM的11,12-EET和14,15-EET对胰岛β细胞增殖及胰岛素分泌能力具有显著促进作用。100 nM11,12-EET和14,15-EET均显著增加胰岛β细胞的增殖以及其胰岛素分泌能力。 相似文献
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胎猪胰岛源胰腺干细胞分离培养与诱导分化试验 总被引：3，自引：0，他引：3
【目的】分离培养胎猪胰腺干细胞对其进行功能检测。【方法】用先悬浮后贴壁的方法从胎猪胰岛获得胰腺干细胞，用免疫组化方法鉴定该细胞，以MTT法测定其不同代次的生长活性，诱导该细胞成为胰腺内分泌细胞并检测其功能。【结果】分离得到的细胞不表达nestin，而表达导管上皮细胞标志ck-19、平滑肌标志α-actin,其在体外的生长行为有类似胚胎干细胞样生长形态，细胞体外增殖活力很强，现已传至18代，细胞经诱导后分化为分泌胰岛素的胰腺内分泌细胞，并且伴随着细胞超微结构的改变。【结论】通过本方法可以分离到胎猪胰腺干/祖细胞，经诱导分化可形成有功能的胰岛样细胞团并释放胰岛素。 相似文献
8.
《江西农业大学学报》2017,(3)
旨在建立一种五谷虫抑菌活性多肽分离纯化的方法,为研究其药用价值提供实验依据。通过匀浆、过滤、加热、离心后利用超滤膜超滤获得分子量在30 ku以下的蛋白多肽,采用凝胶过滤层析系统初步分离并筛选出抑菌活性峰,以RP-HPLC建立该活性峰的分离纯化方法。结果显示,凝胶过滤层析法分离并且筛选出两个具有抑菌活性组分S2和S3;RP-HPLC色谱法确定了S2具有7个峰和S3具有4个峰;该方法稳定性、精密度、重复性实验的保留时间与峰面积的RSD值均小于5%;6批样品RP-HPLC图谱相似度值大于0.99;采用RPHPLC能快速分离五谷虫抑菌活性多肽,且该方法稳定、可靠、重复性好。 相似文献
9.
胰腺-十二指肠同源盒1(PDX-1)是在胰腺发育中起重要作用的转录因子。小GTP酶Ran、β2肾上腺素受体等物质可通过调节PDX-1基因的表达来影响胰岛素的合成。此外,PDX-1可诱导非胰岛细胞如骨髓间充质干细胞、脂肪源性干细胞等向胰岛素分泌细胞分化,提示PDX-1在胰岛β细胞再生,促进胰岛β细胞恢复中有着巨大潜能。 相似文献
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酶法制备大豆蛋白成骨活性肽 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】探究从大豆分离蛋白双酶分步酶解产物中分离促成骨细胞增殖肽的工艺,为大豆产品的开发提供参考。【方法】以促成骨细胞增殖活性作为测定指标,选用木瓜蛋白酶酶解大豆分离蛋白（SPI）,采用MTT法检测不同浓度的木瓜蛋白酶酶解产物对成骨细胞的促增殖活性。采用pH-Stat法检测水解时间为1、2、3、4、5和6 h的木瓜蛋白酶酶解产物的水解度,并检测相应水解时间的酶解产物对成骨细胞的促增殖活性。然后分别采用截留分子量为30 kD和10 kD两种超滤膜对活性较高的酶解产物进行超滤,并测定各超滤组分对成骨细胞的促增殖活性。再将具有较高促成骨细胞增殖活性的超滤组分分别在0.5、1、1.5、2和2.5 h进行碱性蛋白酶酶解,并检测相应水解时间的酶解产物对成骨细胞的促增殖活性。然后选用交联葡聚糖（Sephadex G-15）对具有较高促成骨细胞增殖活性的酶解产物进行分离,并检测各分离组分对成骨细胞的促增殖活性。最后,对各分离组分进行氨基酸分析,并采用质谱（ESI-TOF MS/MS）对最高促成骨细胞增殖活性的分离组分进行结构鉴定,并筛选出具有较强促成骨细胞增殖的大豆活性肽。【结果】在浓度为200 μg·mL -1时,木瓜蛋白酶酶解物对成骨细胞的促增殖活性随着酶解时间的增加逐渐增强,当酶解时间为5 h时达到最高促增殖活性（（118.24±2.73）%）。木瓜蛋白酶酶解产物经超滤分离、碱性蛋白酶酶解和凝胶过滤色谱分离后,对各分离组分进行氨基酸分析并筛选得到对成骨细胞具有最强增殖活性的组分F3,该组分的成骨细胞增殖率为（125.80±2.94）%,且F3中丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸等疏水性氨基酸以及芳香族氨基酸和必需氨基酸的含量明显高于其他组分。进一步通过质谱鉴定出F3主要由10个肽段组成。其中,DAMDGWFRL、GQTPLFPR、ADFYNPK、KDWYDIK的疏水性氨基酸、芳香族氨基酸以及必需氨基酸占比较高。对上述4个肽段进行活性测定,发现GQTPLFPR的促成骨细胞增殖活性最强,在浓度为100 μmol·L-1时,其成骨细胞增殖率为（129.11±3.12）%。【结论】采用双酶分步酶解结合超滤和凝胶过滤色谱等蛋白分离纯化技术,从大豆分离蛋白中分离纯化出了具有较强促成骨细胞增殖活性的多肽,为促成骨细胞增殖活性肽的制备和应用提供了技术参考。 相似文献
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江西省降水集中期及其期间降水量的变化特征及趋势分析 总被引：2，自引：0，他引：2
根据江西省地方标准中有关降水集中期的定义,统计1971~2008年4~9月的降水集中期,并用季节性Kendall检验方法做趋势分析。结果表明,1971~2008年4~9月期间,6~8月是降水集中期及其期间雨量较多的月份,4、5、9月是降水集中期及其期间雨量较少的月份。随时间变化,全省6~8月降水集中期及其雨量呈可能增多趋势,4、5、9月呈可能下降趋势。 相似文献
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阐述了英语静态形容词和动态形容词的意义。就其语义分类和用法及静态形容词和动态形容词的变化进行了详细地分析。 相似文献
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王子今 《湖南农业大学学报(自然科学版)》2007,(5)
汉代"亡人"的存在背离"编户齐民"理想社会组织秩序。作为行政管理者难以控制而实际上长期存在的社会人群,"亡人"的活动往往促成了生产技术和文化礼俗的自然传播。"亡人"的数量和流向,受多方面因素的影响。如若形成规模,也可能导致"流民"运动。分析汉代江南地区经济文化进步的原因,不应当忽视"亡人"和"流民"的积极的推动力。 相似文献
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16.
探讨冬小麦的管理与病虫害的防治 总被引：1，自引：0，他引：1
随着农业技术的不断发展,冬小麦的耕种面积也不断增大。因此,对冬小麦的种植管理、病虫的防治,已成为了提高冬小麦产量和质量的重要因素。笔者通过对我国种植冬小麦存在的问题进行研究,并提出了相应的解决对策,希望能够进一步的提高我国冬小麦的产量和质量。 相似文献
17.
人地挂钩与增减挂钩的异同分析及其实施要点 总被引：2，自引：0，他引：2
近年来,国家在宏观层面相继提出了城乡建设用地增减挂钩政策和人地挂钩政策,并允许在部分地区开展试点工作。两个挂钩在政策内涵、政策目标、切入点、适用范围及实施机制等方面既有相同之处,同时也存在着较大差别,其中增减挂钩是耕地占补平衡政策的延伸和特例,而人地挂钩则是增减挂钩的拓展和延伸。本文在详细分析两个挂钩异同的基础上,借鉴增减挂钩试点的经验教训,提出了在人地挂钩的试点工作中,一是应以内涵城市化作为实施人地挂钩政策试点的引擎;二是必须坚持以人为本,充分保障农民的合法权益;三是充分发挥政府的主导作用和规划的引领作用,稳妥推进;四是多方筹措资金,为人地挂钩的顺利实施提供资金保障;五是加快构建挂钩指标公开交易平台和土地承包经营权流转平台,为项目的顺利实施奠定基础。 相似文献
18.
周俊 《信阳农业高等专科学校学报》2011,21(1):52-53
近年来,随着信息技术的发展,互联网已经成为人们日常生活不可或缺的一部分。而通过网络表达民意,激发民众参政议政的热情,既有利于社会主义民主法治建设,又有利于维护公民的合法权益。当然,在互联网政治上,要善于梳理、整合网络民意,对网民加以引导,实现网络文明。 相似文献
19.
以氯化钙为主要原料,添加磷酸钙和羟乙基纤维素,制备了钙磷胶体复合剂,经检测含钙量为115±5mg/mL、含磷量为16.4±2mg/mL.试验小鼠n=20以0.8mL/20g(体重)的最大剂量一日灌服2次,7d后观察无中毒表现,剖检后组织器管无肉眼可见异常.试验组小鼠n=20以0.4mL/20g(体重)的剂量一日2次连续灌服7d后,无中毒及死亡现象,小鼠平均体重由20.24±1.211g增加到23.35±1.130g,体重增加情况与对照组小鼠无差异.以100mL/只灌服奶山羊(n=5)后,血钙、血磷浓度在2～3h达到峰值(P<0.05),而且可维持6h左右. 相似文献
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