共查询到20条相似文献，搜索用时 187 毫秒
1.
彩色免疫金银染色法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究 总被引：4，自引：0，他引：4
试验首次建立了固相载体上的彩色免疫金银染色法(CIGSS)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),并获得成功。用提纯的PRRSV高免兔制备高免血清,按常规方法提取兔抗PRRSVIgG,建立了检测PRRSV抗原的彩色免疫金银染色法。经方阵试验确定最佳兔抗PRRSV IgG工作浓度为1∶400,金标羊抗兔IgG的工作浓度为1∶1 000,银染色的时间为15 min,彩染的时间为2 min。用该法对提纯的PRRSV病毒抗原的最低检出量为1.469μg/ml,其敏感性为DIGFA的5倍。以CIGSS法检测了52份疑似PRRSV感染的猪样本,阳性率为53.84%,而检测猪细小病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪巴氏杆菌以及正常的Marc-145细胞培养物,均为阴性反应。表明该法具有快速、准确、操作简便、敏感性高、易于判断、特异性强、重复性好等优点,可用于大量PRRSV抗原样本的检测。 相似文献
2.
雏鸡新城疫免疫后部分黏膜中抗新城疫IgG的检测 总被引：4，自引：1，他引：3
利用新城疫Ⅳ系对不同免疫途径免疫后雏鸡的泪液、气管液、血清中抗新城疫病毒的HI抗体效价进行了检测。结果表明：黏膜免疫途径比非黏膜免疫途径更活跃地激活黏膜免疫应答部位产生IgG,并且黏膜免疫后,离Ag刺激近的部位免疫应答较强。黏膜免疫应答部位的HI抗体在一免后要比血清中抗体效价高,而二免后其IgG含量要低于血清中IgG含量。 相似文献
3.
【目的】寻找一种更具针对性、更为可靠的仔猪猪瘟抗体水平检测方法。【方法】分别采用间接ELISA、间接血凝试验（IHA）,对广西某猪场的90份已超免的不同阶段仔猪血清进行抗猪瘟E2抗体和猪瘟全抗体水平监测。【结果】在间接ELISA试验中,阳性样品数为86份,占总样品比例的95．56％;间接血凝试验结果效价在1：16以上（含1：16）的血清样品为88份,占总样品比例的97．78％,两者差异不显著。【结论】仔猪血清中确实存在具有保护性的抗E2抗体,以间接ELISA检测抗E2抗体来监测猪瘟免疫水平是可行的,这为猪瘟免疫水平的监测提供了一种新方法,也为制定免疫程序提供了科学依据。 相似文献
4.
【目的】寻找一种更具针对性、更为可靠的仔猪猪瘟抗体水平检测方法。【方法】分别采用间接ELISA、间接血凝试验（IHA）,对广西某猪场的90份已超免的不同阶段仔猪血清进行抗猪瘟E2抗体和猪瘟全抗体水平监测。【结果】在间接ELISA试验中,阳性样品数为86份,占总样品比例的95.56%;间接血凝试验结果效价在1∶16以上(含1∶16)的血清样品为88份,占总样品比例的97.78%,两者差异不显著。【结论】仔猪血清中确实存在具有保护性的抗E2抗体,以间接ELISA检测抗E2抗体来监测猪瘟免疫水平是可行的,这为猪瘟免疫水平的监测提供了一种新方法,也为制定免疫程序提供了科学依据。 相似文献
5.
采用IBD细胞毒油佐剂灭活苗多次免疫易感鸡，制取高免血清效价1：64，提纯IgG抗体并用HRP标记同一IgG抗体，建立一种检测IBDV的敏感性方法──ELISA双抗夹心法。实验用盐析法和离子交换层析法纯化IgG。酶标抗体E／IgGmol比1：43。方阵实验确定最佳反应条件；包被抗体50ug／ml，E－Ab2稀释度为1：120，Ag灵敏度为1：3200；取代反应，抗原阻断反应，无关病毒对照试验均为阴性，并与AGP法对照实验．灵敏度高200倍。以上结果表明：本实验敏感性高，特异性强，简单快速判定客观，对临床诊断IBD流行病有很好的使用价值和推广价值。 相似文献
6.
7.
《中国畜禽种业》2017,(8)
为验证以鼠抗猪IgG为基底,用辣根过氧化物酶标记猪瘟E2蛋白,建立的猪瘟抗体ELISA检测方法的可行性,对影响ELISA试验结果的主要条件进行优化。结果表明,鼠抗猪IgG最佳包被浓度为1μg/ml,酶标猪瘟E2蛋白最佳稀释度为1:500,最佳封闭液为1%BSA。建立的方法对猪蓝耳病阳性血清、猪圆环病阳性血清、猪亚洲1型口蹄疫阳性血清、猪O型口蹄疫阳性血清均无交叉反应。通过对50份试验样本的检测,对比该方法与商品化IDEXX的猪瘟病毒抗体检测试剂盒的符合性,试验结果表明,该方法检测猪瘟抗体的相对敏感性为76.9%(30/39),相对特异性为90%(45/50)。 相似文献
8.
禽流感(H9N2亚型)酶标抗体的制备及双抗夹心Dot-ELISA检测方法的建立 总被引：5，自引：0，他引：5
采用AIV灭活油乳苗（H9N2）对AIV非免疫鸡进行接种并获取高免血清，取高免血清采用饱和硫酸铵沉淀法，经过Sephadex G25层析柱提纯后可获得纯度很好的IgG。将IgG应用过碘酸钠法标记辣根过氧化酶（HRP），制备禽流感酶标抗体（IgG—HRP），利用所提取的AI—IgG和所制备的禽流感酶标抗体按照双抗夹心Dot—ELISA试验操作步骤，采用方阵法分别摸索包被抗原及酶标抗体的最佳浓度，以及各步反应时间等最佳反应条件，以建立一种优化的AIV双抗夹心Dot—ELISA检测法。结果表明，所制备的AI高免血清HI效价为10log2；AI酶标抗体克分子比值为2．45；优化的Dot—ELISA各条件为：包被AI—IgG最佳稀释倍数为1：50；最佳封闭剂为1％牛血清白蛋白；AI酶标抗体最佳稀释倍数为1：100；待检抗原与2种抗体的感作时间均为0．5h（37℃）。优化后的检测方法可在2．5h内诊断结果。制备好的包被膜在4℃下保存2个月不影响其效果。而且敏感性提高了3倍，与新城疫病毒液、传染性支气管炎及减蛋综合症病毒液无交叉反应。 相似文献
9.
以犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)和犬传染性肝炎病毒(ICHV)的灭活强毒接种于7只基础免疫后的比格犬,接种10 d后检测犬体内血清的CPV抗体效价。对抗体效价大于或等于1∶1 280的犬,放血分离血清而得三联高免血清。试验结果为:把效价为1∶320的抗原用于试验的7只犬中,1~6号犬的血清效价均等于或大于1∶1 280,达到高免血清效价要求。而7号犬的血清效价为1∶640,小于1∶1 280,不符合试验要求。 相似文献
10.
小鹅瘟羊源高免血清的制备及比较 总被引：1，自引：0，他引：1
为制备高效价的小鹅瘟高免血清,试验采用从贵州某养鹩场病鹅分离的小鹅瘟野生强毒株,接种于9 d鹅胚,收集24 h以后死亡的鹅胚尿囊液,制备小鹅瘟病毒抗原,与弗氏佐剂混合均匀,多次免疫山革后,颈动脉一次性放血,离心收集血清即得到小鹅瘟羊源高免血清,以琼脂扩散进行血清效价测定,并与市售小鹅瘟鹅源高免血清进行保护率比较.结果显示,试验制备的小鹅瘟羊源高免血清抗体效价在1:8以王,对人工感染雏鹅的保护率为95%,而市售小鹅瘟鹅源高免血清的保护率只有85%.结果表明,本试验制备的小鹅瘟羊源高免血清具有效价高、成本低、安全性好等优点. 相似文献
11.
[目的]制备抗猪瘟病毒（CSFV）的单克隆抗体（MAb）。[方法]以纯化的猪瘟病毒免疫4～6周龄BALB／c雌鼠,取其脾细胞与SP2／O骨髓瘤细胞进行融合,筛选出抗CSFV单克隆抗体杂交瘤细胞株。[结果]经间接ELISA获得3株能稳定分泌抗CSFVE2蛋白的MAb杂交瘤细胞,分别命名为1AS、5F3和4D2。Mab亚型鉴定表明3株MAb均为IgG2b,轻链均为K链。Westernblot结果表明3株Mab均能识别重组E2蛋白。间接免疫荧光试验表明3株Mab均与CSFV呈阳性反应,与猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒（PCV2）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）呈阴性反应。[结论]该研究为建立CSFV特异性检测方法奠定了基础。 相似文献
12.
牛IgG轻链的分离纯化及其多克隆抗血清的制备 总被引：1，自引：1，他引：0
实验应用凝胶过滤和盐析等方法直接从牛初乳中分离纯化IgG,并应用化学方法断裂回收IgG轻链。分离纯化获得分子量约27.66 ku的IgG轻链蛋白溶液,蛋白质含量为0.105 mg.L-1,浓缩后免疫家兔,获得抗轻链抗血清,效价>11∶6,免疫双扩散和免疫电泳均为特异性条带,表明得到了纯化的IgG轻链及其特异性抗血清。 相似文献
13.
14.
经硫酸铵盐析沉淀、柱色谱分离纯化得到鸡血清 IgG。然后用木瓜蛋白酶水解IgG,再经 DEAE-纤维素柱色谱纯化制得 IgGFc 重链。继用 IgGFc 重链免疫家兔制备兔抗鸡 IgGFc 重链抗血清。 相似文献
15.
为探讨鸭源禽流感灭活抗原与佐剂配合饮水免疫雏鸭的效果,应用鸭源禽流感灭活抗原与复合黏膜免疫佐剂(CpG和/或葡萄糖)饮水免疫雏鸭,检测消化道(主要是咽和小肠)抗体分泌细胞的变化。首先分别从鸭的胆汁和血清中粗提免疫球蛋白A(IgA)和IgG,经纯化后制备了兔抗鸭IgA和IgG,然后应用免疫组化技术显示鸭消化道IgA和IgG分泌细胞。试验结果表明:用禽流感灭活抗原配合CpG和/或葡萄糖饮水免疫后3、5和7周,消化道黏膜局部IgA分泌细胞面积均显著或极显著增加(P<0.05或P<0.01),IgG分泌细胞(除首免后第3和7周小肠外)极显著升高(P<0.01)。而单独用禽流感灭活抗原和用葡萄糖配合禽流感灭活抗原饮水免疫对消化道局部免疫水平影响不大。结论:鸭源禽流感灭活抗原配合免疫佐剂饮水免疫能够提高雏鸭消化道局部免疫水平。 相似文献
16.
Ruining WANG Yubao ZHI Junqing GUO Qingmei LI Li WANG Jifei YANG Qianyue JIN Yinbiao WANG Yanyan YANG Guangxu XING Songlin QIAO Mengmeng ZHAO Ruiguang DENG Gaiping ZHANG 《农业科学与工程前沿(英文版)》2015,2(3):230
Large-scale production of cell culture-based classical swine fever virus (CSFV) vaccine is hampered by the adverse reactions caused by contaminants from host cell and culture medium. Hence, we have developed an efficient method for purifying CSFV from cell-culture medium. Pure viral particles were obtained with two steps of tangential-flow filtration (TFF) and size-exclusion chromatography (SEC), and were compared with particles from ultracentrifugation by transmission electron microscopy (TEM), infectivity and recovery test, and real time fluorescent quantitative PCR (FQ-PCR). TFF concentrated the virus particles effectively with a retention rate of 98.5%, and 86.2% of viral particles were obtained from the ultrafiltration retentate through a Sepharose 4 F F column on a biological liquid chromatography system. CSFV purified by TFF-SEC or ultracentrifugation were both biologically active from 1.0×10−4.25 TCID50·mL−1 to 3.0×10−6.25 TCID50·mL−1, but the combination of TFF and SEC produced more pure virus particles than by ultracentrifugation alone. In addition, pure CSFV particles with the expected diameter of 40–60 nm were roughly spherical without any visible contamination. Mice immunized with CSFV purified by TFF-SEC produced higher antibody levels compared with immunization with ultracentrifugation-purified CSFV (P<0.05). The purification procedures in this study are reliable technically and feasible for purification of large volumes of viruses. 相似文献
17.
转Bt基因植物中杀虫蛋白的酶联免疫检测技术研究Ⅱ.Bt杀虫晶体蛋白抗体的制备 总被引：7，自引：1，他引：6
用碳酸钠裂解液(50mmol/LNa2CO3,50mmol/LEDTA,pH10)从BacillusthuringiensisHD-1的孢晶混合物中分离提取杀虫蛋白的基础上,进一步用聚丙烯酰胺凝胶制备电泳技术纯化杀虫蛋白,获得了高纯度的杀虫蛋白作为抗原,用于免疫家兔制备抗体。比较了不同抗原注射剂量的免疫效应和免疫过程中(不同注射时间)抗体生成量的变化。结果表明,供试的二种抗原注射剂量对抗体的效价无明显影响,随着免疫次数的增加抗体效价不断上升,最终获得了用琼脂双扩散测定效价为1/120的抗血清。Bt杀虫蛋白的免疫原性低。抗血清中的抗体免疫球蛋白(Ig),首先经硫酸铵分级沉淀粗提,再用DEAE-52纤维素柱层析提取纯化,获得了高纯度的IgG,为抗体的酶标记和ELISA检测杀虫蛋白等研究提供了高特异性的Bt抗体。研究的结果为Bt菌HD-1杀虫蛋白抗体的制备提供了依据。 相似文献
18.
【目的】 比较纳米抗体、HCAbs与常规抗体之间在温度稳定性方面的差异,为研究HCAb的功能特性和骆驼适应极端环境的免疫特点提供参考。【方法】 从溶菌酶、蒜氨酸酶和丹毒丝菌表面抗原A 3种抗原免疫的新疆双峰驼血清中,采用Protein A和Protein G亲和色谱纯化IgG1、IgG2和IgG3 3种亚型抗体,并在大肠杆菌BL21(DE3)菌中表达和纯化3种纳米抗体。采用ELISA方法,测定经过22~90℃一系列热处理后、平衡至室温的各抗体与相应抗原的结合活性,以剩余抗原结合活性的百分比作为衡量抗体温度稳定性的参数。【结果】 3种抗原免疫后均能在骆驼激发明显的抗体反应。采用Protein A/G亲和色谱,从血清中纯化获得分子量分别为50 KD+25 KD、 46 KD和43 KD的IgG1、IgG2和IgG3亚型抗体。骆驼IgG2和IgG3重链抗体比IgG1具有更高的温度稳定性,其中IgG3表现出比IgG2对温度更高耐受的趋势。从细菌表达纯化的3种纳米抗体都表现出比重链抗体和常规抗体更高的温度稳定性。【结论】 抗体结构形式和分子大小可能显著影响了双峰驼抗体对温度的耐受性。 相似文献
19.
为探讨大肠埃希菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)作为猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)E2蛋白的递呈载体所产生的免疫效应,将切除跨膜区后的CSFV E2基因连接到pBAD18-Cm-ClyA的C-端,转化E.coli DH5α,用0.2%阿拉伯糖诱导表达后,收集含E2蛋白的OMVs免疫家兔。免疫印迹表明,该OMVs可特异性地与组氨酸标签单抗结合。间接ELISA结果表明,重组OMVs可诱导兔体产生高水平的IgG抗体。免疫后的家兔能很好地防御高剂量CSFV活疫苗攻击。说明大肠埃希菌OMVs递呈CSFV E2蛋白具有较好的免疫原性,为研究OMVs递呈CSFV E2蛋白疫苗奠定了基础。 相似文献
20.
根据已发表的猪瘟病毒Alfort株的全基因组序列,设计2对引物以Shimen细胞毒株为材料,一步法提取总RNA,利用RT-PCR和套式PCR,成功扩增出p80全长基因,包括丝氨酸蛋白酶以及NTPase/RNA解旋酶功能区,大小约为2.0kb。将p80基因中的丝氨酸蛋白酶基因克隆到原核表达载体pET-32a中,获得重组质粒pET-p80。将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta（DE3）中,IPTG诱导表达得到分子量约为43ku的目的蛋白,与理论大小相符。将菌体蛋白经Ni柱纯化,获得纯化重组p80蛋白,Western blot检测表明,表达的目的蛋白能与CSFV阳性血清发生反应。用纯化的p80蛋白免疫Bal b/c小鼠,成功制备了抗p80蛋白的抗血清。 相似文献