共查询到15条相似文献，搜索用时 328 毫秒
1.
通过对表皮蛋白质提取方法、不同裂解液配方、等点聚焦程序和上样量等条件的对比试 验,建立及优化了大菱鲆表皮组织蛋白质的双向电泳体系.试验采用改良的TCA/丙酮和超声波提取相结合的方法提取大菱鲆表皮组织的全蛋白,裂解液配方根据Bio-Rad公司推荐的进行调整,使用17 cm pH 4～7的IPG胶条被动水化上样,上样量为250μg.等点聚焦程序采用30 V线性6 h、250V线性2.5 h、500 V线性1.5 h、1 000 V快速2 h、4 000 V线性3 h、8 000 V快速3 h、8 000 V线性1 h、500V 24 h,凝胶银染后用Image Master 2D Platinum 7.0软件进行分析,最终得到较满意的双向电泳图谱,具有较高的分辨率和重复性,为大菱鲆蛋白质组学的进一步研究奠定了基础. 相似文献
2.
中国明对虾肌肉组织蛋白质双向电泳技术体系的建立 总被引：3，自引：2，他引：1
为了探索并建立中国明对虾的肌肉蛋白双向电泳体系,实验将中国明对虾的肌肉组织溶解处理后,通过固相pH梯度胶条等电聚焦、SDS-PAGE垂直电泳对蛋白质进行分离,对不同的裂解液配方、IPG胶条的pH范围及其长度、等电聚焦程序、上样量等进行了优化,并分别利用银染和考染方法进行染色,应用PDQuest软件对图谱进行了初步分析.结果显示,中国明对虾肌肉蛋白的等电点主要位于4～7之间,裂解液中添加硫脲、CHAPS、DTT等,可以增加对虾肌肉蛋白的提取率;采用17 cm,pH 4～7的中型IPG胶条,主动水化上样120μg,适当延长除盐时间和等电聚焦时间,搭建盐桥,采用浓度为12.5％的二向分离胶和硝酸银染色,能有效提高双向电泳(2-DE)图谱中蛋白点的分离度和分辨率;建立的中国明对虾肌肉蛋白双向电泳体系具有良好的重复性和稳定性. 相似文献
3.
以刺参肠组织为材料,通过蛋白质提取方法、上样前处理方法、上样量以及聚焦条件的优化,建立了刺参肠组织蛋白质双向电泳技术体系.试验结果表明,采用TCA-丙酮沉淀法制备刺参肠组织蛋白质,能够得到高纯度的蛋白质提取液.刺参样品上样前不经过处理,等电聚焦电压1 000V,电流7mA,聚焦时间3h,平衡时间30min,最佳上样量25μg,pH 4～6.5、8.5cm的IPG胶条,银染能获得较好的双向电泳图谱.通过蛋白质双向电泳体系的优化,获得了刺参肠组织的蛋白质表达图谱,为进一步研究刺参差异表达蛋白的筛选及蛋白质组学研究提供技术保障 相似文献
4.
为建立并优化草鱼鳃蛋白质组双向电泳的技术体系,实验将草鱼鳃经裂解处理后,通过固相p H梯度胶条进行一向等电聚焦和SDS聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳进行蛋白分离,对不同的裂解液配方、蛋白纯化方法、IPG胶条的分离范围、上样量和染色方法等进行了探索和优化,并应用lmage Master 2D Platinum 7.0软件对电泳图谱进行了分析。结果表明:采用裂解液中添加DTT来取代Tris和TBP、选择分离范围为pH4-7的IPG胶条和150μg的主动水化上样,电泳结束后对凝胶进行硝酸银染色,获得了覆盖范围广、低背景、高分辨率、适合差异蛋白分析的双向电泳参考图谱。 相似文献
5.
以中国明对虾为试验对象,优化了拥挤应激条件下中国明对虾肝胰脏蛋白质双向电泳的条件,并分析了关联的差异蛋白质。试验结果表明,中国明对虾肝胰脏蛋白双向电泳优化条件为裂解液中添加三丁基膦,采用17 cm的固相p H值（p H 4～7）梯度干胶条,上样量为120μg ,等电聚焦时间为65000 V／h。蛋白图谱分析结果显示,得到的700多个蛋白点中差异蛋白点11个,其中8个差异蛋白点丰度显著上调（P ＜0．05）,3个差异蛋白点丰度显著下调（P ＜0．05）。研究表明,在拥挤应激条件下中国明对虾肝胰脏蛋白表达发生显著变化。 相似文献
6.
文章探索并优化了斑节对虾（Penaeus monodon）血淋巴双向电泳技术体系,对斑节对虾血淋巴总蛋白抽提方法进行优化,减小高丰度蛋白的影响;对双向电泳过程各步骤,如IPG胶条pH范围的选择、等电聚焦程序、上样量等进行了优化,得到高分辨率的2-DE图谱,用PDQuest软件进行了初步分析。结果表明,用PEG 6000能更快捷有效地去除血淋巴中的高丰度蛋白,增加低丰度蛋白的点数及浓度;在抽提蛋白过程中,利用预冷的80%丙酮洗涤,在一向电泳过程中设置100 V低压除盐,能更有效地去除蛋白中的盐分;采用18 cm、pH 3~10 NL 的中型胶条,能更好地显示低丰度蛋白点的分布;被动水化上样300 μg结合硝酸银染色方法,能有效提高双向电泳图谱中蛋白点的分离度和分辨率。该试验为斑节对虾及其他甲壳动物血淋巴蛋白质组学相关研究提供了稳定可重复的研究方法。 相似文献
7.
中国明对虾血浆蛋白质组双向电泳技术的建立与主要高丰度蛋白点的质谱鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
中国明对虾的血浆脱盐处理后,通过固相pH梯度胶条等电聚焦、SDS-PAGE垂直电泳对蛋白质进行分离,对不同pH范围IPG胶条、脱盐方式、上样量等进行了优化,并分别利用硝酸银和胶体考染方法进行染色,应用PDQuest软件对图谱进行了初步分析,采用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法对主要的高丰度蛋白点进行了质谱鉴定。结果显示,中国明对虾血浆在pH 4~7范围、18 cm的2-DE胶上得到了很好的分离,上样量为150 μg左右,采用银染可以获得较好的分析胶图谱;而上样1 000 μg左右,采用胶体考染方法能获得较好的制备胶图谱;通过MALDI-TOF/TOF MS鉴定的11个最主要的高丰度蛋白点都是血蓝蛋白。建立并优化了中国明对虾血浆蛋白质组学的双向电泳技术体系,为进一步开展对虾等甲壳动物的血浆蛋白质组学研究奠定了基础。 相似文献
8.
坛紫菜叶状体蛋白质双向电泳样品制备方法的比较 总被引：1，自引：0，他引：1
蛋白质样品的制备是双向电泳分析的关键。为探索适用于坛紫菜叶状体蛋白质双向电泳样品的制备方法,实验对3种常用植物蛋白质分离方法进行了优化和改进,并分别同3种蛋白质裂解液联用,比较了9种方法的总蛋白质得率及双向电泳图谱效果。结果发现,采用三氯乙酸/丙酮沉淀法与裂解液C(7 mol/L 尿素,2 mol/L 硫脲,2%CHAPS,2%TritonX-100,2% IPG Buffer pH 3~10,65 mmol/L DTT)联用的方法,坛紫菜叶状体的蛋白质得率最高,且双向电泳图谱显示此法获得的蛋白质点数最多,蛋白点形状规则,水平和垂直拖尾情况较轻,图像清晰。实验结果还发现,在进行双向电泳分析时,采用pH 4~7的胶条可以使坛紫菜叶状体蛋白质得到更为有效的分离。 相似文献
9.
尼罗罗非鱼肌肉蛋白质双向电泳体系的建立 总被引：1，自引：1，他引：0
为建立1种尼罗罗非鱼肌肉组织蛋白质的双向电泳体系,实验将尼罗罗非鱼肌肉组织蛋白质提取后,用双向电泳(2-DE)分离蛋白质,分别对蛋白质样品的制备方法、IPG胶条长度及p H范围、SDS-PAGE凝胶浓度及染色方法4个关键因素进行了探索和优化。结果显示,采用液氮研磨-丙酮沉淀法制备样品蛋白质,使用24 cm p H 4~7的IPG胶条进行第一向等电聚焦电泳,第二向SDS-PAGE电泳采用浓度为12.5%的凝胶进行,双向电泳后的凝胶采用硝酸银染色法进行染色处理,该条件下扫描所得尼罗罗非鱼肌肉蛋白质二维电泳图谱具有蛋白质分离程度好、斑点清晰、分辨率高及横纹少等优点。研究表明,技术体系适用于尼罗罗非鱼肌肉蛋白质的分离,可用于后续罗非鱼肌肉蛋白质组学研究。 相似文献
10.
溶藻弧菌全菌可溶性蛋白二维图谱的建立及部分蛋白分子的鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究采用蛋白质组学技术,建立了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)ZJ03培养至稳定期的蛋白质组双向电泳图谱,并对部分蛋白分子进行了肽质量指纹图谱分析鉴定。首先将溶藻弧菌接种于TSB培养基28℃培养24 h,利用裂解液裂解细菌,提取全菌可溶性蛋白,荧光染料标记,24 cm pH4 ～ 7的胶条进行等电聚焦,再用12.5%的胶进行SDS-PAGE。2-D胶经过分析,得到902±8个蛋白斑点,重复胶的匹配点数为866±28,匹配率为96%。从双向电泳图谱中选取68个高丰度蛋白质点进行肽质量指纹图谱鉴定,其中60个在NMPDR数据库中得到鉴定,另外8个在NCBI数据库中得到鉴定。鉴定的蛋白中发现Serine protein kinase、purine nucleoside phosphorylase 和Alkyl hydroperoxide reductase subunit C-like protein存在修饰现象,它们在胶上均有2种表现形式。对68个蛋白进行了细胞功能的分类,发现能量代谢蛋白最多,占43%;其次是转运和结合蛋白,占9%;第三是外膜蛋白,占8%。经CMR操纵子预测软件分析预测到2个操纵子,它们均参与了能量代谢过程。研究结果为溶藻弧菌在不同生长条件下的比较蛋白质组学以及该菌强毒株和无毒株的比较研究提供了基础资料。 相似文献
11.
12.
Serum samples were obtained from rainbow trout, Oncorhynchus mykiss (Walbaum), from a commercial fish farm. Creatine kinase (CK; EC 2.7.3.2) isoenzymes and sub-bands (isoforms) were studied using agarose gel electrophoresis and polyacrylamide gel isoelectric focusing. Creatine kinase isoenzymes and isoforms (sub-bands) were found to display disparate electrophoretic mobility and isoelectric points, respectively, when compared with CK patterns of human origin. The CK-BB isoenzyme, rarely detected in human serum, was detected in all trout samples assayed. Up to eight CKMM isoforms were detected by the polyacrylamide gel IEF method described. 相似文献
13.
Purification of a proteinase produced by the bivalve pathogen Vibrio alginolyticus NCMB 1339 总被引：5，自引：0，他引：5
Abstract. A proteinase produced by the bivalve pathogen Vibrio alginolyticus NCMB 1339 was purified by preparative isoelectric focusing and gel filtration. Proteinase activity was associated with two components of molecular weights 43000 and 41000 and was toxic to larval Ostrea edulis . Production of this enzyme was maximal during the late exponential phase of growth and it remained stable throughout the stationary phase of growth. At 37°C, activity against azocasein was optimal at pH 7–5. The enzyme was inhibited by mercuric chloride, dithiothreitol and ethylene diamine tetra-acetic acid, but not by pepstatin-A, phenylmethylsulphonyl-fluoride or tosyl-L-lysine chloromethylketone. 相似文献
14.
Haemoglobins of ten tilapia species of the genera Oreochromis, Sarotherodon and Tilapia, three subspecies of the Nile tilapia, O. niloticus, and an artificial hybrid cross were analysed by isoelectric focusing aimed at characterizing the taxonomic value of these oxygen-binding molecules. Heterogeneous haemoglobin phenotypes were observed in haemolysate samples of all the fishes, and species-characteristic as well as subspecies-characteristic patterns could be identified. F1 hybrids were distinguishable from pure parental specimens. Globin chain studies by AU- and AUT-PAGE systems confirmed the heterogeneity and species specificity observed by isoelectric focusing of the tetrameric molecules. A total of eight different -chains and eight different -chains were detected by AU-PAGE and species-characteristic globin chain variants were shown to occur in almost all species. Globin chain profiles of hybrid specimens were characterized by the presence of all parental globin chain variants. © Rapid Science Ltd. 1998 相似文献
15.
Knut O. Strætkvern Arnt J. Raae Bernt T. Walther 《Fish physiology and biochemistry》1990,8(6):529-539
A deoxyribonuclease (DNase) of pancreatic origin has been purified from extracts of the pyloric caeca from Atlantic cod (Gadus morhua L.). The crude extract was prepared by mincing frozen caeca tissue in equal volumes of buffer. The enzyme was isolated from
the supernatant after streptomycin sulfate precipitation and centrifugation. The purification scheme further included chromatography
on Q-Sepharose Fast Flow and hydroxyapatite columns. Affinity adsorption chromatography of the hydroxyapatite fraction on
8-(6-aminohexyl)-amino-5′-AMP-Sepharose, revealed an apparently homogeneous protein with molecular weight of 35,000 Da as
judged by NaDodSO4-PAGE. In sum a 644-fold enzymatic enrichment and 3.5% total enzyme recovery was achieved. The cod enzyme resembles DNase
I-type enzymes with an alkaline pH activity optimum and shows dependency for Mg2+. The pI of the enzyme is 6.5 as determined by isoelectric focusing and DNase-zymography. Our findings suggest that the nuclease
is a member of the cod's digestive enzymes secreted from the connective tissue surrounding the caeca. 相似文献