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SYBR Green I荧光定量PCR检测类猪圆环病毒因子P1 总被引：3，自引：0，他引：3
该研究旨在建立快速、敏感和特异的检测类猪圆环病毒因子 P1的 SYBR Green I 荧光定量 PCR 法,用于 P1 的早期诊断.以感染 P1 的猪血清DNA提取物为模板,采用 PCR 扩增 P1 101 bp 的基因片段,将其克隆至 pMD18-T 载体,重组质粒测序并进行同源性分析;以阳性质粒为模板,建立 SYBR Green I 荧光定量PCR检测方法,并进行敏感性和特异性检测.经测序证实扩增片段属于 P1,所建立的 SYBR Green I 荧光定量 PCR 检测 P1 的反应在 101 ～108拷贝/μL 之间具有良好的线性关系,反应的检出下限为10拷贝/μL,而对猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等的检测为阴性,表明该方法敏感、特异.成功建立了 SYBR Green I 荧光定量 PCR 检测 P1 载量的方法,为 P1 致病机制和机体免疫保护机制的研究提供了技术平台. 相似文献
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【目的】建立快速、简便、特异的检测猪圆环病毒II型的PCR方法;【方法】根据已发表的猪圆环病毒II型基因序列设计合成了一对引物,用酚-氯仿法抽提可疑病料中的病毒DNA,应用PCR技术对猪圆环病毒进行基因扩增,PCR产物进行序列测定;以猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒为对照,进行特异性试验;取部分病料进行重复性试验;【结果】PCR方法扩增出了长度为702bp的片段,扩增产物经测序和序列分析表明扩增的序列为PCV2序列;猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒的PCR扩增均为阴性,与预期结果一致;部分病料PCR重复检测5次,检测结果完全一致;【结论】PCR检测方法可以对猪圆环病毒病作出敏感、特异、准确地诊断,该方法检测的基因最低模板量为2×10-5 ng/ml 相似文献
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猪圆环病毒Ⅱ型PCR检测方法的研究 总被引：5，自引：0，他引：5
【目的】建立快速、简便、特异的检测猪圆环病毒II型的PCR方法;【方法】根据已发表的猪圆环病毒II型基因序列设计合成了一对引物,用酚-氯仿法抽提可疑病料中的病毒DNA,应用PCR技术对猪圆环病毒进行基因扩增,PCR产物进行序列测定;以猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒为对照,进行特异性试验;取部分病料进行重复性试验;【结果】PCR方法扩增出了长度为702bp的片段,扩增产物经测序和序列分析表明扩增的序列为PCV2序列;猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒的PCR扩增均为阴性,与预期结果一致;部分病料PCR重复检测5次,检测结果完全一致;【结论】PCR检测方法可以对猪圆环病毒病作出敏感、特异、准确地诊断,该方法检测的基因最低模板量为2×10-5ng/ml。 相似文献
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《华北农学报》2015,(4)
为了鉴定类猪圆环病毒P1 VP1蛋白能否在体外自组装成病毒样颗粒(VLPs),首先PCR扩增P1 ORF1基因,利用p Fast BacTM1载体构建重组质粒,通过脂质体转染在Sf9细胞中表达P1 ORF1基因。然后通过RT-PCR技术及Western Blot分别从转录和蛋白质水平上鉴定该基因的表达,应用透射电镜观察该蛋白质是否形成了VLPs。结果显示,转染Sf9细胞后,第5天开始出现细胞病变;从接毒细胞中提取总RNA,经Recombinant DNaseⅠ处理除去基因组DNA后,RT-PCR能够扩增出362 bp的目的片段;收获接毒后72 h的细胞,Western Blot分析显示,P1 ORF1重组病毒样品能够与抗P1 VP1单抗发生特异性反应;电镜观察发现,该蛋白在Sf9细胞中形成了近椭圆形的包涵体。利用杆状病毒表达载体系统成功地在Sf9细胞中表达了类猪圆环病毒P1的ORF1基因,并证实在本试验条件下P1 VP1蛋白不能自组装成VLPs,为进一步研究P1 VP1蛋白的免疫学特性奠定基础。 相似文献
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【研究目的】为了研究猪圆环病毒的分子生物学特征及其发病机理和致病机制,【研究方法】将疑似猪圆环病毒2型的猪脾脏、淋巴结用胰蛋白酶消化处理后接种PK-15细胞,盲传6代后,病毒已经适应PK-15细胞,【研究结果】然后设计一对特异性引物利用PCR技术扩增出ORF2片段中540 bp的基因。第6代细胞病毒液经间接免疫荧光检测表明,在荧光显微镜下可见PCV特征的荧光斑,表明毒株具有感染性。【结论】将病毒纯化后进行电镜观察,病毒粒子直径约17nm,圆形,无囊膜,研究结果表明分离的病毒为猪圆环病毒。 相似文献
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类圆环病毒因子P1感染对猪外周血T淋巴细胞含量和增殖活性的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
探讨类猪圆环病毒因子P1感染对猪细胞免疫功能的影响.将12头30日龄广西巴马小型猪随机分成试验组和对照组,每组6头.在猪感染P1后第3,8,17,24,31和40天,采用血常规和单色流式细胞术分析猪外周血T淋巴细胞的含量,通过WST法对其增殖活性进行检测.P1感染组的T淋巴细胞数量(绝对数和相对数)整体趋势低于对照组,而两组的T淋巴细胞增殖活性没有显著差别.P1感染对机体的细胞免疫功能有一定程度的影响. 相似文献
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本文在冬小麦氮磷钾经济合理用量和适宜配比的研究条件下,探讨了氮磷配合施肥联合效应的生理基础.结果表明:在缺氮少磷的土壤上如果单纯施氮或单施磷植株均生长不好,这是因为单氮条件下植株首先磷不足,核酸含量低,磷代谢受阻.氮虽被吸收并引起硝酸还原酶活性增高,但蛋白氮含量较低,说明缺磷又影响氮代谢;单磷条件下植株首先氮不足,氮代谢水平低.虽然磷可被吸收,但核酸含量不高,也反映缺氮影响磷代谢;只有氮磷合理配合施用,植株不同形态含氮磷化合物数量和核酸与蛋白质含量都增高,这时氮磷比例协调,氮磷代谢正常,从而营养机能好,植株生长健壮,产量高并表现出联合效应. 相似文献
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茉莉酸甲酯对中国红豆杉细胞基因表达的mRNA差异显示研究 总被引：5，自引：0，他引：5
茉莉酸甲酯是一种环戊烷衍生物型植物激素，在植物次生代谢物质生物合成中起着重要作用。我们以中国红豆杉悬浮培养细胞为材料，设两组平行实验，一组为阴性对照组，一组以茉莉酸甲酯进行诱导，所得细胞利用mRNA差异显示技术进行分析，研究了茉莉酸甲酯对红豆杉细胞mRNA表达的差异，最终共获得34个差异表达片段。经二次扩增和单引物阴性对照实验及序列测定，共获得9个阳性差异表达片段。与GenBank数据库比对，结果表明其中2个片段与已知基因有较高的同源性，与欧洲赤松（Pinus sylvestris）cDNA克隆的同源性为88％，与南方红豆杉（Taxus mairei）18SrRNA基因的同源性为93％，其余7个差异表达片段与GenBank中所有基因的同源性都非常低，可能代表了红豆杉细胞中的受茉莉酸甲酯诱导的未知基因序列。 相似文献
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I. Andrighetto P. Berzaghi G. Cozzi F. Gottardo M. Zancan 《Journal of Agronomy and Crop Science》1997,179(4):251-256
Spring cut Italian ryegrass was harvested at two different stages of maturity: lake vegetative (EARLY) and flowering (LATE). The wilted forage was round baled and then ensiled by wrapping in plastic film. EARLY harvest reduced dry matter (DM) yield significantly as compared to LATE (5.6 vs. 10.5 t ha−1 ; P < 0.01). However, forage quality both before and after ensiling was better for EARLY with higher crude protein (CP) and non-structural carbohydrates content and a lower amount of cell walls (NDF). Higher pH and the fermentation characteristics confirmed the poor quality of LATE silage, having higher content of butyrate, propionate and acid detergent insoluble nitrogen and a lower concentration of lactic acid.
Dry matter intake of EARLY silage by sheep (average 65.0 ± 7.3 kg LW) fed solely forage ad libitum was 37 % higher than LATE (1386 vs. 1011 g DM day−1 ; P < 0.05) due to its better palatability and digestibility. In vivo DM digestibility of EARLY silage was 76.1 % while it decreased to 58.2 % for LATE silage. Estimated metabolizable energy content of EARLY silage (11.5 MJ kg−1 DM) was 29 % higher than LATE (8.9 MJ kg−1 DM) resulting as similar to the reference value of a high quality perennial ryegrass silage. The forage conservation system of ensiled round bales is effective and recommended when spring cut Italian ryegrass is harvested at an early stage of maturity. 相似文献
Dry matter intake of EARLY silage by sheep (average 65.0 ± 7.3 kg LW) fed solely forage ad libitum was 37 % higher than LATE (1386 vs. 1011 g DM day
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基因芯片技术及其在植物研究中的应用 总被引：3，自引：0，他引：3
基因芯片是一种高通量、快速、平行核酸序列测定及定量分析技术,它是将大量特定序列的核酸片段有序地固定在载体上作为探针与标记核酸分子进行杂交,检测杂交信号的强弱,进而判断样品中靶分子的组成及数量。本文主要综述了基因芯片技术的原理特点及其在植物上的应用。 相似文献
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栝楼雌雄株苗期、花期生理生化指标差异的比较研究 总被引：2，自引：0，他引：2
研究栝楼雌雄株不同发育时期植株相关生理指标的变化,为栝楼植株早期性别判定提供参考。通过定株标记,测定栝楼苗期和花期雌株雄株叶片中的可溶性糖、水溶性酚、内源激素以及核酸的含量。水溶性酚、核酸、生长素(IAA)和赤霉素(GA)的含量随着植株的生长而降低,可溶性糖、脱落酸(ABA)、玉米素(ZR)的含量则随着植株的生长而增加;苗期栝楼雌株叶片中可溶性糖、ABA和ZR的含量均显著高于雄株,水溶性酚和核酸的含量则显著低于雄株,GA的含量在雌雄株之间无显著差异。叶片中的可溶性糖、水溶性酚、核酸、ABA和ZR的含量可作为栝楼早期性别判定的参考指标。 相似文献
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PCR及核酸探针检测耐甲氧西林葡萄球菌mecA基因的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为了解耐甲氧西林葡萄球菌在畜禽间的存在情况,本试验建立针对mecA基因的PCR方法及地高辛标记核酸探针技术,分别用两种方法对75株葡萄球菌分离株进行检测。结果,经PCR方法检出42株耐甲氧西林葡萄球菌,占分离株的56.0%;经核酸探针方法检出47株耐甲氧西林葡萄球菌,占分离株的62.7%,两种方法的总符合率为93.3%。通过本研究证实,在畜禽的体表及体内能够分离到耐甲氧西林葡萄球菌,且有较高的分离率,应该引起兽医工作者的足够重视。 相似文献
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圆黄梨和黄金梨的贮藏保鲜试验研究 总被引：2，自引：0，他引：2
结合新型乙烯抑制剂1-MCP(1-甲基环丙烯)和温度预处理,对圆黄梨和黄金梨的贮藏特性进行试验研究。结果表明,无论是常温贮藏还是冷库低温贮藏,在贮前进行1-MCP处理和适当的温度预处理,都可以显著抑制果实贮藏过程中的软化和可滴定酸含量的下降,使果实的风味和品质好于同期对照,延长果实的贮藏寿命,提高贮藏质量。不同剂量1-MCP处理对圆黄梨和黄金梨果实的保鲜效果无显著差异。过度热处理会加重果实腐烂和褐变,预处理温度以35℃为宜。 相似文献
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Y. Petros A. S. Carlsson S. Stymne H. Zeleke A.‐S. Fält A. Merker 《Plant Breeding》2009,128(6):691-695
Oleic acid content was increased from approximately 5–11% to 80–86% in Guizotia abyssinica (L. f.) Cass. materials from Ethiopia after repeated selection and breeding. Achenes collected from Ethiopia were screened for elevated oleic acid content by half seed technique. The starting materials for breeding were nine plants selected from among 272 seeds analysed and having an average oleic acid content of approximately 21% which is considered to be high compared with the 5–11% reported earlier for niger materials of Ethiopian origin. It was observed that the oleic acid content steadily increased after each round of selection and breeding. The percent oleic acid in the seed oil increased to an average of 35.2% and 53.4% after the first and second round of breeding, respectively and ultimately to over 80% after the third round of breeding. It was also observed that the percent oleic acid in the oil stabilizes and the plants breed true when the oleic acid content in the parental seeds was above 79%. 相似文献
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Maternal inheritance of sugars and acids in peach fruit were investigated during two successive years using reciprocal populations derived from ‘low acid’ (LA) flat peach ‘Zaolupan’ and non-LA round peach ‘Zaoxing’. The reciprocal populations segregated into LA round, LA flat, non-LA round and non-LA flat-fruited offspring. Generally, the reciprocal populations had similar range and mean values of sugar and acid. Mean values were to different degree lower than or similar to mid-parental values. Maternal inheritance did not show significant effects on sugars and acids. Broad sense heritability of sugars and acids was high, ranging from 0.61 to 0.90. The correlations among sugars and acids were studied, and positive correlations were always found between glucose and fructose, and quinate and shikimate. Generally, mean glucose, fructose, sorbitol, quinate and shikimate contents did not show significant difference among LA round, LA flat, non-LA round and non-LA flat-fruited progenies. Mean sucrose and total sugar contents of flat-fruited progenies tended to be higher than round-fruited progenies, while mean malate, citrate and total acid contents did not significantly differ with fruit shape (round vs. flat). 相似文献