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[目的]建立一种高效快速的提取肠道茵群总DNA的方法,即改进的氯仿抽提法,为进一步对肠道茵群的定性和定量提供基础。[方法]通过对多种肠道菌群总DNA提取方法的考察总结,对氯仿抽提法进行改进,采用细菌添加试验的荧光实时PCR检测抽提结果,同时与QIAamp DNA Stool Mini kit法进行比较,以验证所建立的改进的氯仿抽提法的高效性。[结果]改进的氯仿抽提法提取的肠道茵群总DNA量约是QIAamp DNA Stool Mini kit的100倍;同时细菌添加试验的实时荧光定量PCR结果显示,改进的氯仿抽提法提取添加细菌的DNA效率较高。[结论]改进的氯仿抽提法经济、高效、快速,适合大批量的粪便样品的DNA提取。 相似文献
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[目的]建立毛干DNA快速稳定的提取扩增策略,使这一简便取材能在畜牧、野生动物保护等采样困难的领域得以普及应用.[方法]采用PCR缓冲液快速提取及2轮PCR逐级稀释扩增的策略提取扩增黄牛毛干DNA微卫星位点.[结果]该方法可从低至0.1mg（约1 cm长）的毛干中提取得到DNA,并成功扩增核DNA微卫星位点.48份黄牛牛毛样本均成功提得DNA.72份扩增样本,除4份样本扩增效果较差,其余样品均能正常扩增.[结论]该研究方法可快速稳定的提取扩增目标基因,为毛干在相关领域的普及应用奠定了基础. 相似文献
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饱和苯酚-氯仿抽提法与Chelex-100树脂法提取DNA在研究犬STR基因座多态性中的应用比较 总被引：3，自引：0，他引：3
在研究犬STR基因座多态性中,比较使用了饱和苯酚-氯仿抽提法和Chelex-100树脂法,两种方法提取的DNA在扩增后的检测结果均能准确地反映实验结果。尽管从平均峰面积和平均峰高值等指标上,利用Chelex-100树脂法提取的DNA质量和扩增后的检测效果较饱和苯酚-氯仿抽提法差,但Chelex-100树脂提取法更为简单快捷,适合在建立警犬STR基因座等位基因数据库中和犬亲缘关系鉴定中广泛使用。 相似文献
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酚／氯仿抽提法提取绵羊凝血块中基因组DNA 总被引：2，自引：0，他引：2
[目的]对组织DNA提取方法进行改进,建立一种从绵羊凝血块中提取基因组DNA的方法。[方法]将绵羊凝血块用眼科剪剪碎,用组织DNA抽提液裂解细胞,用蛋白酶K消化后,经过酚／氯仿抽提,无水乙醇沉淀获得基因组DNA。用NanoDropND-1000微型分光光度计检测DNA浓度和纯度。用0．8％琼脂糖凝胶电泳检验基因组DNA的完整性。以绵羊微卫星位点BM203为扩增位点,分别以F：5’-GG（汀G11：AcAmGTTCCC-3’,R：5’-CTGCTCCCCACTACTCCTTC-3’为上下游引物,进行PCR扩增试验。PCR产物用1．5％琼脂糖凝胶电泳检测．[结果]提取的DNA浓度为（159．90±0．70）ng／μl,A260／A280比值为1．80±0．01,分子完整,结果理想。以从凝血块中提取的DNA为模板,对绵羊BM203微卫星位点进行了PCR扩增,扩增产物条带整齐、明亮、特导性强,扩增效果好。[结论]该方法简单、实用,提取的DNA可满足后续相关研究对DNA质量的要求,值得推广借鉴。 相似文献
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为了建立快速高效稳定的高质量鸡胚盘DNA提取方法,试验通过收集第X期鸡胚胎,应用酚氯仿抽提法、微量组织DNA提取试剂盒法和优化的硅胶膜吸附法分别提取鸡胚DNA,所提DNA经0.8%的琼脂糖凝胶电泳初步检测,并经PCR进一步分析检验,对不同方法提取DNA的稳定性和质量进行评价。结果表明:微量组织DNA提取试剂盒法提取的基因组DNA比用酚氯仿抽提法提取DNA的方法具有更高的稳定性和更好的质量,而微量组织DNA提取试剂盒法与本试验建立的优化的硅胶膜吸附法提取的基因组DNA稳定性和质量相近,但本试验建立优化的硅胶膜吸附法,无需蛋白酶K消化胚盘组织,因而优化了步骤降低了成本。试验建立了一个简单高效稳定的高质量低成本的第X期鸡胚盘DNA提取方法,为后续的相关研究建立了一个有效的鸡受精蛋胚盘DNA提取方法。 相似文献
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酚/氯仿抽提法提取绵羊凝血块中基因组DNA 总被引：3，自引：1，他引：2
［目的］对组织DNA提取方法进行改进,建立一种从绵羊凝血块中提取基因组DNA的方法。［方法］将绵羊凝血块用眼科剪剪碎,用组织DNA抽提液裂解细胞,用蛋白酶K消化后,经过酚/氯仿抽提,无水乙醇沉淀获得基因组DNA。［结果］提取的DNA浓度为（159.90±0.70）ng/μl,A260/A280比值为1.80±0.01,分子完整,结果理想。以从凝血块中提取的DNA为模板,对绵羊BM203微卫星位点进行了PCR扩增,扩增效果良好。［结论］该方法简单、实用,提取的DNA可满足后续相关研究对DNA质量的要求,值得推广借鉴。 相似文献
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2种提取猪肝基因组DNA方法的比较 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]对2种猪肝基因组DNA提取方法,进行比较研究。[方法]分别采用试剂盒法和常规的氯仿／异戊醇抽提法,提取新鲜猪肝基因组DNA,并对其进行综合分析。[结果]试剂盒方法得到的DNA浓度较低,其OD260nm／OD280nm比值达到2.05,虽然蛋白质除的较干净,但是含RNA较高;而氯仿／异戊醇抽提法得到的DNA浓度高,其OD260nm／OD280nm比值1.88,纯度较高,且成本低。[结论]氯仿／异戊醇法对猪肝基因组DNA提取效果优于试剂盒法。 相似文献
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为探讨小蠹科昆虫基因组DNA的提取方法,分别以单头削尾材小蠹、削尾材小蠹足部肌肉组织以及多年75%酒精浸渍标本为研究对象,采用经典的酚仿抽提法、改良的CTAB法、SDS法及动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒(即磁珠法)4种方法提取小蠹基因组DNA,对提取的基因组DNA进行分光光度值的测定以及COⅠ基因扩增。结果表明:4种方法均可从单头标本中提取总DNA;对于75%酒精浸渍2年的标本,4种方法均适用,大于2年的浸渍标本,仅磁珠法适用,且磁珠法适合微量组织总DNA的提取。 相似文献
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几种提取乌苏里貉毛囊核酸方法的比较(英文) 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]该研究旨在探讨提取乌苏里貉毛囊核酸的可靠方法。[方法]本实验分别利用改进的有机酚法,chelex-100法,PCR缓冲液法和试剂盒法,从乌苏里貉毛发中提取核酸DNA,对所提核酸进行PCR扩增及电泳分析,并且对四种方法进行比较。[结果]经分光光度计测定和凝胶电泳检测,本实验研究结果表明chelex-100提取的核酸有蛋白质等杂质,PCR缓冲液法提取核酸浓度低有机酚法和试剂盒法提取的DNA浓度高,且没有杂带。[结论]本研究为进一步探索高效,简便的提取乌苏里貉毛囊核酸DNA提供了有力的科学理论基础。 相似文献
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[目的]探讨黄秋葵(Abelmoschus esculentus)种子中咖啡碱的提取方法,为其进一步开发利用奠定基础。[方法]采用微波提取法、回流提取法和超声提取法3种方法提取黄秋葵种子中的咖啡碱,并采用可见-紫外分光光度法测定其含量。[结果]采用微波提取法时,在中等功率、微波时间8 min条件下,所得的咖啡碱的得率最高,为0.149%。采用回流提取法时,在提取剂水∶乙醇为1∶2、提取时间为1 h条件下,所得的咖啡碱的得率最高,为0.156%。采用超声提取法时,在提取剂用量为25 ml、超声时间为30 min条件下,所得的咖啡碱的得率最高,为0.142%。[结论]该研究得出了采用微波提取法、回流提取法和超声提取法提取黄秋葵种子中咖啡碱含量的最方便最有效的提取方法,可为黄秋葵种子中有效成分提取方面的研究奠定基础。 相似文献
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甘薯薯块富含淀粉、酚类等物质,不利于DNA提取。为了研究甘薯薯块DNA提取的最佳方法,采用经典CTAB法、改良CTAB法一、改良CTAB法二和SDS提取法,对甘薯薯块总DNA提取效果进行比较,以试剂盒法提取结果作对照。结果表明:采用经典CTAB提取法和SDS提取法获得的薯块DNA含有较多杂质,且降解严重,样品质量低;CTAB改良法一能降低DNA样品中多糖等物质的含量,但DNA存在一定程度降解,且耗时较长;CTAB改良法二提取效果最佳,杂质含量低且DNA降解少,与试剂盒提取效果最接近,是一种较为理想的甘薯薯块DNA提取方法。 相似文献
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枸杞多糖提取方法及两种不同产地枸杞中多糖含量的比较研究 总被引：8，自引：2，他引：6
采用传统提取方法和超声提取法提取来自两种不同产地的枸杞(即宁夏枸杞和新疆精河枸杞)中的有效成分枸杞多糖,对其得率和含量进行分析比较.结果表明,以传统法提取宁夏枸杞多糖得率为7.87;,新疆精河枸杞的多糖得率为9.41;;而以超声提取法提取宁夏枸杞多糖得率为8.61;,精河枸杞的多糖得率为13.77;.证明超声提取法提取枸杞多糖具有快速、高效、节能、不破坏提取物性状等特点,与传统提取法相比能够提高药材有效成分的利用率.同时还表明,采用同种提取方法提取出的新疆精河枸杞的多糖得率高于宁夏枸杞. 相似文献
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菟丝子总黄酮不同提取方法比较 总被引：2，自引：0，他引：2
[目的]筛选菟丝子总黄酮的提取方法,为充分利用开发菟丝子总黄酮资源提供科学依据。[方法]采用回流提取法、冷浸法、超声提取法、微波辅助萃取法、索氏提取法5种方法提取菟丝子中总黄酮含量,以芦丁为对照品,通过紫外分光光度法对总黄酮的含量进行精密测定,对提取效率进行综合比较。[结果]5种提取方法所得总黄酮含量从大到小依次为回流提取法(31.24 mg/g)、微波辅助萃取法(16.84 mg/g)、索氏提取法(12.82 mg/g)、超声提取法(9.74 mg/g)、冷浸法(8.88 mg/g),回流提取法所得总黄酮含量最高。[结论]回流提取法应用于菟丝子总黄酮的提取,具有提取速度快、提取效率高的优点。 相似文献