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1.
CpG-DNA对金黄色葡萄球菌诱导的乳腺炎大鼠的保护研究 总被引：5，自引：0，他引：5
【目的】建立金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）感染的大鼠乳腺炎模型，并观察CpG-DNA对乳腺的保护作用。【方法】18只雌鼠分3组(n=6)，产后72h分别灌注磷酸盐缓冲液（phosphate buffer solution，PBS）（C组）、2×105CFU•ml-1（L组）和2×1012CFU•ml-1 (H组)金葡菌到第四对乳腺内，24 h处死。L组乳腺病变轻微，H组腺泡结构破坏严重，并有大量嗜中性粒细胞（polymorphonuclear neutrophils，PMN）浸润；H组乳腺组织TNF-α、IL-6水平显著上升。选择2×1012CFU•ml-1为诱发剂量观察CpG-DNA对乳腺的保护作用：72只雌鼠分成对照和试验组(n=36)，对照组产后0 h肌注PBS；试验组肌注CpG-DNA，72 h后灌注金葡菌到第四对乳腺内。分别于灌注前（定义为0 h），灌注后8、16、24、48和72 h（n=6）处死。【结果】感染初期试验组乳腺腺泡内PMN较对照组浸润迅速。试验组乳腺组织白细胞介素-6（interleukine-6，IL-6）在16、24和48 h显著高于对照组。CpG-DNA能显著提高0、24和72 h乳腺组织肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平。试验组8、16和72 h的乳腺组织金葡菌数显著低于对照组。CpG-DNA能显著提高乳腺组织中其特异性受体TLR-9（toll-like receptor-9）mRNA表达水平。【结论】CpG-DNA对金葡菌感染诱发大鼠乳腺炎的乳腺有保护作用。 相似文献
2.
【目的】本试验通过卡介菌多糖核酸对内毒素诱发的实验性山羊乳腺炎乳腺组织的保护研究，探讨灌注免疫增强剂BCG-PSN对乳腺组织的影响，研究调动乳腺自身的防御功能，以防治乳腺炎的发生。【方法】选取泌乳初期健康睢宁白山羊6只，左乳区经过乳头管灌注卡介菌多糖核酸5 ml，右乳区灌入5 ml注射用生理盐水作为对照，连灌6 d。第7天按50 µg•kg-1体重分别向左、右乳区灌注大肠杆菌内毒素。灌注前及灌注后0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、24 h观察山羊整体及乳房局部变化。灌注24 h后，处死动物，取乳腺组织，部分Bouin氏液固定、部分液氮保存。【结果】临床症状及病理切片观察均显示，山羊表现典型的急性乳腺炎症状。与灌注生理盐水对照相比，乳腺灌注卡介菌多糖核酸能显著降低乳腺组织中部分炎症相关因子的含量及其基因表达水平。其中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）、髓过氧化物酶（MPO）、碱性磷酸酶（AKP）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）活性显著降低（P<0.05）；IL-1β、TNF-α的含量及其mRNA表达水平均显著降低（P<0.05），IL-6的含量显著降低（P<0.05），其mRNA表达水平有所降低但差异不显著（P>0.05）。【结论】灌注卡介菌多糖核酸可以抑制乳腺组织内IL-1β、TNF-α等炎性细胞因子及和炎症相关酶的过度释放、减轻炎症因子对乳腺上皮细胞的损伤，对内毒素诱发的山羊实验性乳腺炎有较强的保护作用。 相似文献
3.
实验性乳腺炎山羊乳和血液中相关酶与细胞因子的变化 总被引：2，自引：0，他引：2
8只泌乳期的健康睢宁白山羊,产后72 h分别用内毒素(LPS)和灭菌生理盐水经乳头管灌注左右侧乳房。于灌注后0、3、6、9、24 h分别采集颈静脉血和左右两侧乳房的乳汁,分析相关酶活性和细胞因子含量。结果表明:在实验乳腺(灌注LPS)的乳中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG ase)、碱性磷酸酶(ALP)活性在24 h内持续上升,髓过氧化物酶(M PO)活性先上升后下降;而在血清中NAG ase、M PO活性先下降后上升,ALP活性在24 h内持续下降。TNFα-、IL-1、IL-6细胞因子水平在实验乳腺的乳中先上升后下降,S IgA水平在24 h内持续上升;血清中这些细胞因子也是先上升后下降;而灌注生理盐水的对照乳腺的乳中酶和细胞因子水平均无显著变化。 相似文献
4.
虾青素对脂多糖通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路诱导的IPEC-J2细胞炎症的影响 总被引：1，自引：1，他引：0
【目的】研究虾青素(AST)对脂多糖(LPS)通过TLR4/My D88/NF-κB信号通路诱导的IPEC-J2细胞炎症的影响。【方法】采用MTT法确定虾青素和LPS对IPEC-J2细胞和转染IPEC-J2细胞的最佳处理浓度和处理时间,在处理后采用实时荧光定量PCR检测IPEC-J2细胞和转染IPEC-J2细胞炎症因子NF-κB、TNF-α、IL-6和IL~(-1)β的m RNA相对表达量,采用ELISA检测上述炎症因子的分泌量。【结果】当处理3 h,虾青素浓度达到150μmol·L~(-1)时,IPEC-J2细胞和转染IPEC-J2细胞活力达到峰值;当处理6 h,LPS质量浓度达到100 ng·m L~(-1)时,IPEC-J2细胞和转染IPEC-J2细胞活力达到峰值。与对照组相比,LPS组IPEC-J2细胞NF-κB、TNF-α、IL-6、IL~(-1)β的m RNA相对表达量和分泌量显著升高(P0.05);与LPS组相比,AST+LPS组NF-κB、TNF-α、IL-6、IL~(-1)β在IPEC-J2细胞中的m RNA相对表达量和分泌量显著降低(P0.05),而在转染IPEC-J2细胞中的炎症因子m RNA相对表达量和分泌量均无显著变化(P0.05)。【结论】虾青素可以抑制细胞炎症反应,且对细胞的保护作用与TLR4/My D88/NF-κB信号通路相关。 相似文献
5.
【目的】旨在探明槲皮素对LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞(bEECs)炎症反应的作用。【方法】用组织块和差时消化法分离纯化bEECs, 1μg/mL脂多糖(LPS)作用12 h后,添加不同浓度槲皮素(10, 20, 40μM)孵育12 h,采用Western blot法检测TLR4和MyD88蛋白的表达,同时通过qRT-PCR法检测炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的相对表达量。【结果】经CK18免疫荧光染色证实获得的bEECs纯度较高。LPS作用后,细胞炎症因子的表达显著高于对照组(P<0.01)。相比于LPS组,槲皮素孵育后,可降低炎症因子和TLR4/MyD88的表达(P<0.01)。【结论】槲皮素可通过抑制TLR4/MyD88的表达,改善LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞的炎症反应,该结果将为奶牛子宫内膜炎的治疗提供了新的研究思路和理论依据。 相似文献
6.
《四川农业大学学报》2014,(4):436-441
【目的】研究新城疫病毒对鸡胚成纤维细胞中TLRs抗病毒信号通路和促炎症相关细胞因子的诱导作用。【方法】采用分离培养的原代鸡胚成纤维细胞感染中等毒力的新城疫病毒,并在感染后的4、8、12、16、24h收集细胞,利用定量PCR检测TLRs信号通路及促炎症相关细胞因子在细胞新城疫病毒感染过程中的表达变化。【结果】结果显示,TLR3、TLR7、TLR15,及其衔接蛋白基因MYD88、TRIF,以及下游基因IFN-α、IFN-β、Mx的表达量在病毒感染后呈现出显著上调(P0.05)。同时促炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量在病毒感染后也表现出显著上调(P0.05)。【结论】研究表明,在鸡胚成纤维细胞对新城疫病毒的识别过程中,由TLR3、TLR7、TLR15介导抗病毒信号通路,同时诱导产生促炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α,并在新城疫病毒诱导的炎症反应过程中发挥重要的作用。 相似文献
7.
黄芪多糖对内毒素诱发大鼠实验性乳腺炎的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
选取40只SD雌性大鼠使之交配受孕。在确定其怀孕后,30只孕鼠随机分成正常对照组、阳性对照组和试验组,每组10只。试验组大鼠每天按100 mg/kg体重灌喂黄芪多糖(APS),直至试验结束,而对照组大鼠灌喂相应体积的生理盐水(PSS)。孕鼠于产后72 h分别用灭菌PSS和50μg大肠杆菌内毒素经乳头管灌注到大鼠第4对乳腺内。灌注后24 h处死大鼠,取乳腺组织和颈静脉血进行指标测定。结果显示,阳性对照组大鼠乳腺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活性,与正常对照组相比显著升高(P<0.05);试验组大鼠乳腺组织中TNF-α浓度、NAGase活性与阳性对照组相比,显著降低(P<0.05)。结果表明,灌喂APS可以抑制乳腺组织内炎性细胞因子TNF-α的过度释放,对内毒素诱发的大鼠实验性乳腺炎有一定的保护作用。 相似文献
8.
通过建立LPS诱导的大鼠乳腺上皮细胞损伤模型,探究乳腺上皮细胞在致病原存在时的主动防御功能和免疫生理调节剂CpG-ODN对LPS诱导乳腺上皮细胞损伤的保护作用.结果显示,一定剂量LPS与乳腺上皮细胞共培养后,与正常对照组相比,其NAGase、iNOS酶活性显著升高(P<0.05),TNF-α、IL-1β水平显著升高(P<0.05).与阳性对照组相比,低、中、高剂量CpG-ODN处理组TNF-α、IL-1β水平均显著降低(P<0.05),并呈剂量依赖性;IL-2水平显著升高(P<0.05).中、高剂量CpG-ODN处理组NAGase酶活性显著降低(P<0.05);高剂量CpG-ODN处理组iNOS酶活性显著降低(P<0.05).说明,一定剂量LPS能够对大鼠乳腺上皮细胞造成损伤,而Cpg-ODN可以抑制炎性相关细胞因子和炎性相关酶的过度释放,对LPS诱导的大鼠乳腺上皮细胞的损伤有保护作用. 相似文献
9.
【目的】利用虾青素较强的抗氧化特性,通过探讨黏膜屏障重塑对脂多糖（LPS）诱导的牛子宫内膜细胞炎症的影响,为牛子宫内膜细胞炎的预防和治疗提供理论基础。【方法】培养液中添加1 μg·mL -1 LPS,培养子宫内膜细胞6 h,检测培养液中炎症因子TNF-α和IL-6含量,建立细胞的体外炎症模型。在此基础上去掉培养液,重新加入含1×10 -6 mol·L -1 虾青素的新鲜培养液,继续培养细胞24 h。对照组为不添加LPS或AST,LPS组为仅添加LPS,AST组为添加LPS和AST。采用ELISA法检测培养液中TNF-α和IL-6炎症因子分泌量以及细胞SOD和CAT酶活性,利用流式细胞仪检测细胞内活性氧簇（ROS）水平,利用免疫荧光染色检测细胞紧密连接蛋白Claudin、CDH1、TJP1的分布情况,利用荧光定量RT-PCR法和Western Blot法分别检测Claudin、CDH1、TJP1基因的mRNA表达水平和蛋白表达水平。【结果】利用1 μg·mL -1 LPS培养子宫内膜细胞6 h,检测发现培养液中炎症因子IL-6和TNF-α分泌水平显著高于对照组（P小于0.05）,说明LPS诱导子宫内膜细胞产生炎症反应。与对照组相比,细胞内ROS水平显著增加（P小于0.05）,SOD和CAT酶活性都显著降低（P小于0.05）,说明LPS诱导的子宫内膜细胞炎症造成了氧化损伤。加入1×10 -6 mol·L -1 虾青素培养细胞24 h后,发现培养液中IL-6和TNF-α因子的分泌水平显著低于LPS组（P小于0.05）,同时ROS阳性细胞比率显著下降（P小于0.05）,SOD和CAT酶活性都显著升高（P小于0.05）。LPS组与对照组相比,细胞膜处Claudin、CDH1、TJP1蛋白的荧光信号减弱,这3种紧密连接蛋白的mRNA和蛋白表达水平也都显著降低（P小于0.05）。加入1×10 -6 mol·L -1虾青素培养24 h后,与LPS组相比,在细胞边缘和细胞核内可以检测到荧光信号很强的Claudin、CDH1、TJP1蛋白,而且这3种紧密连接蛋白的mRNA和蛋白表达水平也都显著升高（P小于0.05）。【结论】虾青素通过降低子宫内膜细胞因炎症反应产生的氧化损伤,减轻炎症导致的子宫内膜细胞紧密连接结构损伤,对子宫内膜的物理免疫屏障起保护作用,为牛子宫内膜炎的预防和治疗提供理论借鉴意义。 相似文献
10.
为了研究脂磷壁酸对小鼠乳腺组织TLR2表达的影响,试验采用小鼠为模型,用不同剂量的LTA对小鼠乳腺进行灌注,采用组织切片方法观察小鼠乳腺组织的病理组织学变化,Real-time PCR方法检测乳腺组织中TLR2以及炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6 m RNA的表达变化。结果表明,对照组乳腺腺泡正常,灌注LTA乳腺腺泡壁增厚,乳腺腺泡有中性粒细胞的浸润。TNF-α、IL-1β、IL-6 m RNA表达水平比未注射LTA小鼠显著升高(P0.05)。结果表明TLR2介导的信号途径能够使炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达。 相似文献
11.
MIAO Jin-feng ZHANG Yuan-shu HUANG Guo-qing MA Hai-tian ZOU Si-xiang ZHU Yu-min 《中国农业科学(英文版)》2009,8(8)
The aim of this study was to evaluate, in rats, the changes in the T helper type 1 (Th 1)/Th2 radio in mammary glands after an intramammary infusion of lipopolysaccharide (LPS) and to characterize the moderating effects of the polysaecharide nucleic acid of Bacillus Calraette Guerin (BCG-PSN) on the mammary gland. In the control group, the levels of IL-2 and INF-γ, mRNA expression increased, whereas IL-4 mRNA expression decreased after LPS challenge. As a consequence, the INF-γ/IL-4 mRNA ratio was significantly higher at 3, 6, and 9 h post-infusion (PI) compared to the control value (O h; P<0.01).BCG-PSN increased mRNA expression of both INF-γ' and IL-4 before infusion of LPS. LPS challenge significantly the reduced Th1/Th2 eytokine ratio due to Th1 cytokine IFN-γ suppression and Th2 cytokine IL-4 upregulation compared with the control group. A significant reduction ofN-acety1-β-D-glucosaminidase (NAGase) was observed at 24 h PI in the BCG-PSN treatment group compared to the control group (P<0.05). Thus, it was demonstrated that level of BCG-PSN might change the Th1/Th2 ratio mainly by enhancing the Th2 immune response. This is the first report of a Th1/Th2 change induced by coliform mastitis and characterization of the effect of BCG-PSN on mammary gland inflammation. This study makes a better understanding of the mechanisms of coliform mastitis and provides a putative novel strategy for the prevention and/or treatment of mastitis. 相似文献
12.
MIAO Jin-feng ZHANG Yuan-shu HUANG Guo-qing MA Hai-tian ZOU Si-xiang ZHU Yu-min 《中国农业科学(英文版)》2009,8(8):1010-1018
The aim of this study was to evaluate, in rats, the changes in the T helper type 1（Th1）/Th2 radio in mammary glands after an intramammary infusion of lipopolysaccharide （LPS） and to characterize the moderating effects of the polysaccharide nucleic acid of Bacillus Calmette Guerin （BCG-PSN） on the mammary gland. In the control group, the levels of IL-2 and INF-7 mRNA expression increased, whereas IL-4 mRNA expression decreased after LPS challenge. As a consequence, the INF-γ/IL-4 mRNA ratio was significantly higher at 3, 6, and 9 h post-infusion （PI） compared to the control value （0 h; P〈0.01）. BCG-PSN increased mRNA expression of both INF-γ and IL-4 before infusion of LPS. LPS challenge significantly the reduced Th1/Th2 cytokine ratio due to Thl cytokine IFN-γ suppression and Th2 cytokine IL-4 upregulation compared with the control group. A significant reduction of N-acetyl-β-D-glucosaminidase （NAGase） was observed at 24 h PI in the BCG-PSN treatment group compared to the control group （P〈 0.05）. Thus, it was demonstrated that level of BCG-PSN might change the Th1/Th2 ratio mainly by enhancing the Th2 immune response. This is the first report of a Th1/Th2 change induced by coliform mastitis and characterization of the effect of BCG-PSN on mammary gland inflammation. This study makes a better understanding of the mechanisms of coliform mastitis and provides a putative novel strategy for the prevention and/or treatment of mastitis. 相似文献
13.
【目的】探索恩诺沙星联合脂多糖粗提液（lipopolysaccharide crude extract,LPS）诱导鸡肝损伤中机体免疫功能变化,并研究复方甘草酸单胺粉（compound ammonium glycyrrhizin soluble powder,CAG）护肝及免疫调节作用和机理。【方法】104 羽海蓝蛋鸡随机分为空白组（I）,模型组（II）,CAG预防组（III）、CAG治疗高、低剂量（IV、V）组,除I组外,各组连续3 d灌服恩诺沙星（100 mg•kg-1,1次/天）,于第3次灌药时腹注LPS（4 mL•kg-1）诱发肝损伤,III组建模前3 d以40 mg•L-1混饮CAG,持续至建模结束;IV、V组腹注LPS后分以22.5、7.5 mg•kg-1灌服CAG,2 次/天,重复3 d。建模后6、24、48 h采血并剖检。【结果】与I组相比,II组鸡血清ALT、AST、TNF-α、IL-1、IL-6水平 6、24和48h显著升高,外周血中CD3+、CD4+和CD8+ T细胞百分含量 6和24 h显著降低,48 h显著升高,肝组织病变明显。与II组相比：III组ALT、TNF-α 和IL-6 6 h,AST 6和24 h,CD3+、CD4+ 和CD8+ T细胞48 h降低显著;IV组ALT、AST、TNF-α、IL-6 24和48 h,IL-1、CD3+、 CD4+ 和CD8+ T细胞 48 h 显著降低,CD3+ T细胞6和24 h,CD4+ T细胞24 h显著升高;V组中CD8+ T细胞在48 h显著降低;其余差异不显著。IV组较其它组肝组织病变有最大改善。【结论】恩诺沙星联合LPS诱发肝损伤同时致炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6释放和CD3+细胞及其亚群CD4+ 和CD8+发生先低于正常水平,后又显著高于正常水平现象,复方甘草酸单胺可能通过抑制以上3种炎性因子释放,双向调节外周血T细胞亚群恢复正常水平而发挥护肝作用,但作用与给药剂量和时机相关。 相似文献
14.
【目的】“仔猪早期断奶应激综合征”给养猪业带来了巨大的经济损失。中药制剂柴术抗激散(CZKJS)通过现代制药技术制成柴术抗激颗粒(CZKJKL),已被证实其对早期断奶仔猪应激及早期断奶仔猪脂多糖（LPS）免疫应激都具有明显的缓减作用。现进一步探究CZKJKL对LPS免疫应激断奶大鼠应激相关神经递质、细胞因子和HPA轴相关激素的影响,从机理上证实其抗应激作用。【方法】选取体重相近的18日龄断奶的Wistar大鼠72只,随机分为3个处理组,即Ⅰ组（空白对照组）、Ⅱ组（LPS免疫应激模型组）、Ⅲ组（LPS+CZKJKL组）。每个处理设6个重复,每个重复4只。在18-24日龄期间,Ⅲ组的大鼠每天灌服5 000 mg·kg-1BW柴术抗激颗粒,Ⅰ组、Ⅱ组的大鼠每天灌服等剂量生理盐水;21日龄时,Ⅱ组、Ⅲ组的大鼠腹腔注射4 mg·kg-1BW的LPS,Ⅰ组的大鼠腹腔注射等剂量生理盐水,注射后6 h采血并取样。测定指标有：①海马：去甲肾上腺素(NE)和5-羟色胺(5-HT);②下丘脑：β-内啡肽（β-EP）和促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）;③血清：β-内啡肽(β-EP)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(COR)、白介素-1β (IL-1β)、白介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、一氧化氮(NO)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)。【结果】与Ⅰ组相比,Ⅱ组大鼠海马NE和5-HT的含量均极显著升高（P＜0.01）,下丘脑β-EP的含量极显著升高（P＜0.01）,血清β-EP、IL-1β、IL-6、TNF-α、NO、ACTH、COR的含量均极显著升高（P＜0.01）,血清iNOS的活性极显著增强（P＜0.01）。与Ⅱ组相比,Ⅲ组大鼠海马NE和5-HT的含量均极显著降低（P＜0.01）,下丘脑β-EP的含量极显著降低（P＜0.01）,血清β-EP、IL-1β、IL-6、TNF-α、NO、ACTH、COR的含量均极显著降低（P＜0.01）,血清iNOS的活性极显著减弱（P＜0.01）。【结论】CZKJKL可通过有效调节LPS免疫应激状态下机体神经-内分泌-免疫系统相关神经递质、细胞因子和HPA轴激素的紊乱而发挥其抗免疫应激作用。 相似文献
15.
【目的】研究脂多糖(LPS)诱导猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)来建立氧化及炎症模型,分析豆腐果苷(HEL)抗炎及抗氧化的作用机理。【方法】试验分为5组:对照组,LPS组,HEL(25、50和100 μM)+LPS组。【结果】HEL会显著降低炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6在mRNA水平的表达;LPS会显著提高氧化相关蛋白(Nrf2和HO-1)的表达和抗氧化酶(SOD和CAT)的活性,显著减少氧化产物(MDA)的含量,HEL表现出相反的结果,显著降低了Nrf2和HO-1的表达量和SOD和CAT的活性,显著增加了MDA的含量。【结论】HEL会缓解LPS所引起的IPEC-J2细胞的氧化及炎性损伤,一定程度上保护细胞免受伤害。 相似文献
16.
运输应激对猪免疫机能的影响及其细胞因子的调控 总被引：5，自引：1，他引：4
【目的】探讨不同时间运输应激对猪免疫机能的影响及其相关细胞因子的调控作用。【方法】将不同运输时间的猪血清稀释后单独或与植物血凝素A（PHA）和脂多糖（LPS）混合后分别刺激正常猪外周血淋巴细胞,用噻唑蓝（MTT）比色分析法分别检测淋巴细胞增殖指数;另用ELISA方法检测试验猪血清中IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10及TNF-a含量的动态变化;分析淋巴细胞增殖指数的变化与各种细胞因子之间的相关性。【结果】经1 h、2 h、4 h的运输应激后,1﹕32稀释的受试猪血清对T、B淋巴细胞转化能力均有影响,都是先升高,并以1 h运输猪血清的刺激能力最强(P＜0.05),随后开始下降,到4 h时降到最低。血清IL-2、IL-6、IL-10的含量变化均是在运输后1 h时达到最高,随后开始下降并在4 h时降到最低。其中IL-6、IL-10在4 h时和对照组相比呈极显著的下降（P＜0.01）,IL-24 h和1 h相比也呈现显著性下降(P＜0.05）,IL-1β、IL-4及TNF-a等3种细胞因子含量运输前后和运输过程中均没有显著性的变化。【结论】运输应激可引起猪免疫机能的变化,且对免疫机能的影响存在时效性;相关性分析表明,血清中IL-6的水平有望成为一种重要的猪应激性免疫机能变化的判定指标。 相似文献
17.
【目的】探讨五指山小型猪近交系主动脉内皮细胞体外分离培养和鉴定的方法,研究LPS对内皮细胞TLR2表达的影响及TLR2介导内皮细胞炎症因子的表达情况。【方法】以3—4月龄的五指山小型猪近交系为试验材料,取其胸腹主动脉,采用0.1%I型胶原酶消化分离主动脉内皮细胞。利用细胞吸收DiI-Ac-LDL试验和流式细胞仪检测CD31的特异表达两种方法进行内皮细胞的鉴定。1 μg•mL-1LPS刺激内皮细胞0、6、8和12 h,实时荧光定量PCR检测TLR2和TLR4的表达量;1 μg•mL-1LPS刺激内皮细胞12 h后,10 μg•mL-1LTA孵育0、6和12 h,实时荧光定量PCR检测炎症因子IL-6、IL-8和黏附分子ICAM-1的表达量。【结果】分离得到的主动脉内皮细胞呈铺路石样整齐排列,且生长状态良好;细胞膜上表达CD31分子和Ac-LDL的受体,证实分离得到的细胞是血管内皮细胞。LPS刺激后细胞TLR2 mRNA水平的表达量明显升高（P＜0.05）,而TLR4 mRNA水平表达量无明显变化。添加LTA孵育后,细胞炎症因子IL-6、IL-8和黏附分子ICAM-1的mRNA水平表达量较对照明显升高（P＜0.05）。【结论】成功建立了五指山小型猪近交系主动脉内皮细胞体外培养模型,并检测到TLR2在LPS刺激内皮细胞后表达量升高,能够介导细胞炎症相关因子的表达。 相似文献
18.
蜂胶提取物对脂多糖诱导小鼠急性乳腺炎及乳腺屏障功能的保护作用 总被引：2，自引：0，他引：2
【背景】奶牛乳腺炎是一种常见、多发的奶牛疾病,不仅危害奶牛健康,同时也造成重大经济损失。传统治疗奶牛乳腺炎的药物主要是抗生素,极易造成抗生素耐药与滥用。开发替代抗生素的方法用于奶牛乳腺炎的防治具有现实意义。蜂胶是西方蜜蜂采集植物树脂,混合自身上颚腺、蜡腺的分泌物形成的具有良好抗炎、抗菌活性的天然产物,对防治奶牛乳腺炎具有潜在开发利用价值。尽管近年来国内外有一些有关蜂胶防治乳腺炎方面的报道,但蜂胶如何影响乳血屏障功能,目前国内外尚无相关研究报道。【目的】利用细菌脂多糖（lipopolysaccharides, LPS）诱导的小鼠急性乳腺炎模型,评估中国蜂胶乙醇提取物对小鼠急性乳腺炎的保护作用及其对乳腺细胞紧密连接蛋白表达的影响,为后续利用蜂胶防治奶牛乳腺炎的深入研究奠定理论基础。【方法】采用超高效液相色谱串联三重四级杆质谱（UHPLC-QqQ-MS/MS）对中国蜂胶乙醇提取物中主要的多酚类化合物进行种类和含量测定。试验分为空白对照组、LPS模型组、中国蜂胶提取物试验组以及地塞米松阳性对照组。ICR雌性小鼠连续灌胃中国蜂胶提取物或阳性对照药物7d后,模型组、试验组和阳性对照组经第四、五对乳头管注射1 mg·kg-1体重 LPS,建立小鼠急性乳腺炎模型,24 h后处死,收集乳腺组织样本。以苏木精-伊红（H.E）染色法、天狼星红染色法评估小鼠乳腺组织病理变化;利用酶联免疫吸附法（ELISA）测定炎症因子释放量;利用荧光定量PCR测定小鼠乳腺组织中紧密连接蛋白（Occludin、Cluadin-1、ZO-1） mRNA的表达情况;最后利用免疫组化技术研究小鼠乳腺紧密连接蛋白（Occludin和ZO-1）表达和分布情况,利用以上指标综合评判中国蜂胶乙醇提取物的抗乳腺炎活性及其对乳腺紧密连接蛋白的影响。【结果】基于UHPLC-QqQ-MS/MS,建立了中国蜂胶乙醇提取物中主要的17种多酚类化合物的精确定量方法,检测结果表明含量最高的5种化合物及其含量分别为：高良姜素（12.88±0.57 μg·mg-1）、短叶松素3-乙酸酯（12.93±0.59 μg·mg-1）、松属素（8.56±0.27 μg·mg-1）和短叶松素（8.52±0.25 μg·mg-1）。动物试验结果表明,灌胃中国蜂胶提取物能够显著缓解LPS注射导致的乳腺组织中炎性细胞浸润、缓解乳腺腺泡结构损伤;同LPS组相比,中国蜂胶提取物灌胃处理可有效抑制LPS导致的小鼠乳腺组织中炎症因子（IL-1β,IL-6和IL-10）的释放,并可提高小鼠乳腺中紧密连接蛋白的mRNA表达,缓解LPS注射所导致的乳腺上皮细胞紧密连接的破坏。【结论】中国蜂胶提取物对脂多糖诱导小鼠乳腺炎具有良好的预防效果,并可有效促进乳腺紧密连接蛋白的表达,维持乳腺中紧密连接结构完整性,保护血乳屏障,但蜂胶对紧密连接影响调控的分子机理还需进一步深入研究。 相似文献