农杆菌介导玉米幼胚遗传转化体系的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

孙传波  郭嘉  袁英 《湖北农业科学》2014,(12):2743-2746,2762

以玉米(Zea mays L.)HiII的幼胚为外植体,β-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)为报告基因,通过农杆菌介导转化法对影响遗传转化体系的外植体大小、农杆菌浓度、热预处理温度、侵染时间、共培养及恢复培养时间、抗生素、筛选剂等因素进行优化,以建立农杆菌介导玉米幼胚遗传转化体系。结果表明,幼胚大小为1.0~1.5 mm,农杆菌菌液的OD600 nm为0.5,40℃热处理3 min,侵染8 min,共培养3 d和恢复培养4 d,100 mg/L羧苄青霉素作为抑菌剂,双丙氨膦作为筛选剂时为最佳遗传转化条件。通过该优化体系已获得多种转基因玉米材料,表明该体系具有较高的可重复性和可靠性。  相似文献   

根癌农杆菌介导的玉米自交系A188愈伤组织再生条件的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

仇平平  辛相启  刘文浩  苏文敏  竺晓平 《山东农业科学》2012,44(12):28-31

以A188玉米自交系的愈伤组织为材料,研究了影响农杆菌介导玉米转化和再生的各种因素,建立了该自交系的遗传转化体系。结果表明,1.0～1.5 mm的幼胚最易诱导出胚性愈伤组织;在侵染液和共培养基中加入乙酰丁香酮能显著提高转化效率;合适的菌液浓度(OD600=0.4)、共培养时间(3 d)、共培养温度(24℃)有利于提高转化效率。  相似文献   

农杆菌介导玉米芽尖生长点遗传转化体系的建立     

《西南农业学报》2016,(5)

以5个优良玉米自交系的芽尖生长点为外植体,通过农杆菌介导法将表达载体p CAMBIA3301转入玉米自交系中,研究了影响玉米遗传转化的若干因素,初步建立了良好的玉米遗传转化体系。结果表明,农杆菌侵染液浓度OD600值为0.6、共培养时间2 h、真空处理时间为10 min时,选用自交系郑58作为转化受体,可以明显提高遗传转化效率。  相似文献   

根癌农杆菌介导超甜玉米自交系幼胚转化研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

胡建广  祁喜涛 《广东农业科学》2004,(Z1):32-34

以超甜玉米自交系S1及其杂交种粤甜3号的幼胚为材料,建立了农杆菌介导转化的条件,获得可育的转基因超甜玉米株系。研究结果显示:农杆菌浓度、共培养温度与时间对转化效率有重要影响,最高转化效率为24.6%。Southern杂交证实,外源基因已经整合到转基因超甜玉米株系的基因组中。  相似文献   

根癌农杆菌介导的玉米幼胚遗传转化体系     

李金红  付莉  关晓溪  霍岩  陶承光  史振声 《沈阳农业大学学报》2018,(3)

为建立以潮霉素为选择标记的农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的玉米高效遗传转化体系,本研究利用携带p MDC141-CYP79A1(含GUS基因)质粒的农杆菌浸染玉米A188幼胚,共培养7d后通过GUS基因瞬时表达率,研究农杆菌的菌液浓度、热激时间和浸染时间等因素对玉米幼胚遗传转化效率的影响。研究结果表明:随着农杆菌的菌液浓度的增加、热激时间和浸染时间的延长,GUS表达效率均呈现先增后减的趋势;当农杆菌菌液的OD_(600)为0.8、热激预处理时间3min和浸染时间5min时,其GUS瞬时表达率均最高,分别为46.8%、46.4%和51.7%。并在最佳条件下将GUS基因转入到玉米幼胚,以潮霉素为选择标记,进行3次选择培养,将重新分化的抗性愈伤组织进一步分化成苗,获得56株潮霉素抗性植株,经PCR分子鉴定,获得22株阳性植株,初步建立根癌农杆菌介导的高效玉米幼胚遗传转化体系,为以抗潮霉素基因作为筛选标记的玉米遗传转化和基因功能验证提供技术基础,获得的抗潮霉素转化植株为玉米育种提供新材料。  相似文献   

农杆菌介导玉米幼胚愈伤组织遗传转化体系的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

庄志扬  王汉宁  张金文  温睿婷  李永生  郑琪 《甘肃农业大学学报》2010,45(6)

以玉米骨干自交系‘郑58’的幼胚为材料,用农杆菌介导法对诱导培养出的胚性愈伤组织进行三价植物表达载体的遗传转化,同时对影响转化效率的主要因素进行研究.结果表明,当浸染液和共培养培养基中乙酰丁香酮(AS)的浓度为150mg·L-1时,抗性愈伤组织获得率显著提高17.39%;在菌液浓度D600为0.3、浸染时间为20min、共培养时间为60h、共培养温度为22℃、共培养培养基pH为5.4以及头孢霉素浓度为400mg·L-1的试验体系下,有利于提高玉米抗性愈伤组织的获得率,其获得率最高可达17.26%.  相似文献   

农杆菌介导玉米遗传转化影响因子的研究     

王奕  任贤  于志晶  蔡勤安  林秀峰  马瑞 《河南农业科学》2014,(5):34-37

利用农杆菌介导玉米愈伤组织遗传转化,研究了不同影响因子对玉米遗传转化效率的影响。结果表明,相比自交系H99,玉米杂交组合H99×A188更适宜作为玉米遗传转化的受体材料;继代6d后的胚性愈伤组织最适宜农杆菌转化;农杆菌菌株EHA105的侵染效果好于EHA101;抗性愈伤组织筛选培养基中除草剂筛选的临界质量浓度为4.0mg/L;头孢霉素质量浓度在500mg/L时适合进行除菌处理,且对植株再生影响较小。  相似文献   

Hi-Ⅱ玉米的NGc抗虫基因遗传转化研究     

刘悦  王立达  兰英  李青超  刘洋  郑旭  赵秀梅 《黑龙江农业科学》2022,(1):1-5

为促进转基因抗虫玉米研究,通过农杆菌介导的玉米幼胚遗传转化法将目的基因转入玉米材料Hi-Ⅱ中,通过外植体侵染、共培养以及分化筛选,培养具有CryNGc抗虫基因的玉米植株,并研究外源基因在后代的遗传表达及抗性情况.结果表明:玉米幼胚大小在1.2～1.8mm时侵染效果最好,并成功获得了10株具有Cry NGc抗虫基因的阳性...  相似文献   

玉米愈伤组织培养体系优化及ICE1基因的遗传转化     

《吉林农业大学学报》2017,(5)

选取3个骨干玉米自交系丹988、齐319、郑58幼胚为材料,利用正交试验设计L9(34),研究了基因型、幼胚大小、2,4-D浓度和AgNO_3浓度4个因素对胚性愈伤诱导率的影响。结果表明:各因素对愈伤诱导结果的影响大小依次为基因型幼胚大小2,4-D浓度AgNO_3浓度,最优组合为"齐319"、幼胚为1.5~2.0 mm、2,4-D浓度为2 mg/L和AgNO_3浓度为8 mg/L,愈伤组织诱导率为60.58%。用农杆菌介导法将植物超表达载体p CAMBIA3301-ICE1-Bar转入玉米自交系"齐319"中,得到的转化植株经除草剂basta初步筛选后,通过PCR检测,获得了5棵T_0代阳性植株。  相似文献   

农杆菌介导bar基因转化玉米幼胚的研究   总被引：4，自引：0，他引：4  

邸宏  卢翠华  王振华  刘昭军 《东北农业大学学报》2008,39(2):150-154

通过农杆菌介导法,采用抗除草剂基因(bar)转化3个玉米自交系的幼胚,并对遗传转化影响因素进行优化。结果表明,2,4-D浓度为2 mg·L-1时,胚性愈伤组织诱导率较高;农杆菌最佳的侵染时间为20 min;乙酰丁香酮(AS)明显提高了幼胚的GUS瞬时表达频率,适宜浓度为200μmol·L-1;温和选择方法适于幼胚转化,不定芽诱导培养基、芽伸长培养基和生根培养基中潮霉素的浓度分别为8、6、2 mg.L-1;获得7株PCR检测以及除草剂抗性试验阳性植株。  相似文献