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1.
脱氧雪腐镰刀菌烯醇降解菌的分离和鉴定 总被引：9，自引：1，他引：8
【目的】分离筛选能够降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的细菌,以期能在该毒素的生物解毒处理中得到应用。【方法】用高产毒禾谷镰刀菌F-25接种灭菌的小麦籽粒,培养后获得DON毒素;然后以DON毒素为唯一碳源进行DON毒素降解菌的驯化富集培养,得到能够降解DON毒素的混合菌群,逐一对分离到的细菌进行DON毒素降解能力检测,得到能够降解DON毒素的菌株。【结果】筛选得到的菌株DDS-1对液体培养基中的DON毒素的降解能力达95%以上,显著高于其它菌株;从形态、生理生化特性以及16S rDNA序列进行分析,DDS-1菌株初步鉴定为徳沃斯氏菌Devosia sp.;把DDS-1添加到小麦饲料中后,饲料中的DON毒素降解率达到75.47%。【结论】选出的DON高效降解菌株徳沃斯氏菌,不但对液体培养基中的DON毒素具有很好的降解作用,对饲料中DON毒素也有很好的降解效果。这为真菌毒素的生物脱毒处理提供了可行的方法。 相似文献
2.
为了给呕吐毒素（DON）污染的谷物和饲料脱毒提供菌株资源,本研究从赤霉病污染区域的小麦田采集土壤样品,通过富集培养,分离筛选到一株DON降解菌,通过形态、16S rDNA、gyrB基因序列对降解菌进行菌种鉴定,液相色谱串联质谱和核磁共振鉴定降解产物,明确其降解途径和解毒机制,通过菌株生长特性、降解特性和基因组间差异分析比较DON降解菌A4、A8和A16之间的差异。结果表明：分离筛选获得DON降解菌A4,该菌能在10 h内降解9.7 μg·mLP＞-1 P＞ DON,降解率高达97%。经鉴定,A4为德沃斯氏菌（Devosia sp.）。A4通过降解DON为3-keto-DON进行脱毒。A4的最适生长温度为35℃,最适NaCl浓度为2%,其耐热性和耐盐性优于菌株A8和A16。A4的最适降解温度为35℃、最适降解pH为8.0,其降解速率高于菌株A8和A16。通过平均核苷酸相似度（ANI）分析,A4与A8和A16之间的ANI分别为81.54%和77.87%,均低于95%,因此属于不同种的菌株。研究表明,筛选得到的新型DON脱毒菌株A4具有良好的抗逆性,为DON的污染控制提供了新的降解菌资源。 相似文献
3.
[目的]建立根癌农杆菌介导的泡盛曲霉遗传转化系统,探讨利用泡盛曲霉表达异源蛋白的可行性。[方法]从国内主要菌种库中购买泡盛曲霉菌株,根据分泌蛋白图谱分析确定合适的宿主菌,在此基础上通过药物敏感性分析确定遗传转化的选择标记,并利用构建的泡盛曲霉遗传转化体系对米黑根毛霉脂肪酶基因RML进行转化、表达研究,通过转化子鉴定及性质分析考察泡盛曲霉作为异源蛋白表达系统的可行性。[结果]通过分泌蛋白图谱分析确定泡盛曲霉CBS115.52和CICC2257作为异源蛋白表达的宿主菌;药物敏感性试验确定潮霉素抗性基因(HygBr)作为有效的遗传选择标记;在此基础上,利用根癌农杆菌介导的转化方法(agrobacterium tumefaciensmediated transformation,ATMT),将带有HygBr的质粒pHGW-amdS成功导入泡盛曲霉宿主菌CBS115.52,建立以HygBr为选择标记的泡盛曲霉遗传转化体系。利用该体系,介导米黑根毛霉脂肪酶(Rhizomucor miehei lipase,RML)的表达载体转化泡盛曲霉,通过底物水解试验、SDS-PAGE及Western blot确定RML基因已在泡盛曲霉中表达。[结论]该研究证明了根癌农杆菌介导转化泡盛曲霉作为异源蛋白的表达体系具有潜在的可行性。 相似文献
4.
《云南农业大学学报(自然科学版)》2017,(4)
【目的】探讨碳源、氮源、温度、pH值、光照等对小桐子叶斑病塔宾曲霉(Aspergillus tubuingensis Moss.)的影响,为其防治提供理论依据。【方法】采用十字交叉法从碳源、氮源、温度、pH值、光照等方面对塔宾曲霉菌丝生长、产孢量的影响进行研究。【结果】塔宾曲霉在尿素、甘氨酸为唯一氮源之外的其他17种培养基上均能良好的生长,菌丝生长最佳碳氮源为甘露醇、牛肉膏;菌丝在23~37℃均能生长,最适温度为35℃,致死温度为65℃;培养基中pH值4~8时均能生长,最适pH值为8;此外,光照能促进菌丝生长。塔宾曲霉在尿素为唯一氮源之外的其他18种培养基上均能产孢,产孢最适碳氮源分别为可溶性淀粉、牛肉膏;在23~37℃均能产孢,最适温度35℃;培养基中pH值4~8时均能产孢,最适pH值为6;光照对孢子生长有促进作用。【结论】塔宾曲霉对环境的适应能力较强,对酸碱度敏感,可能与寄主小桐子的生长环境及叶片的生理生化性质有关。 相似文献
5.
O型口蹄疫病毒代表性抗原VP1基因的人工合成与表达及其免疫原性检测 总被引：3，自引：2，他引：1
通过对GenBank近10年内收录的O型口蹄疫(FMD)病毒 VP1基因序列的同源性比较分析,并根据中国、老挝、缅甸等国家FMDV流行毒株的基因序列,设计并合成了有群内抗原代表性的结构蛋白VP1全基因序列.将合成的序列克隆到原核表达载体pET-28a( )中,构建了VP1的表达质粒pETVP1.SDS-PAGE和Western-blot分析表明,该质粒的BL21(DE3)LysS转化菌在IPTG诱导下可特异性表达VP1蛋白,该重组蛋白以包涵体的形式存在,相对分子质量约30 000,能与口蹄疫病毒(FMDV)阳性血清发生特异性反应.动物接种试验表明,重组蛋白能诱导小白鼠产生特异性抗FMDV抗体. 相似文献
6.
[目的]对嘉兴地区秸秆降解菌部分霉菌分类鉴定.[方法]利用形态分类学方法和基于ITS序列的分子鉴定,对环境中原位分离的15种秸秆降解霉菌进行分类鉴定.[结果]1228属于哈茨木霉;1105、1012属于黑曲霉的不同菌株;1210、1234属于塔宾曲霉的不同菌株;1219属于赭曲霉;1021、1106、1110、1222、1229、1230、1232属于卷枝毛霉的不同菌株;1237属于米根霉;1109属于球毛壳菌.[结论]通过对秸秆降解菌的资源调查,为高性能秸秆降解菌的选育奠定基础. 相似文献
7.
从陕西榆林苟池盐湖水中分离到1株嗜盐古菌GS1并对其进行了系统鉴定.通过形态鉴定、革兰氏染色、生长盐浓度试验、Mg2+浓度试验、生长pH范围、生理生化鉴定、16S rRNA基因序列等分析,确认该菌为1株新型的极端嗜盐古菌,属于盐红菌属(Halorubrum).GS1与Halorubrum saccharozorum(U17346)的16S rRNA基因序列同源性为97%.命名为Halorubrum sp.GS1.其16S rRNA基因序列已被GenBank数据库收录,序列号为FJ793266. 相似文献
8.
根据Z26520中fedF序列设计1对引物,从发病仔猪的腹泻粪便分离获得的大肠杆菌中扩增得到fedF基因,经纯化、连接、转化,将其成功克隆到pMD18-T中,所克隆fedF基因序列与GenBank中收录的其他fedF基因序列的同源性达97.8%～99.2%.另设计1对引物,利用基因工程方法将所克隆的fedF的编码序列亚克隆到表达载体pBV220中,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得表达重组菌.测序结果表明,插入编码序列与预期序列一致.SDS-PAGE电泳及Western-blotting分析表明,重组菌在诱导后可以表达特异性的相对分子质量为30 100的FedF蛋白. 相似文献
9.
《江苏农业科学》2017,(4)
营养期杀虫蛋白(vegetative insecticidal protein,简称VIP)是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)在营养期表达的一类新型杀虫毒蛋白,该蛋白的发现使得Bt杀虫剂在杀虫活性、杀虫范围方面得到很大突破。首次比较我国不同气候类型(热带:海南省,亚热带:广西壮族自治区,温带:黑龙江省)的Bt菌株和vip基因的分布情况。结果表明,从海南省841份土样中分离出156株Bt菌(18.55%),从广西地区1 420份土样中分离出356株Bt菌(25.07%),从黑龙江省1 010份土样中分离出167株Bt菌(16.53%);从海南省的156株Bt菌中鉴定出22个vip基因(占14.1%),从广西地区的356株Bt菌中鉴定出2个vip基因(占5.62%),然而,从黑龙江省的156株Bt菌中没有鉴定出vip基因(0%)。利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,简称PCR)方法成功克隆出1个vip3Aa的全长基因并获得登录号KT792883,将该基因插入到表达载体p ET-21b中,转化菌株Rosetta(DE3),在低温条件下表达88 ku的蛋白,将该蛋白进行生物活性测定,结果显示,该蛋白对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)具有较好的杀虫活性,LC50为5.124 ng/mg,对棉铃虫(Heliothis armigera)活性较低,LC50为870.1 ng/mg。研究结果显示,Bt菌株和vip基因的分布有地域性差异,在温度较高的热带、亚热带地区有比较丰富的Bt菌株和vip基因资源。研究将有利于充分利用土壤中的Bt菌株,分离具有自主知识产权和重要应用价值的新型vip抗虫基因,这将会为研究新型杀虫蛋白、延缓害虫抗性问题提供有益帮助。 相似文献
10.
TUB2基因鉴定及其在毛壳菌中的转化 总被引：1，自引：0，他引：1
TUB2基因为植物病原菌抗苯并咪唑类杀菌剂基因 .以pRB12 9质粒为模板对该基因进行PCR扩增 ,得到一条长约 1 4kb的DNA片段 ,经酶切鉴定证明该DNA片段是TUB2基因 .利用PEG方法 ,将含有TUB2基因的pRB12 9质粒转化于毛壳菌原生质体中 ,并在高于毛壳菌敏感的多菌灵浓度 (10 μg mL)下筛选转化子 ,此质粒转化率为 3 (2× 10 5) .使得对多菌灵非常敏感的毛壳菌能够在 30 0 μg mL多菌灵的培养基上正常生长 ,其抗药性提高了30 0倍以上 ,而且转化子稳定性试验表明 ,其抗药性在非选择性培养基上连续培养 10代保持不变 . 相似文献
11.
采用正交设计，获得了苏云金芽胞杆菌菌株９４（Ｂｔ９４）的最适液体培养基配方：葡萄糖质量浓度为０．７６ｋｇＬ－１、胰蛋白胨＋酵母浸膏为０．８ｋｇＬ－１、无机盐为０．１ｋｇＬ－１．采用该培养基进行摇床培养，活芽孢数可达１０１×１０１１个Ｌ－１．用摇瓶培养液对斜纹夜蛾和小菜蛾进行毒力测定，其ＬＣ５０分别为３５５．９９５１±２．６０９８和５８．２９０８±１．４２６２ｍＬＬ 相似文献
12.
水稻二化螟初孵幼虫对锐劲特较敏感（b值〉2,LC50约为0.04～0.06mg/kg）,对Bt的敏感性则较差（b在1.4～2.0;LC50约为5～8mg/kg）,通过一系列的室内实验筛选出Bt和锐劲特不同组合对二化螟联合毒力效应在1：1至1：3的配比范围内具有较强的增效作用,且随着Bt所占份额的提高,共毒系数值有增加的趋势。结合田间药效和经济效益,选用Bt：锐劲特=1：1的配方,经田间小区实验结果表明：2%锐劲特·Bt制剂田间用量60g/667㎡、75g/667㎡、90g/667㎡处理22d后的防效分别为：60.34%、67.73%、71.32%,高于对照药剂16000单位Bt50g/667㎡处理样。对复配药剂进行毒性测定表明：2%锐劲特·Bt制剂属低毒类农药。 相似文献
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苏云金芽胞杆菌油剂增效因子的筛选 总被引：2，自引：0，他引：2
以小菜蛾、棉铃虫为生物测定昆虫 ,通过测定 5种无机盐 (Na2 CO3,K2 CO3,CaCl2 ,MgSO4 ,和MgCl2 )对苏云金芽胞杆菌油剂的增效作用进行增效因子的筛选。结果表明 ,以小菜蛾为供试昆虫 ,除CaCl2 外 ,其余 4种无机盐对苏云金芽胞杆菌油剂均表现增效作用 ,0 .0 10 %MgCl2 效果最好 ,增效比为 1.5 6。以棉铃虫为供试昆虫 ,5种无机盐对苏云金芽胞杆菌油剂均表现增效作用 ,0 .0 12 5 %MgSO4 效果最好 ,增效比为 1.6 9,0 .0 2 5 %的Na2 CO3 次之 ,增效比为 1.5 9 相似文献
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高效秸秆降解菌株的分离与选育 总被引：1，自引：0，他引：1
为了选育高效降解玉米秸秆的菌株,首先用羧甲基纤维素钠(CMC-Na)培养基结合滤纸条无机盐培养基,对从样品中分离的菌株进行初筛,再以玉米秸秆培养基复筛并进行发酵产酶试验,测定CMC-Na酶活和FPA酶活,最后对目的菌进行紫外诱变。通过筛选得到降解效果较好的2株真菌PJ-2、PJ-4和1株放线菌GJ-1。紫外诱变后获得正向突变菌3株,分别为PJ-2的突变菌UV-1-1,PJ-4的突变菌UV-2-2和UV-2-4,这3株突变株的CMC-Na酶活力相对原菌株分别提高45%、20%和10%以上,菌株降解秸秆能力也显著提高。 相似文献
15.
为了提高紫色硫细菌283-1的生物量,对其培养基组分进行优化。采用单因子试验、Plackett-Burman设计法、最陡爬坡试验及中心组合设计响应面分析,研究了乙酸钠、碳酸氢钠、氯化铵、硫化钠、硫酸镁和无机盐6个因子对菌株283-1生物量的影响。结果表明,乙酸钠和硫化钠是影响该菌株生物量的主要因素,并获得了最佳培养基配方:乙酸钠1.45g·L-1,碳酸氢钠0.75g·L-1,氯化铵4.5g·L-1,硫酸镁0.5g·L-1,硫化钠1.05g·L-1,氯化钙0.19g·L-1,氯化钾0.34g·L-1,氯化钠50g·L-1,VB1220μg·L-1,无机盐溶液1mL·L-1。优化后菌株283-1的生物量提高了6倍,结果与理论预测值相近。 相似文献
16.
The susceptibility of the Asian corn borer, Ostrinia furnacalis to Bacillus thuringiensis (Bt) formulation and Bt corn was evaluated using insect bioassays for 6 years. Four strains of O. furnacalis were developed by laboratory selection from the laboratory strain reared on a non-agar semi-artificial diet. The RR-1 strain was exposed to a commercial formulation of B. thuringiensis subsp. kurstaki (Btk) incorporated into the artificial diet, the RR-2 strain was exposed to Bt corn (MON810)tissue incorporated into the diet, and the SS-1 and SS-2 strains were reared on the standard diet with or without non-Bt corn tissues material. Decreasing susceptibility of O. furnacalis to Bt and to Bt corn were found in each selected strain although the ED50 and larval weight fluctuated from generation to generation. The resistance of Bt-exposed strain (RR-1)to Btk increased 48-fold by generation 39; the Bt corn-exposed strain (RR-2) increased its resistance 37-fold to Btk by generation 24. No larvae of SS-1 survived when they were exposed to the leaves of Bt corn, Bt1 1 and MON810. However,2-54% of the RR-1 (generation 46) and RR-2 (generation 20) larvae survived a 3 day-exposure to the leaves of Bt1 1 and MON810. The survival of both selected strains on Bt corn silk increased by 10-69%, and the larval weights after many generations selection were increased by 15-22% compared with the unselected susceptible strain. The young larvae were much more susceptible to Bt than older larvae. The highest mortality occurred when the larvae were exposed to Bt at the neonate stage. All of the results suggested that ACB could not only develop resistance to Bt preparation but also to Bt corn. Bt had significant effects on the growth and development of Asian corn borer than on the larval mortality. In order to maintain the long-term effectiveness of Bt pesticide and Bt corn, the resistance management should pay much attention to the larvae that may have opportunities to grow and developed on non-Bt corn or alternate hosts before they attack the Bt corn plants and the survival of larvae after Bt application. 相似文献
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吴丽云 《福建农林大学学报(自然科学版)》2011,(3):296-301
以啤酒厂不同处理工段废水、污泥为原料培养苏云金芽胞杆菌(Bt),并与城市污水做比较,研究啤酒废水、污泥的化学耗氧量(COD)、pH、发酵情况及其毒力.结果表明,以啤酒厂混合池原废水和酸化池废水为原料培养Bt,活芽胞数可达109cfu·mL-1级,与城市污水相比(D595nm=0.202),能产较高的晶体蛋白(D595n... 相似文献
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Bt生物增效剂的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
为了减少环境污染，不杀伤天敌，使Ｂｔ制剂能在东北及内蒙古大兴安岭高寒地区应用，１９９５年，利用复配的Ｂｔ增效剂对二龄落叶松毛虫幼虫进行了试验，结果表明：在Ｂｔ制剂中加苏云金杆菌液体培养物上清液粉，可明显提高杀虫活性。如果将０．１ｇＢｔ＋０．０６４ｇ上清液粉与未加上清液粉的Ｂｔ制剂均稀释为１０００倍液，相比可提高防效１３％左右。用Ｂｔ制剂与灭幼脲３号混合防治落叶松毛虫二龄幼虫有明显的增效作用。１ｇＢ 相似文献
19.
碳源、氮源及无机盐对粉拟青霉生长的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
采用液体发酵方法,在25℃条件下,实验了真菌培养常见的9种碳源物质,7种氮源物质、6种无机盐对粉拟青霉菌丝生长的影响.结果表明,玉米粉、蔗糖、麦芽糖和葡萄糖是粉拟青霉菌丝生长较好的碳源物质,采用这几种碳源液体培养72h后干菌丝产量可达7.33~8.04mg/mL;牛肉膏蛋白胨是较好的氮源物质,72h干菌丝产量为8.87mg/mL,是其他氮源的3.5~6.0倍.磷酸二氢钾较适合该菌生长,72h干菌丝产量为7.62mg/mL,硫酸亚铁和硫酸钙不是菌丝生长的最适无机盐,但这两种盐有利于该菌在液体状态下产生节孢子,节孢子浓度可达108个/mL. 相似文献