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菲律宾蛤仔过敏原可视化抗体微阵列玻片的检测方法 总被引：3，自引：1，他引：2
采用辣根过氧化物酶(HRP)与3,3′,5,5′—四甲基联苯胺(TMB)—H2O2作为信号示踪系统,建立了一种可视化抗体微阵列检测菲律宾蛤仔过敏原的方法。对孵育时间、抗体浓度等免疫条件进行了优化。采用改良双抗体夹心法,将菲律宾蛤仔过敏原的兔多克隆抗体固定于琼脂糖三维芯片上,依次加入待检样品、菲律宾蛤仔鼠多克隆抗体和HRP-羊抗鼠IgG,孵育后加TMB显色,肉眼观察后,用平板扫描仪获取扫描图象,采用GenePixPro6.0软件分析灰度值。试验结果表明,该方法最低可检出10ng/mL的菲律宾蛤仔过敏原,片内平均变异系数(CV)为5.99%,片间为10.3%;香肠及蟹棒中3个不同浓度的加标回收率为73.54%～95.44%;4℃存放4个月内抗体微阵列玻片活性保持稳定。该方法不需要大型精密仪器,结果直观可见,可以发展为对多种过敏原进行同时检测,具有良好的实用和推广价值。 相似文献
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采用分子生物学检测方法、API 20NE生化鉴定法以及梅里埃（VITEK MS）全自动快速微生物质谱检测法,对60株试验菌株进行种属鉴定,比较3种鉴定方法的准确性和优缺点。对试验菌株进行16S r DNA特异性引物扩增和测序,确定菌株种属,并作为比较3种鉴定方法的标准。随后用API 20NE生化鉴定法和梅里埃（VITEK MS）全自动快速微生物质谱检测法,对试验菌株进行鉴定。结果显示,分子生物学方法和生化鉴定法,对60株菌的检出率均为100%,而质谱仪的检出率仅为60.0%。使用分子生物学法共检出44株气单胞菌（100%）,准确率为100%;使用生化鉴定法对气单胞菌的检出率为88.6%,准确率为59.1%;使用质谱仪对气单胞菌的检出率为54.5%,准确率为38.6%。3种鉴定方法对气单胞菌的检出率和准确率从大到小为：分子生物学法、API 20NE生化鉴定、质谱仪。 相似文献
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免疫荧光法(Immunofluorescence technic)或称荧光抗体法(Fluorescent antibody technic)系对抗体(或抗原)标记荧光色素与相应抗原(或抗体)结合后，在荧光显微镜下呈荧光现象的一种特异性免疫荧光反应方法。它较其他生物学染色方法有更高的特异性与敏感性。而间接免疫荧光法具有只需标记一种抗球蛋白抗体，可用于多种抗原抗体系统的优点。如今已被广泛应用于医学，生物学等领域。 相似文献
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近十多年来,随着分子生物学(包括基因工程、蛋白质工程)的飞速发展及人们对生物免疫系统认识的不断深入,抗体技术已从细胞工程抗体(杂交瘤技术)进入了分子重组抗体即基因工程抗体时代. 相似文献
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对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)是1992-1993年全国范围内对虾暴发性流行病的主要病原,到现在仍然没有能有效控制wssV疫情的技术措施。WSSV每年给我国对虾养殖业带来巨大经济损失,成为对虾养殖业可持续发展的主要障碍。目前检测WSSV病原的方法有很多种,主要有目视观察法、组织学方法、电子显微技术、生化检验法、免疫学方法和分子生物学方法等。其中分子生物学方面中PCR检测具有敏感性高、特异性高等特点,被广泛应用于对虾WSSV检测。 相似文献
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《畜禽业》2015,(12)
为了解猪伪狂犬病(PR)在伊宁市的流行情况。选择伊宁市5家使用g E基因缺失疫苗进行免疫的养猪场,采集不同阶段猪的血清样品549份,病理组织样品94份,利用血清学及分子生物学对伪狂犬病毒(PRV)及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)进行流行病学调查。结果显示:各猪场均存在g E基因抗体检测阳性,血清样品总阳性数106份,总阳性率为19.31%;g B基因抗体检测血清样品总阳性数465份,总阳性率为84.70%;PCR检测PRV总阳性数36份,阳性率38.30%,RT-PCR检测PRRSV总阳性数59份,阳性率62.77%,二重感染数34份,占PRV检测阳性数的94.44%。调查表明,伊宁市养猪场普遍存在PRV野毒感染的情况,对伊宁市养猪业构成一定的威胁;PRV感染及发病受到免疫、混合感染等诸多因素的影响。 相似文献
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草鱼呼肠孤病毒HZ08株抗体IPMA检测方法的建立及应用 总被引：1，自引：0，他引：1
为建立一种检测草鱼呼肠孤病毒HZ08株(HZ08)抗体的免疫学方法,本实验以接种HZ08病毒的细胞培养板为抗原板,以免疫弱毒疫苗的草鱼血清为抗体,通过反应条件优化,建立了检测GCRV HZ08血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞实验(IPMA)方法,并对该方法特异性、敏感性、重复性、与ELISA检测结果的符合率及对临床血清样品的检测效果等进行了验证。结果显示,HZ08株种毒按照1×103拷贝/μL浓度接种后72h固定,HRP-Ig G二抗1∶1000稀释,待检血清1∶100稀释时效果最佳;该IPMA方法与草鱼阴性血清、免疫细菌三联疫苗的草鱼血清、感染GCRV JX0901(GCRVⅠ型)的草鱼血清无交叉反应;GCRV HZ08株阳性血清稀释至1∶800时仍能检出;批内和批间重复性实验显示,该方法具有良好的重复性;符合性实验结果显示,该IPMA方法与ELSIA方法的阳性和阴性符合率分别为95.7%和87.5%;用建立的IPMA方法检测草鱼出血病弱毒疫苗免疫草鱼,免疫2周后抗体水平达到峰值;对现地送检的126份草鱼血清样本进行检测,平均检出阳性率为72.2%。研究表明,建立的HZ08株IPMA方法特异性强、重复性好、敏感性高,为GCRVⅡ型的流行病学调查、疫苗免疫效果评价及抗原抗体检测提供了一种有效的检测手段。 相似文献
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仔猪猪瘟疫苗首免与二免的免疫效果对比试验 总被引：1，自引：0，他引：1
试验选用96头35日龄的大约克保育仔猪,随机分为对照组(32头)、试验Ⅰ组(32头)、试验Ⅱ组(32头)。第一阶段(时间25d,从35-60日龄):3个组35日龄首免猪瘟疫苗,剂量均为2头份/头,60日龄采血检测抗体水平,3组的猪瘟抗体滴度在(≦1:64),免疫抗体合格率分别为56%,46.9%,43.8%,平均合格率为49%,首免结果差异无显著(P>0.05);第二阶段(从61-95日龄),68日龄时试验Ⅰ组与试验Ⅱ组二免猪瘟疫苗,剂量为2头份/头,对照组不作二免,95日龄采血检测抗体水平,试验Ⅰ组、试验Ⅱ组的猪瘟免疫抗体合格率均值为93.8%,对照组免疫抗体合格率只有8﹪,对各组试验仔猪95日龄的猪瘟抗体水平进行多重比较,结果差异极显著,试验结果表明:(1)仔猪在首免的基础上进行一次加强免疫,可获得理想的免疫抗体滴度;(2)二免期间仔猪饲喂含预防量抗菌素的饲料,对免疫抗体产生有极显著影响。 相似文献
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试验选用1月龄大约克保育仔猪64头,随机分为对照、试验2个组,每个组32头。第一阶段(35～65日龄):对照组和试验组均饲喂颗粒料(含预防量抗生素),35日龄首免猪瘟细胞苗,65日龄采血检测抗体水平;第二阶段(68～98日龄),对照组饲喂育成饲料(不含抗生素),试验组饲喂颗粒料(含预防量抗生素),68日龄时进行猪瘟苗二免,98日龄采血检测抗体水平。试验结果表明:饲喂含抗生素饲料的试验组与对照组(不含抗生素)之间抗体水平差异显著(0.01﹤P﹤0.05),说明饲喂含预防量抗生素的饲料对仔猪猪瘟的抗体水平的产生存在显著影响。 相似文献
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禽流感的诊断技术研究 总被引：5，自引：1，他引：5
禽流感可感染人类,公共卫生意义重大。由于其病毒(AIV)亚型众多,抗原性变异极快,毒株的致病性也相差很大,早期快速诊断和血清学监测就成了预防和控制禽流感的前提条件。禽流感的传统诊断方法是分离病毒和检测抗体,近年来,AIRC相继建立了血凝抑制试验(HI)、琼脂扩散试验(AGP)、神经氨酸酶抑制试验(NI)、间接酶联免疫吸附试验(ELISA)、玻片血凝抑制试验等血清学诊断技术及分子诊断技术(RT-PCR)。目前,我国专家研制成功了“禽流感H5,H7,H9亚型多重实进荧光RT-PCR检测试剂盒”,可在4h之内同时检测3个AI亚型,满足了对AI疑似病例的快速确诊需要。 相似文献
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分别用正向间接血凝试验(诊断液由兰州兽研所提供)、液相阻断ELISA(美国EDIXX提供的猪瘟抗体检测诊断试剂盒)、胶体金(深圳康百得生物科技有限公司提供)三种不同的试剂和检测方法,测定同份血清的猪瘟免疫抗体水平,将其结果进行比较,结果显示:正向间接血凝试验与ELISA检测结果符合率仅为70.8%,胶体金和ELISA检测结果符合率为95.8%。 相似文献
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运用Sephacryl S-200凝胶层析和HiTrap rProtein ASepharose亲和层析2种方法对牙鲆(Paralichthys olivaceus)血清免疫球蛋白进行分离纯化,结果表明,牙鲆免疫球蛋白分布于33%~50%的硫酸铵饱和溶液中,其中45%的分离效果最好。凝胶层析和亲和层析样品均出现2个蛋白峰,用还原SDS-PAGE检测确定牙鲆免疫球蛋白存在于第2个蛋白峰中。牙鲆免疫球蛋白重链分子量约为75.4 kD,轻链分子量约为29.9 kD和28.2 kD,推测牙鲆血清免疫球蛋白的分子量为836 kD。制备了兔抗牙鲆免疫球蛋白多克隆抗体,免疫双扩散法检测多克隆抗体效价为1∶32,免疫斑点法检测多克隆抗体效价至少为1∶1 600。运用免疫印迹法(Western-bloting)检测了兔抗牙鲆免疫球蛋白多克隆抗体的特异性,实验证明该抗体与牙鲆全血清中免疫球蛋白重链、轻链反应均成阳性。 相似文献
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采用Sephacryl S-400凝胶过滤柱层析和电洗脱等纯化方法,首次从黄鳍鲷骨骼肌中分离纯化到伴肌动蛋白,并制备了特异性多克隆抗体.多克隆抗体经Protein A-Sepharose亲和层析柱纯化得到高纯度免疫球蛋白G(IgG).采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫斑点印迹(Dot-Blot)和免疫印迹(Western-Blot)等方法对纯化的伴肌动蛋白及其多克隆抗体进行分析鉴定,并研究了不同贮藏条件下伴肌动蛋白的变化情况.SDS-PAGE结果显示本研究从黄鳍鲷骨骼肌中分离纯化了高纯度伴肌动蛋白;Dot-Blot检测结果显示兔抗黄鳍鲷伴肌动蛋白多克隆抗体效价为5×104;Western-blot检测表明兔抗黄鳍鲷伴肌动蛋白多克隆抗体能与肌原纤维蛋白中的伴肌动蛋白发生特异性反应,而与其它蛋白不发生免疫交叉反应. 相似文献
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褐牙鲆腹水症病原菌的分离鉴定及其灭活疫苗的研制 总被引：2，自引：0，他引：2
从患腹水病褐牙鲆体内分离致病菌,通过生理生化和分子生物学方法进行鉴定;该菌的16S rDNA序列与标准株同源性达99.8%,证明该菌为嗜水气单胞菌.制备灭活疫苗后分别注射小鼠和牙鲆,测定其免疫效果.试验结果表明,用所制备的灭活疫苗免疫小鼠,其保护率达到90%,免疫牙鲆的保护率达到80%;采用渗透压差法浸泡免疫牙鲆在攻毒后发病率仅为6%,攻毒后保护率为85%;通过间接ELISA检测表明受免动物体内产生了较高水平的抗体;剖检及病理切片结果表明免疫过的动物内脏健康无异样,而未免动物肝脏充血,肠腔有积水.说明该疫苗安全有效. 相似文献
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三角帆蚌基因组DNA提取方法的比较研究 总被引：1，自引：0，他引：1
采用4种DNA提取方法(即苯酚法、改进苯酚法、CTAB法和改进ROSE法)提取三角帆蚌基因组DNA,并对4种方法提取的DNA进行分析;通过限制性酶切和SSR-PCR扩增基因组DNA,并对扩增产物进行电泳分析.结果表明,4种方法均有较好的提取效果;所提取的DNA能用于进一步的分子生物学的研究;改进苯酚法提取的DNA纯度最高,SSR-PCR扩增效果最好;苯酚法的DNA得率最高. 相似文献
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应用血凝抑制试验(HI),对采自健康的鹰、鸽子、野鸭和鹌鹑中的54份血清血清学检测,分析结果显示,在总共采集的54份血清样品中,抗新城疫病毒(NDV)抗体流行血清型(seroprevalence)与抗H6亚型禽流感病毒(H6)抗体、抗H9亚型禽流感病毒(H9)、抗H5亚型禽流感病毒(H5)抗体阳性率分别为64.8%、75.9%、29.6%。而根据血凝抑制试验检测结果发现,H5亚型禽流感病毒抗体滴度较低,最高仅为320,其阳性率为29.6%,推断其可能为新近传入的病毒或新近重组变异出现的新病毒,可能为与该次流感爆发相关的新病毒,这一推断还有待于通过对病毒基因序列的分析而做进一步验证;新城疫病毒在该生态系中的稳定循环,构成了对家禽潜在的威胁,我国目前非典型新城疫的一个主要原因是带毒鸟类的传入。 相似文献
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以硝酸纤维膜为固相载体,以猪瘟病毒为抗原,确定了Dot-PPA-ELISA检测猪瘟抗体的最佳反应条件。试验表明,猪瘟兔化弱毒经仔猪睾丸原代细胞培养纯化,以0.05mol/LpH9.5CBS缓冲液稀释至浓度为0.98～1.15mg/mL制备诊检抗原膜片;采用4%蛋清蛋白0.05mol/LpH9.5CBS封闭;检测反应稀释液应用0.01MPPBST(含0.1%PEG、0.05Tween-20),酶结合物工作浓度以1∶30,底物选取4-氯1-萘酚等为检测猪瘟血清抗体的最佳反应条件。重复试验证明了其检测稳定性好。交叉试验、阻断试验证明了其特异性强。 相似文献