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以夏季和冬季鲢为研究对象,利用胰凝乳蛋白酶能水解羧基端含芳香族氨基酸残基肽键的特性,根据其特异性酶切部位,结合电泳手段来分析肌球蛋白的内部构造差异性。结果表明,与夏季样品相比,冬季鲢的肌原纤维蛋白经酶切生成的肌球蛋白头部S-1较长,在高温下分子量为165 ku的重酶解肌球蛋白HMM容易被再降解成小片段的135 ku HMM,呈现出冬季肌球蛋白的结构不稳定性。在不同温度下加热夏季和冬季肌球蛋白,其ATPase失活速度和酶解肌球蛋白生成S-1的产生量的减少速度呈现一致性,说明酶解生成的S-1只来源于有活性的肌球蛋白。同时,冬季肌球蛋白热变性温度较夏季肌球蛋白要低6 ℃,表明冬季肌球蛋白的不稳定性。 相似文献
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为了研究鲢鱼糜凝胶化温度与肌球蛋白热稳定性的关系,测定经不同凝胶化温度处理的鱼糜凝胶特性,利用浊度法检测鲢肌球蛋白溶液聚集体的形成过程,并采用圆二色谱仪、差式量热扫描仪分别对鲢肌球蛋白溶液的α-helix结构变化和热变性温度进行测定。结果表明,鲢鱼糜的适宜凝胶化温度为40℃,肌球蛋白的聚集速率在39℃、51℃、54℃3个温度点时出现大幅度增加,其中39℃时聚集速率最快;肌球蛋白α-helix在40℃、55℃时大量解旋成无规卷曲结构,40℃时解旋速率最快;肌球蛋白存在两个变性温度43.32℃和51.59℃。鲢鱼糜凝胶化温度与肌球蛋白α-helix的第一个解旋温度和第一个变性峰值温度点相对应,凝胶化温度实质上是肌球蛋白的第一个变性峰值温度点。 相似文献
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蟹类原肌球蛋白基因的克隆与表达 总被引：4，自引：0，他引：4
原肌球蛋白是甲壳类动物的主要过敏原之一。本文通过分子生物学技术方法,分别克隆得到锯缘青蟹(Scylla serrata)、中华绒鳌蟹(Eriocheir sinensis)和三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)的原肌球蛋白基因序列。测序结果表明,三个基因的序列长度均为855 bp,编码284个氨基酸残基,三者氨基酸序列同源性为99.3%。三种蟹的原肌球蛋白基因序列与GenBank中其他甲壳类动物的原肌球蛋白具有很高的同源性。将锯缘青蟹的原肌球蛋白基因与pGEX-4T-3载体连接后,经IPTG诱导得到分子量约为61 kDa的融合表达蛋白。通过与甲壳类过敏患者血清的免疫印迹反应,证实融合表达的原肌球蛋白具有过敏原性,表明原肌球蛋白是蟹类的主要过敏原之一。该融合蛋白有望用于甲壳类食物过敏诊断试剂的开发与应用。 相似文献
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克隆斑马鱼原肌球蛋白的基因并表达纯化出重组蛋白,对其免疫学特性进行鉴定。提取斑马鱼总RNA,采用RT-PCR克隆斑马鱼原肌球蛋白的全长基因,根据序列设计带有酶切位点的特异性引物,扩增斑马鱼原肌球蛋白基因的完整开放阅读框,连入载体pET-28a,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中通过IPTG诱导得到重组斑马鱼原肌球蛋白。重组蛋白经Ni 2+亲和层析柱纯化后进行Western-blot检测。获得斑马鱼原肌球蛋白基因,Western-blot结果显示重组蛋白具有良好的免疫活性。本研究成功克隆并表达了斑马鱼原肌球蛋白基因,经免疫学鉴定发现其具有过敏原性。 相似文献
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以肌肉组织的蛋白为切入点,探索海洋经济软体类主要可食部位的化学特性与差异,并对软体类副肌球蛋白的分布特点进行初步探索。研究对象为商品活体经济软体类,包括菲律宾蛤仔、毛蚶、脉红螺、皱纹盘鲍及长蛸5个种类。首先,对可食部位化学组成及氨基酸组成进行分析比较,结果显示,5种软体动物间一般化学组成差别不大,肌肉中均含有17种氨基酸,且亮氨酸和赖氨酸含量均较高,氨基酸含量无显著差异。然后,对肌肉组织蛋白组分及各组分含量分布进行分析与比较,SDS-PAGE分析表明,5种软体动物肌肉中均含有肌球蛋白、肌动球蛋白、副肌球蛋白及原肌球蛋白等重要组分;同时在菲律宾蛤仔、毛蚶及皱纹盘鲍的肌肉中含有分子量高于200 ku的未知蛋白聚合物。基于质谱分析鉴定并结合分子量进一步计算,确定该蛋白聚合物为副肌球蛋白聚合体。综上可知,不同软体类肌肉蛋白组分分布的差异主要体现在副肌球蛋白,因此,副肌球蛋白及其聚合体的分布特性值得进一步探索。 相似文献
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根据相近物种的同类基因设计引物,从凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei肌肉组织中克隆获得原肌球蛋白基因（TPMS）,长度为901bp,其中包含长度为852bp的完整开放阅读框,编码原肌球蛋白分子量为32．8kDa;RT—PCR结果显示,原肌球蛋白在心、肝胰腺、胃、鳃、肠和肌肉组织中均有表达,在肌肉中表达量最高,在鳃中表达量最低;将原肌球蛋白基因构建原核重组表达载体TPMS—pET30a,转化受体菌株BL21（DE3）并利用IPTG诱导后能够大量表达,蛋白分子量为38．2kDa;经优化,IPTG的最适诱导浓度为0．05mmol／L,最适诱导时间为4h;经过亲和纯化后,能够得到纯度90％以上的重组表达蛋白。 相似文献
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鳊鱼鱼糜蛋白质结构与凝胶特性关系的研究 总被引：1，自引：1，他引：0
蛋白质对于鱼糜凝胶形成具有重要作用,通过研究鳊鱼鱼糜贮藏过程中肌球蛋白化学作用力、激光拉曼光谱等的变化探讨蛋白质结构对鱼糜凝胶形成的影响。结果发现,鱼糜在-80℃、-20℃冻藏过程中,肌球蛋白含量、离子键、氢键与疏水相互作用含量呈现先快后慢的二段式下降趋势,与其凝胶强度变化趋势一致;在0℃和5℃贮藏过程中,肌球蛋白含量、离子键和氢键含量呈不断下降的趋势,与凝胶强度变化趋势基本一致,而疏水相互作用为先增加后减少,由此可见,肌球蛋白含量、离子键和氢键含量在维持鱼糜蛋白高级结构上起着重要的作用。激光拉曼光谱结果显示α-螺旋结构是维持鳊鱼糜蛋白质网状结构的主要构象,在贮藏过程中,部分α-螺旋结构转变成无规卷曲,使包埋于肌球蛋白分子内的疏水性残基暴露于分子表面,进而发生蛋白变性;贮藏温度越高,无规卷曲结构越多,蛋白变性程度越大,表现在凝胶强度降低越多。鱼糜贮藏过程中蛋白质结构变化的研究对于阐明鱼糜凝胶形成机理和防止鱼糜蛋白变性具有一定意义。 相似文献
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大豆胰蛋白酶抑制剂对鲢丝氨酸蛋白酶的作用 总被引：1，自引：0，他引：1
研究了大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)对鲢肌肉中肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)引起的肌原纤维蛋白降解作用的影响。大豆胰蛋白酶抑制剂经高度纯化后加入肌原纤维中以判断它对MBSP的抑制效果。在不添加STI的情况下,55℃加热30min即可观察到肌球蛋白重链的分解,延长加热时间则可检测到肌动蛋白及原肌球蛋白的降解。相反,在终浓度为0.75μg·mL-1的STI存在下,包括肌球蛋白重链在内的肌原纤维蛋白降解均能得到有效抑制,表明STI是MBSP的特异性抑制剂。由于肌球蛋白重链及肌动蛋白的完整性是构成鱼糜制品凝胶强度的主要因素,因此,STI的添加有可能提高鲢鱼糜制品的凝胶强度。 相似文献
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基因重组cystatin对鲢鱼糜肌球蛋白的保护作用初探 总被引：1，自引：0，他引：1
研究了基因重组中华鲟半胱氨酸蛋白酶抑制剂(recombinantChinesesturgeoncystatin)基因在毕赤酵母中的表达和以鲢为原料制作鱼糜过程中添加与未添加recombinantcystatin情况下肌球蛋白的含量变化趋势。结果表明重组cystatin对木瓜蛋白酶具有较强的抑制活性,曲线方程为y=0.0234x 0.0059。SDS PAGE电泳和分析结果表明添加重组cystatin可使鱼糜肌球蛋白具缓和内源性蛋白酶降解作用,具有明显的保护作用。 相似文献
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加热对远东拟沙丁鱼鱼糜制品质量的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
本文对沙丁鱼鱼糜就不同的加热方法初步探讨了其最佳加热条件,采用了新的压出水分指标(Ip-A)方法评价鱼糜制品的保水性,讨论了加热方法和保水性的关系,并测定了鱼糜加热前后肌球蛋白的变化。结果表明:以 30℃ 120分钟、90℃ 30分钟和 40℃ 20分钟、90℃ 30分钟的加热方法,鱼糜制品的质量为好;60℃是远东拟沙丁鱼鱼糜的凝胶劣化温度。压出水分(Ip-A)与凝胶强度呈线性负相关(r=-0.9649);在30℃和40℃的凝胶化温度下,肌球蛋白残留量迅速下降.而在60℃加热时,下降反而缓慢;在90℃加热时,肌球蛋白的残留量与加热时间的对数呈线性负相关(r=-0.9957)。 相似文献
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对虾的营养与药用食疗价值很高.它是高蛋白低脂肪的营养佳品,据分析,每百克虾肉含蛋白质20.6克,脂肪0.7克,并含有丰富的原肌球蛋白和副肌球蛋白.对虾还具有较高的药用食疗功效.据古代及现代药书等记载,对虾味甘,咸,性温,具有补肾壮阳,滋阴和镇静等功能,可用于治疗肾虚阳痿、手足抽搐、神经衰弱等症.食用海产对虾有补肾壮阳之功,是补肾益精佳品.…… 相似文献
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鲢鱼糜凝胶形成过程中化学作用力及蛋白质构象的变化 总被引：5，自引：0，他引：5
采用化学法、激光拉曼光谱、圆二色谱等先进的现代检测分析手段，研究鲢（Hypophthalmichthys molitrix）鱼糜凝胶形成过程中离子键、氢键、疏水相互作用、二硫键、非二硫共价键等化学作用力对鱼糜凝胶形成的作用，并对蛋白质构象进行了表征，探索化学作用力及蛋白质构象对鲢鱼糜凝胶网络结构形成的作用。结果表明，在鱼糜凝胶形成过程中，离子键、氢键显著减少，而疏水相互作用、二硫键、非二硫共价键显著增加。疏水相互作用、二硫键、非二硫共价键是维持鲢鱼糜凝胶稳定结构的主要化学作用力。40℃和90℃两段加热过程中，鲢肌球蛋白的α-螺旋结构部分转变成转角和无规卷曲结构，以无规卷曲结构为主。鲢鱼糜凝胶中肌球蛋白的二级结构单元α-螺旋、转角、无规卷曲结构的百分含量分别为33．70％、12．40％、53．90％，其中α-螺旋和无规卷曲结构是维持鲢鱼糜凝胶网络结构的主要蛋白质构象。维持鲢鱼糜凝胶稳定结构的主要化学作用力为疏水相互作用、二硫键、非二硫共价键，主要蛋白质构象为α-螺旋和无规卷曲结构。[中国水产科学，2008，15（3）：469-475] 相似文献
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根据已经获得的两种鲢肌球蛋白重链同工型基因(低温型sc-w和高温型sc-s)在3′端展现的明显差异,设计了2个特异性的反向引物,以鲤科鱼类肌球蛋白重链5′端的保守序列为正向引物,通过Long-PCR对编码鲢两种肌球蛋白重链同工型的球状结构域(Subfragment-1,S1)的全长基因进行了克隆和测序,并推断出它们一级结构的氨基酸序列。研究结果表明,sc-w与sc-s在S1的初级结构上显示80.5%的同源性、与已经报道的草鱼低温型(gc10)有97.2%的高同源性;sc-s则与草鱼中间型(gcI)和高温型(gc30)显示了分别为98.4%和97.1%的高同源性。低温型的sc-w和gc10在S1初级结构上展现的特有变异主要发生在43个氨基酸残基位点,其中15个属保守性残基。对S1区域中两个功能性的表面环loop1(与ATP结合位点有关)和loop2(与肌动蛋白结合位点有关)的结构解析发现,sc-w和gc10在两个表面环的长度、残基电荷分布和氨基酸组成等方面与其它同工型之间存在明显差异,揭示了这两个表面环的结构差异可能影响了栖息于不同环境温度下的淡水鱼的肌球蛋白分子马达功能。分子系统树的分析结果进一步证明,鱼类栖... 相似文献
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《南方水产》2002,(6)
021田5静水压力对尼罗罗非鱼肌球蛋白聚MPa处理后,肌球蛋白开始变性,若用集性和粘弹性的影响=Effectof场山旧s怕60 101 .33 Mpa处理,肌球蛋白开始聚集并难卿~on雌男印gation and viscoelastic卿而es溶,再用151·99MPa以上压力处理发生娜of tilaPia(。陀认m功‘成奴icus)myosin〔刊,淀并形成凝胶。图5参24(章继华)英」/Hsu KC,Ko W-C// J .F以沼Sci.一021096熏制鲸鱼产品的生产及质量检测=2田l,66(8)一1 158一1162R记uetion and职allty assessment Ofasmokedtu- 设置。℃环境测定了50.66一202 .65M田a na(枷梅朋脚咖心)p代duct【刊,… 相似文献
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ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳的分析结果表明：在－２０℃下经２１０天冻藏的鲤，肌球蛋白重链鱼带明显变淡，胶电泳片上的顶部色带显著增浓并有新色带出现，这表明蛋白质在冻藏过程中发生连结反应而沉积或出现新蛋白肽链。这些都证明鲤肌肉在冻藏过程中质构劣变。 相似文献
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《中国渔业质量与标准》2015,(5)
近年来食物引起的过敏性疾病发病率持续增高,严重影响了人们的生活质量。水产品是中国主要的致敏性食物,且东部沿海地区过敏发病率较高。已发现的水产食物过敏原有小清蛋白(parvalbumin)、原肌球蛋白(tropomyosin)、精氨酸激酶(arginine kinase)、肌钙结合蛋白(sarcoplasmic calcium-binding protein)、肌球蛋白轻链(myosin light chain)、肌钙蛋白C(troponin C)和磷酸丙糖异构酶(triosephosphate isomerase)等。水产食物过敏反应存在免疫交叉性,过敏原的抗原表位是引发过敏反应的基础,表位组成和空间构型等特征决定了抗原的特异性。本文着重对国内外水产食物过敏原及其抗原表位的研究现状进行了概述,以期为水产食物过敏疾病诊断治疗和低致敏性食品开发提供指导。 相似文献