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细胞体外培养被广泛地应用到各种生物研究领域,水产的病毒检测的定性实验也是用细胞培养进行各种病毒的分离,如:传染性造血器官坏死病的病毒可以在铜吻磷鳃太阳鱼成纤维细胞(BF-2)培养中出现细胞病变(CPE)、鲤春病毒血症的病毒在鲤鱼上皮瘤细胞(EPC)培养中出现CPE,常用的细胞系有,铜吻磷鳃太阳鱼成纤维细胞(BF-2)、大鳞大马哈鱼胚胎细胞(CHSE-214)、鲤鱼上皮瘤细胞(EPC)、虹鳟鱼性腺细胞(RTG-2)等.当细胞一旦在体外培养时,有时会出现因操作不甚,造成的污染;有时也因受到外界各种因素的影响,发生生物特性的变化,引起细胞系的退变或死亡. 相似文献
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草鱼(Ctenopharyngodon idellus)性腺细胞系(GCO)是中国科学院水生生物研究所在20世纪70年代开展草鱼出血病研究时建立的一株细胞系,迄今已传至300多代,在中国鱼类病毒学研究领域发挥了重要作用.本研究采用形态学观察、细胞生长曲线测定、细胞周期测定、细胞核型分析、细胞凋亡检测、电镜观察等方法,对GCO的生长特性及鲤春病毒血症病毒(SvCv)在该细胞中的增殖特性等进行了研究.结果显示,GCO细胞的最适生长温度为25℃,在M199和MEM等细胞培养液中均能较好地生长,培养液中最适的胎牛血清浓度为10％.测定了GCO细胞系对SVCV病毒的敏感性,发现与鲤(Cyprinus carpio)上皮瘤细胞系(EPC)、肥头鲤(Pimephales promelas)细胞系(FHM)、大鳞大麻哈鱼(Oncorhynchus tshawytscha)胚胎细胞系(CHSE-214)等世界动物卫生组织(OIE)推荐和各检测实验室常用的鱼类细胞系相比,GCO细胞系对SVCV表现出非常高的敏感性.生长盐线、电镜观察和凋亡实验显示,SVCV能引起GCO细胞系出现明显而稳定的细胞病变,引起GCO细胞系出现凋亡,并在细胞质中大量增殖.结果表明,GCO细胞系适用于SVCV病毒的分离、检测以及病毒致病性的有关研究.GCO细胞的适宜生长温度为15-28℃,这一特点将使它可以广泛地用于多种水生动物病毒的分离. 相似文献
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动物胚胎干细胞的建立与应用 总被引：1，自引：0，他引：1
胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ES细胞)是从早期胚胎内细胞团(inner cell mass ICM)或原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)经体外分化抑制培养分离克隆的。本文介绍了胚胎干细胞的概念,对ES细胞分离、培养和鉴定方法及在动物遗传育种中的应用进行了综述。 相似文献
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不同因子对花鲈胚胎干细胞增殖的影响 总被引：2，自引：1，他引：2
胚胎干细胞(ES细胞)是从动物早期发育胚胎中分离出来的具有发育全能性的一种未分化细胞系。维持花鲈胚胎干细胞(LJES1)的体外生长、增殖及未分化状态需要在培养基中添加一些生长因子。实验通过配制省略1种或多种因子的培养基PESM0～10，计数LJES1细胞在各培养基中增殖的数量，确定各种生长因子对LJES1细胞的增殖作用。同时，对LIF因子和bFGF因子的作用进行了重点的研究，发现LIF因子对早期的LJES1细胞增殖几乎没有作用，其主要作用是维持LJES1细胞的未分化状态，但对晚期LJES1细胞的增殖有一定的作用；bFGF因子对LJES1细胞有强烈的刺激增殖的作用；鲈鱼胚胎抽提液(PEE)以及鲈鱼血清(FS)也促进了LJES1细胞的增殖，2-巯基乙醇(2-ME)具有还原血清中的含硫化合物、防止过氧化物对LJES1细胞的损害及促进贴壁的作用，因而也促进了LJES1细胞的增殖。 相似文献
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《渔业科学进展》2016,(6)
草鱼(Ctenopharyngodon idellus)性腺细胞系(GCO)是中国科学院水生生物研究所在20世纪70年代开展草鱼出血病研究时建立的一株细胞系,迄今已传至300多代,在中国鱼类病毒学研究领域发挥了重要作用。本研究采用形态学观察、细胞生长曲线测定、细胞周期测定、细胞核型分析、细胞凋亡检测、电镜观察等方法,对GCO的生长特性及鲤春病毒血症病毒(SVCV)在该细胞中的增殖特性等进行了研究。结果显示,GCO细胞的最适生长温度为25℃,在M199和MEM等细胞培养液中均能较好地生长,培养液中最适的胎牛血清浓度为10%。测定了GCO细胞系对SVCV病毒的敏感性,发现与鲤(Cyprinus carpio)上皮瘤细胞系(EPC)、肥头鲤(Pimephales promelas)细胞系(FHM)、大鳞大麻哈鱼(Oncorhynchus tshawytscha)胚胎细胞系(CHSE-214)等世界动物卫生组织(OIE)推荐和各检测实验室常用的鱼类细胞系相比,GCO细胞系对SVCV表现出非常高的敏感性。生长曲线、电镜观察和凋亡实验显示,SVCV能引起GCO细胞系出现明显而稳定的细胞病变,引起GCO细胞系出现凋亡,并在细胞质中大量增殖。结果表明,GCO细胞系适用于SVCV病毒的分离、检测以及病毒致病性的有关研究。GCO细胞的适宜生长温度为15–28℃,这一特点将使它可以广泛地用于多种水生动物病毒的分离。 相似文献
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为更好地开展鳜基因功能研究和药物筛选工作,提高基因转染效率,本研究以鳜囊胚期胚胎为材料,采用含有20%胎牛血清的DMEM培养基进行培养,建立了生长稳定的鳜胚胎细胞系MFE。在此基础上,采用绿色荧光蛋白(GFP)作为标记物,在HEK293T细胞中体外包装逆转录病毒,再感染MFE细胞系。MTT法分析表明传代后细胞培养96 h内,细胞生长率变化也经历增殖、降低到达稳定期。而且MFE细胞能稳定表达GFP基因,感染效率为20%±5%,而脂质体转染效率为3%±2%。可见包装病毒感染细胞不仅能获得稳转细胞系,效率也远高于脂质体瞬时转染。荧光定量PCR分析表明,MFE细胞系能表达Irf1、Irf3和Irf7基因,Irf1基因表达量最高。MFE细胞系受到poly I:C刺激后,Irf1、Irf3和Irf7的表达量分别升高3.5,2.3和2.1倍。因此,MFE细胞通过病毒感染可以获得较高的转染效率,该细胞可作为鳜免疫相关基因功能研究的工具。 相似文献
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干细胞(Stem Cell)是一类具有分化潜能和自我复制的早期未分化细胞。胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ES细胞)是一种早期胚胎内细胞团(inner cell mass,ICM)或原始生殖细胞(primordial germ cell,PGC)经体外分化抑制培养,分离和克隆得到的具有发育全能性的高度未分化细胞。本文综述了胚胎干细胞的形态学、生长特性、免疫学鉴定方法,ES细胞抑制分化和诱导分化的机理以及饲养层、血清和细胞因子等影响胚胎干细胞分离克隆的因素,并进一步阐述了胚胎干细胞的应用前景以及存在的问题。 相似文献
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漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigma)是中国近年新开发的重要海水养殖鱼类,本研究以漠斑牙鲆囊胚期胚胎为材料,探索了鱼类胚胎细胞分离和培养的条件,建立了漠斑牙鲆胚胎细胞培养技术。建立的漠斑牙鲆胚胎细胞系(SFEC)至今已经培养了240多天,传至80多代。SFEC的完全培养基采用添加抗生素、胎牛血清(FBS)、花鲈血清(SPS)、成纤维生长因子(bFGF)的DMEM。SFEC形态小而呈圆形、多边形,在培养基中生长迅速。本实验检测了温度、胎牛血清浓度、成纤维生长因子对SFEC生长的影响。在24~30℃之间SFEC生长良好,但当温度低于18℃时细胞生长速度明显减慢。在含15?S的培养基中,SFEC生长速度明显比在含7.5?S的培养基中快,在培养基中添加bFGF可以使细胞生长速度显著提高。SFEC的二倍体核型为2n=6st 42t。将GFP报告基因通过脂质体介导的方法转入SFEC中并成功地获得了表达,转化率为20%。 相似文献
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草鱼肾组织细胞系CIK的建立及其生物学特性 总被引：20，自引：3，他引：20
作者于1982年1月开始进行草鱼肾组织单层细胞培养，至今已连续培养32个月，传至120多代，建立了细胞系，定名为草鱼肾组织细胞系(CIK)。本文介绍了原代和传代培养、细胞形态、细胞生长速度和分裂指数、细胞的保存和对温度的适应性、细胞染色体分析以及细胞系对病毒敏感性的试验和研究结果。CIK生长迅速、适应性强、以20℃-38℃生长较好，28℃左右生长稳定，pH为6．5时仍能保持致密单层，染色体数为非整倍体，众数为55。对草鱼出血病左右病毒FRV具敏感性。 相似文献
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为了明确鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus, AngHV)的生物学及理化特性,本实验利用一株从欧洲鳗鲡"脱黏败血综合征"病料中分离的AngHV病毒株,研究了其增殖特性及其对主要鱼类细胞系的感染敏感性,进一步分析了其对热、酸碱、氯仿和乙醚等理化因子的耐受性。结果发现,AngHV感染的鳗鲡卵巢细胞系(eel ovary cell line, EO)内可见典型的疱疹病毒样颗粒,细胞出现时序性细胞病变;AngHV可在EO细胞系内稳定传代,较适宜扩繁温度为25～27°C,不能在鲤上皮瘤细胞系(epithelioma papilloma cyprinid cell line, EPC)、草鱼卵巢细胞系(grass carp ovary cell line, CO)、胖头逓肌肉细胞系(fathead minnow cell line, FHM)、大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(chinook salmon embryo cell line,CHSE-214)、虹鳟性腺细胞系(rainbow trout gonad cell line, RTG-2)及蓝鳃太阳鱼细胞系(bluegill fry cell line, BF-2)等鱼类细胞内增殖;理化特性分析表明,37°C处理30 min,AngHV滴度降低不明显,而56°C处理30 min可完全灭活AngHV;AngHV对酸(pH 3.0)敏感,而对碱(pH 10.0)较耐受,同时对氯仿和乙醚敏感。本研究结果可为AngHV的综合防控及疫苗的开发提供参考依据。 相似文献
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鱼类细胞系的染色体可自然发生变异或受环境条件影响发生变异。在一个成熟的细胞系中会发生成千上万的染色体变异。而这些变异不会影响到细胞系的存活。从细胞遗传学观点出发，比较in uitro和生物体核型的进化是很有意义的。然而目前尚很少有关于鱼类细胞系核型演化的研究报道。本研究分析比较了RTA（虹鳟幼鱼细胞系），RTO（虹鳟卵巢细胞系）CHSE－214（大鳞大麻哈胚胎细胞系）等三个处于不同培养阶段的鱼类细胞系的染色体变异。CHSE－214的模式染色体数为62和64，其变异幅度为39－123。RTA的模式染色体数为110－115，变异幅度为27－400。在第17代时，RTO的模式染色体数为60，其变异幅度已达到41－128。所有三个细胞系均为异倍体系。一个巨形细胞，核内包括超过2000条以上的染色体在CHSE－214中出现，其染色体数大于模式细胞30多倍，其倍性超过64倍体。在CHSE－214和RTA中双着丝点染色体，环状、断片、微体、缺失、交换等染色体变异很高。在RTO的最初几代（五代以前），几乎没有染色体数量和结构变异。第十代以后，染色体数量变异幅度已经很高，超过50％。在RTA和CHSE－214中，还发出了大量的具有不规则细胞核，细胞由许多微核构成，细胞核中间具有园孔，细胞微核之间具有桥型物连接的细胞，还发现有多极纺锤形，核内有丝分裂细胞和呒纺锤丝的丝分裂细胞。这些变异可能是细胞系染色体数量变异的原因。本还用Q－带，DAPI－带和G－带技术进行了三个细胞系的核型分析，发现CHSE－214具1－4条特异染色的染色体，这可能是该细胞系所具有的特异标志。 相似文献
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利用3个不同物种的水生动物细胞系,包括爪蟾肾细胞系(A6)、大鲵胸腺细胞系(GSTC)和鲤上皮瘤细胞系(EPC),分别用沼泽绿牛蛙蛙病毒(RGV)和大鲵蛙病毒(ADRV)感染,进一步研究细胞病变显微形态、病毒滴度、细胞病变与不同感染时间的相关性等。结果显示,在光镜下可见感染病毒的细胞发生病变,A6和EPC细胞肿胀或破裂;GSTC细胞收缩或聚在一起形成多层。同种水产动物细胞系对不同蛙病毒的敏感性不同,在A6、EPC和GSTC细胞中,RGV的滴度分别为10~(3.6)、10~(5.9)和10~(6.6) TCID_(50)/m L;ADRV的滴度分别为10~(4.3)、10~(5.4)和10~(6.1) TCID_(50)/m L,表明GSTC细胞系对两种蛙病毒都更敏感。研究为后续蛙病毒致病机理提供了有用的信息和重要实验材料。 相似文献
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胚胎干细胞(Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌ,ＥＳ细胞)是从动物早期发育胚胎内细胞团或原始生殖细胞分离得到的一种未分化的永久性细胞系,它一方面保留了所有的发育潜力,在适合的条件下,能够分化成多种类型的细胞、组织。将ＥＳ细胞移植到动物囊胚后,它可以参与宿主胚胎各种组织的构成,形成嵌合体,直至达到种系嵌合,遗传给后代;另一方面,人们可以对ＥＳ细胞的基因组进行各种遗传操作,包括随机引入外源基因到ＥＳ细胞基因组中,或通过同源重组,定点引入外源基因到ＥＳ细胞基因组中或破坏基因组中某一特定的靶基因;通过细胞移植或核移植技… 相似文献
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宽口裂腹鱼为塔里木河水系的特有物种。为建立其尾鳍细胞系，笔者采用组织块法和胰酶消化法相结合，分别用含胎牛血清的DME/F12培养基体外培养尾鳍组织。初步建立宽口裂腹鱼尾鳍细胞系，细胞传代培养至45代。细胞呈悬浮生长，最适培养液为DME/F12,最适胎牛血清质量分数为20%,最适温度为25℃。第10代细胞的群体倍增时间为24.94 h,细胞呈“S”型生长。第6代细胞液氮冷冻保存180 d后复苏，经台盼蓝染色计数，(88.72±0.99)%的宽口裂腹鱼尾鳍细胞系具有活性，复苏后增殖速度快，可正常传代。细菌、真菌、支原体的鉴定未发现污染。第10代细胞线粒体16S rRNA基因测序结果与GenBank中基因序列做一致性对比，宽口裂腹鱼尾鳍细胞系与NC036933.1的一致率达99.91%,从分子水平证明，宽口裂腹鱼尾鳍细胞系来自宽口裂腹鱼。NaCl质量分数为8‰时，宽口裂腹鱼尾鳍细胞系的相对增殖率最高；NaHCO3质量浓度为7 g/L时，宽口裂腹鱼尾鳍细胞系的相对增殖率最高；宽口裂腹鱼尾鳍细胞系的相对增殖率随盐碱度增加呈先升后降趋势。 相似文献
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斑点叉尾(鱼回)肾脏组织细胞系的建立及其生物学特性 总被引：1，自引：0，他引：1
采用组织块移植培养技术,对来源于斑点叉尾(鱼回)(Icttalurus punctatus Rafinesque)肾脏组织的细胞进行原代培养,建立了斑点叉尾(鱼回)肾脏组织细胞系,定名为CCK,目前已稳定传代培养70多次.斑点叉尾(鱼回)肾脏组织细胞为成纤维样细胞,最佳培养基为M199,最适培养温度范围为28～32℃,培养基血清体积分数为10%.在此条件下,CCK细胞的倍增时间为38.9～41.0 h.斑点叉尾(鱼回)肾脏细胞的集落形成效率为(74.16±3.54)%,第9代传代细胞的染色体数目为正常二倍体2n=58,第33代传代细胞的染色体众数为60.液氮冷冻保存6个月后复苏的细胞经台盼兰染色检验,(86.69±1.04)%的细胞仍保持活性,细胞复苏后培养生长旺盛.通过对第17代离体培养细胞的28S rRNA基因进行PCR扩增及序列分析与比对,表明该细胞系来源于斑点叉尾(鱼回).[中国水产科学,2009,16(1):75-81] 相似文献
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虎纹蛙病毒体外培养及其理化特性 总被引：2，自引：0，他引：2
从发病濒死的虎纹蛙（Rana tigrina rugulosa)蝌蚪中分离到一种病毒，在25℃条件下，该病毒能在鲤鱼表皮瘤细胞系（EPC），胖头Shiu肌肉细胞系（FHM）和草鱼性腺细胞系（CO）三种鱼类细胞上产生空斑状的细胞病理变化（CPE）。该病毒对氯仿，热（56℃，20min)和酸（pH3)敏感，其体外培养的适合增殖温度范围为20-30℃，电镜下观察，病毒为对称的二十面体，切面正六边形，对角直径125nm左右。 相似文献
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南方鲶晚期胚胎细胞经原代和传代培养４０次，历时３６个月建立了上皮型细胞系（ＳＭ）。该细胞系表现低世代生长缓慢，每代时间随代龄增加而减少，经ＦＭＦ测定：Ｇ１期细胞占７０．％－８５．６％；Ｓ期细胞占１２．２％－２５．３％，Ｇ２＋Ｍ期细胞占１．６％－４．６％，由３０代到４０代Ｇ２＋Ｍ细胞增加了一倍多，ＳＭ细胞能在１－４℃冰箱长期存活并可保持繁殖能力达１３个月。 相似文献
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鱼类细胞是开展鱼类病毒分离鉴定、功能基因分析以及生物制品制备等研究的重要物质基础。鳜(Siniperca chuatsi)是深受养殖者和消费者欢迎的养殖品种。随着鳜鱼养殖产量的逐年增加,其病害问题尤其是病毒病问题也日趋严重,但是,可用于鳜鱼病毒分离和基因功能分析的鳜细胞系缺乏。本研究采用组织块消化法,对来源鳜脑组织的细胞进行原代培养,建立了鳜脑组织细胞系,命名为MFB。MFB细胞在28℃含10%胎牛血清的L-15中已稳定传代超过70次,第25代鳜脑组织细胞的染色体众数为56。采用免疫荧光细胞化学技术(β-tubulin和Neu-N)鉴定MFB细胞的神经元纯度,结果显示,培养的MFB细胞为神经元类细胞。病毒敏感性实验结果显示,鳜蛙虹彩病毒(MFRaIV)、大口黑鲈蛙虹彩病毒(LMBRaIV)和大鲵虹彩病毒(GSIV)均可在MFB细胞中产生典型细胞病变效应,病毒滴度分别为108.68±0.12、108.36±0.15、1010.15±1.85 TCID50/mL。使用脂质体Lipofectamine®2000将pEGFP-N1转入MFB细胞,转染效率可达20%。本研究建立的鳜脑组织细胞系不仅对多种蛙虹彩病毒敏感,而且转染质粒效率较高,为鳜病毒性病原的分离及基因功能研究奠定了前期基础。 相似文献