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分离纯化草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肾中性粒细胞、鉴定和检测其活性, 目的在于为研究中性粒细胞的功能和免疫防御机制提供细胞材料。本研究使用鱼类脏器组织中性粒细胞分离试剂盒和差异贴壁法分离获得草鱼肾中性粒细胞; 应用迪夫氏染色、碘化钾-吡啰红 G (KI-Py G)染色、电镜技术鉴定细胞形态, 使用多功能酶标仪检测经 MPA 刺激的细胞活性, 台盼蓝染色法和 CCK-8 检测细胞存活率。结果显示, 获得的细胞大小均一, 细胞核圆形或肾形, 胞质有 A、B 型颗粒, 表面有皱褶, 具有中性粒细胞的形态特征; 细胞纯度达(99.3±0.53)%, 细胞活力达 (97.70±0.76)%, 在体外培养 24 h 内细胞存活率可保持在(89.91±3.56)%; 在 PMA 刺激下检测到细胞表达 MPO、 ROS、NO 和 NETs 的量显著提高(P＜0.05), 与刺激时间呈正相关。结果证实, 分离的细胞具有很好的活力, 具有中性粒细胞的功能特征。本研究成功建立草鱼中性粒细胞的分离方法, 细胞具有很好的活力, 可为深入研究鱼类中性粒细胞的功能和免疫机制提供基础。 相似文献
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草鱼肠巨噬细胞的分离培养与鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
为了建立草鱼肠巨噬细胞的分离培养与鉴定方法,本研究在采用刮除法结合胶原酶IV消化法制备肠黏膜固有层单细胞悬液的基础上,使用鱼类脏器单核细胞分离试剂盒分离肠巨噬细胞,再经差异贴壁法纯化肠巨噬细胞,最后,用含10%胎牛血清和5%草鱼血清的RPMI 1640完全培养液,在28°C、5%CO2条件下原代培养肠巨噬细胞,并通过细胞形态学检查、分子标记检测和功能验证实验加以鉴定。结果显示,每尾鱼(约250 g)肠巨噬细胞的获得量约为3×107个,细胞活率为99.6%,纯度达到95%以上;倒置显微镜观察发现,原代培养4~5 d的贴壁细胞多呈圆形或多边形,体积明显增大,细胞汇合度达到95%;光镜和电镜观察到染色后的贴壁细胞具有巨噬细胞的形态结构特征,贴壁细胞经荧光定量PCR在m RNA水平检测到巨噬细胞特异性标志分子(草鱼巨噬细胞集落刺激因子受体),功能实验证实贴壁细胞具有吞噬功能,脂多糖能够显著提高其呼吸暴发活性。本研究首次成功建立了草鱼肠巨噬细胞的分离培养与鉴定方法,为开展口服疫苗诱导的草鱼肠黏膜免疫应答研究提供细胞模型。 相似文献
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鱼类树突状细胞研究进展 总被引：1，自引：1，他引：0
树突状细胞(DCs)是目前已知的体内功能最强的抗原递呈细胞,是唯一能够激活初始T淋巴细胞反应的细胞,在先天性免疫、适应性免疫以及维持自身免疫耐受方面具有重要的作用,因此一直是免疫学研究的重要领域。本文简要综述了DCs的类型及其在动物体内的功能、各类DCs的细胞标记。总结了鱼类DCs的分离、纯化方法和形态学观察方法;现有研究表明,鱼类DCs具有吞噬细菌、刺激T细胞增殖、诱导CD4+T细胞的活化、表达DCs的标记基因、被Toll样受体的配体激活、迁移能力、引起混合淋巴细胞反应等生物学功能;不同鱼类DCs的分子标记并不完全一样;鱼类的头肾、肾、鳃、皮肤、胸腺、脾、肠等均有DCs的分布。目前,对鱼类DCs的研究虽然取得了一定进展,但仍有许多重要问题需要解决:①鱼类DCs目前缺乏明确的细胞标记,加强这方面的研究有助于提高鱼类DCs的分离、体内分布与功能的研究水平;②加强和完善鱼类DCs的分离、培养技术的研究,掌握各种鱼类DCs的分离培养方法;③加强鱼类DCs在抗原递呈中的功能研究,对深入分析鱼类免疫机理,合理设计和应用疫苗,具有重要的理论指导意义。 相似文献
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鱼类细胞是开展鱼类病毒分离鉴定、功能基因分析以及生物制品制备等研究的重要物质基础。鳜(Siniperca chuatsi)是深受养殖者和消费者欢迎的养殖品种。随着鳜鱼养殖产量的逐年增加,其病害问题尤其是病毒病问题也日趋严重,但是,可用于鳜鱼病毒分离和基因功能分析的鳜细胞系缺乏。本研究采用组织块消化法,对来源鳜脑组织的细胞进行原代培养,建立了鳜脑组织细胞系,命名为MFB。MFB细胞在28℃含10%胎牛血清的L-15中已稳定传代超过70次,第25代鳜脑组织细胞的染色体众数为56。采用免疫荧光细胞化学技术(β-tubulin和Neu-N)鉴定MFB细胞的神经元纯度,结果显示,培养的MFB细胞为神经元类细胞。病毒敏感性实验结果显示,鳜蛙虹彩病毒(MFRaIV)、大口黑鲈蛙虹彩病毒(LMBRaIV)和大鲵虹彩病毒(GSIV)均可在MFB细胞中产生典型细胞病变效应,病毒滴度分别为108.68±0.12、108.36±0.15、1010.15±1.85 TCID50/mL。使用脂质体Lipofectamine®2000将pEGFP-N1转入MFB细胞,转染效率可达20%。本研究建立的鳜脑组织细胞系不仅对多种蛙虹彩病毒敏感,而且转染质粒效率较高,为鳜病毒性病原的分离及基因功能研究奠定了前期基础。 相似文献
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对40尾野生青石爬鮡进行了血液生化指标、血细胞分类与发生研究。测得血浆的总蛋白为(48.35±3.60) g/L,白蛋白为(8.73±0.54) g/L,球蛋白为(39.63±3.10) g/L,血浆白蛋白与球蛋白比为(0.22±0.01),甘油三酯为(5.05±2.14) mmol/L,总胆固醇为(16.66±3.64) mmol/L,极低密度脂蛋白为(1.01±0.43) mmol/L,葡萄糖为(5.27±2.43) mmol/L。血液生化指标检测结果表明,青石爬鮡血浆中总蛋白与球蛋白、甘油三酯与胆固醇较高,葡萄糖较低,具有活动量较大和冷水性鱼类的特点,主要利用脂肪和蛋白质作为能量。细胞学显示出其外周血液包含红细胞,核影,淋巴细胞,血栓细胞,嗜中性粒细胞和单核细胞。血涂片计数为红细胞96.58％,其中成熟红细胞占65.92％,幼稚红细胞占30.66％。白细胞为3.42％,其中嗜中性粒细胞0.14％、单核细胞0.07％、淋巴细胞2.37％、血栓细胞0.85％。白细胞中淋巴细胞和血栓细胞数量较多。原始血细胞主要在中肾和头肾中,在脾脏中也有部分原始白细胞,而肝脏和外周血液中未见原始血细胞。中肾和头肾是青石爬鮡的主要造血器官,其中红细胞主要由头肾产生,白细胞主要由中肾产生。脾脏亦产生少量白细胞。 相似文献
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为考察食性对鲤科鱼类流速选择行为的影响,本研究选择滤食性的鲢摘要可以不放拉丁学名,请补充在正文出现第一个的位置和鳙、草食性的草鱼和中华倒刺鲃、以及杂食性的鲫和锦鲫作为实验对象;在(25 ± 1) ℃条件下将单尾实验鱼置于梯度流速选择仪（流速范围为11.86-65 .45 cm/s,等距离划分为5个流速区域）中拍摄1 h,采用Ethovision XT19软件分析视频资料并计算六种实验鱼在不同流速区域平均停留时间（Pt,%）、平均进入频次（F,次 / h）和单次进入停留时间（T,s）等流速选择行为指标。结果显示：（1）六种实验鱼的流速选择行为均呈现出两种流速偏好趋势,一类表现为偏好缓流（或静水）（最低流速区域的Pt >50%）,被定义为Ⅰ型;另一类个体Pt随水流速度的变化出现不同程度的波动,最大Pt通常出现在某一中等流速区,则定义为Ⅱ型;（2）食性对鱼类流速偏好行为有显著影响,Ⅰ型个体中滤食性鱼类对静水或缓流偏好显著大于其他两种食性的鱼类,其中鳙和鲢的Ⅰ型个体在最低端流速区域Pt大于92%;滤食性鲢和鳙的Ⅱ型个体偏好流速高于杂食性的鲫和锦鲫。草食性的草鱼和中华倒刺鲃Ⅱ型流速偏好均不明显,但其在中间速流速区域F值最大。研究表明：六种鲤科鱼类的流速偏好行为存在Ⅰ型和Ⅱ型的表型分化并且差异明显,实验鱼的流速偏好行为与食性有关。 相似文献
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用特异化饵料免疫预防草鱼出血病 总被引：2，自引：0，他引：2
草鱼出血病是呼肠孤病毒引起的病毒性疾病，严重影响着草鱼的成活率。 70年代以来，国内对病毒性出血病的防治进行了免疫研究，获得比较成功的是注射法和浸泡法。生产实践表明：注射接种虽有较好效果，但操作不方便，费工费时，还易损伤鱼体，尤其对大规模的鱼种生产更难于应用，在生产中推广有一定的难度；浸泡法免疫效果不理想，而且疫苗用量大，成本较高。因此，研究探索适合养殖鱼类特点的更有效、方便、经济的疫苗接种途径已成为预防草鱼出血病迫切需要解决的课题。我们用草鱼病毒性出血病细胞疫苗处理的特异化饵料，在草鱼苗开口期投… 相似文献
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通过检测注入斑节对虾(Penaeus monodon)血淋巴内的鳗弧菌(Vibrio anguillarumH)浓度、血淋巴细胞浓度和血淋巴细胞的组成变化,研究斑节对虾血淋巴细胞对进入体内细菌的清除作用。实验显示,斑节对虾能够迅速清除注入其体内的鳗弧菌。注射鳗弧菌悬液(107~108CFU/mL)5 min后,血淋巴中可检测到的鳗弧菌浓度是(1.4±0.6)×106CFU/mL,而2 h后所检测到的鳗弧菌的浓度仅相当于前者的3.1%。7天后,仅在部分个体的血淋巴中检测到少量鳗弧菌。伴随着血淋巴液内鳗弧菌的减少,对虾的血淋巴细胞浓度发生变化。鳗弧菌注入对虾体内5 min后,血淋巴细胞浓度为(3.51±1.69)×107/mL,注射后2 h时达到最低值,为(2.39±1.76)×107/mL,然后逐步恢复,注射后48 h达到(3.97±1.60)×107/mL。对照组血淋巴细胞浓度起初略微降低,然后逐步增加,在2 h达到最大值后又逐渐降低;除注射后48 h外,对照组血淋巴细胞浓度始终高于实验组。鳗弧菌注射入斑节对虾体内后,不同的细胞种类呈现出不同的变化规律:在注射后2 h,对照组透明细胞占总细胞数的比例显著高于实验组,对照组半颗粒细胞的含量低于实验组。注射鳗弧菌后10 min,血淋巴中颗粒细胞的相对含量显著降低,此时实验组的颗粒细胞相对含量也低于对照组。而对于降解细胞细胞核的相对含量,实验组和对照组表现出了显著不同的变化趋势。在对照组中,24 h内其含量一直在降低,而后恢复;而对照组却在注射10 min时达到最高值,而后遵循对照组类似的变化。[中国水产科学,2006,13(1):28-32] 相似文献
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甲基汞对鲤鱼鳃组织及氯细胞的影响 总被引：3，自引：0，他引：3
水体中甲基汞(CH3ClHg)浓度(μg/L)分别为1、5、10、25、50、100、200和1、2．5、5、10、20、40、50染毒鲤鱼种24h和一周。鱼鳃石蜡切片观察结果：50μg/L染毒24h和20μg/L染毒1周鱼，鳃丝组织末见异常变化；100μg/L染毒24h和40μg/L染毒1周鱼，鳃丝出现轻微混乱且向上卷曲；200μg/L染毒24h和80μg/L染毒1周鱼，外表皮层从基膜脱落，鳃丝严重卷曲。鳃氯细胞的结构变化：100μg/L汞染毒24h40μg/L染毒1周鱼，氯细胞的细胞膜质分散，偶尔可见肿胀线粒体和空泡膜管系统；暴露于甲基汞200μg／L中24h和80μg/L1周鱼的氯细胞损伤明显：细胞质内空泡大量出现且无规律，膜管系统空泡增加，线粒体多数变成肿胀或已崩溃解体。 相似文献
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鲢、鳙胰蛋白酶的研究 总被引：29，自引：2，他引：29
鲢、鳙胰蛋白酶的研究黄峰，严安生，汪小东（华中农业大学，武汉４３００７０）关键词鲢，鳙，胰蛋白酶ＳＴＵＤＩＥＳＩＮＴＲＹＰＳＩＮＩＮＳＩＬＶＥＲＣＡＲＰＡＮＤＢＩＧＨＥＡＤＣＡＲＰ￥ＨｕａｎｇＦｅｎｇ；ＹａｎＡｎｓｈｅｎｇａｎｄＷａｎｇＸｉａｏｄｏｎ... 相似文献
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To separate the connective tissue cells expressing the 43-kDa zinc-binding protein from the common carp, mucosa of the digestive
tract of the fish was removed by scraping with a glass slide, and the de-mucosa tissue was digested with a collagenase type
IV solution. The cells collected from the collagenase-treated suspension were rather homogeneous, and more than 90% of the
cells were round with a diameter of approximately 6 μm. Significant quantities of the 43kDa zinc-binding protein were shown
to be present on the cell surface of the approximately 6-μm cells. The mean zinc concentration in the cells was found to be
2.21 μg zinc/106 cells, which is approximately 20—30 times higher than that found in the other three fish species (grass carp, silver carp,
tilapia), studied. The present work may provide a basis for the culture of these cells. 相似文献
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长江中下游鲢、鳙、草鱼、青鱼种群分化的同工酶分析 总被引：30，自引：0，他引：30
为查明长江中下游鲢、鳙、草鱼、青鱼有无不同种群，用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定了长江中游天鹅洲故道、汉阳、瑞昌江段和下游安庆江段鲢、鳙、草鱼、青鱼各４个群体间的生化遗传变异。同种鱼各群体间的遗传变异未见有显著差异。遗传距离Ｄ值均小于０．００１。由此，初步认为长江中下游的鲢、鳙、草鱼、青鱼应各属一个没有显著遗传分化的种群，我们称之为“长江种群”。因而，在长江中下游选择一处优良保护场所就有可能达到就地保护长 相似文献
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用２４种随机引物对雅罗鱼亚科（Ｌｅｕｃｉｓｃｉｎａｅ）的草鱼,鲤亚科（Ｃｙｐｒｉｎｉｎａｅ）的柏氏鲤和３个地理种群鲤（荷包红鲤、黑龙江野鲤和德国镜鲤）进行ＲＡＰＤ分析,构建了这５种鱼类的基因组指纹图谱。通过对获得的基因组指纹图谱的量化分析,利用ＵＰＧＭＡ重建了它们之间的亲缘关系。结果鲤种内３个地理种群之间的相似性高于鲤和柏氏鲤种间的相似性,而草鱼与另４种鲤亚科鱼类亚科之间的差异明显高于柏氏鲤、黑龙 相似文献
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水晶彩鲫、红鲫、锦鲤、荷包红鲤杂交子代的生长和体色研究 总被引：10，自引：0，他引：10
利用人工授精的方法,进行水晶彩鲫、红鲫、锦鲤和荷包红鲤的相互杂交试验,测定各个杂交组合子代的成活率、生长速度和体色分离比例。结果表明：4种鱼能够相互杂交受精,孵出鱼苗。孵化率锦鲤自交最低为46．4％,其它组合为70％～80％;杂交鱼苗经28d的人工饲养,水晶彩鲫与荷包红鲤、锦鲤的正、反杂交,同其它杂交组合比较有明显的差别,其生长速度慢,个体之间差异大,成活率低;杂交子代的体型分为3类：鲫鱼型、鲤鱼型和鲤鲫型。鳞片反光组织(虹彩细胞或鸟粪素细胞)为2类：完全型、缺失型。体色分离复杂多样,水晶彩鲫与红鲫杂交是水晶彩鲫,红鲫与锦鲤、荷包红鲤杂交是青灰色鲤鲫杂种,水晶彩鲫与锦鲤、荷包红鲤杂交都会出现水晶彩色和青灰色鲤鲫杂种。 相似文献
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水晶彩鲫、红鲫和锦鲤的腹膜脏层黑色素观察 总被引：6，自引：0，他引：6
对水晶彩鲫(Carassius auratus transparent coloredvar.)、红鲫(C.a.redvar.)和锦鲤(Cyprinus carpio ornamentalvar.)腹膜脏层黑色素进行肉眼观察和密度分布统计。结果表明,这3种鱼的不同体色个体,腹膜脏层黑色素的密度不同。依据黑色素的密度,将其分为Ⅰ~Ⅵ级。水晶彩鲫的腹膜脏层黑色素密度:肉白a个体为Ⅰ级(无黑色素分布),肉白b和红白个体多数在Ⅰ~Ⅱ级,红色个体多数在Ⅰ~Ⅳ级,杂色个体多数在Ⅳ~Ⅵ级,密度表现出依次递增的趋势。红鲫的腹膜脏层黑色素密度:白色个体分布在Ⅲ级,红白个体分布在Ⅲ~Ⅳ级,红色个体分布在Ⅲ~Ⅴ级,杂色分布在Ⅳ~Ⅵ级,青灰色分布在Ⅴ~Ⅵ级,密度依次也表现出递增的趋势。锦鲤的腹膜脏层黑色素密度:体表没有黑色斑纹的红、黄、白、红白和黄白等个体为Ⅰ级,无黑色素分布;体表有黑色斑纹的红黑、黄黑、白黑和红白黑等个体多数有黑色素出现,主要分布在Ⅳ级。[中国水产科学,2007,14(1):144-148] 相似文献
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鲤鱼尾鳍细胞的体外培养及其生长状态的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
采用组织块培养法，对鲤鱼尾鳍组织进行培养，在28℃温度下，用添加20％胎牛血清的M199培养基进行培养，在此过程中，对培养的细胞进行观察及研究，描述了细胞形态及其它相关细胞生物学特征。 相似文献
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主要报导长江原种亲鱼鲢、鳙、草鱼和青鱼的形态特征、年龄生长和繁殖特性。通过可数可量参数的测定，年龄生长、性成熟年龄、繁殖力、成熟系数及卵比重等单项的相对关系的研究，讨论并提出了原种亲鱼鲢、鳙、草鱼、青鱼的标准参数，可供原种场生产管理、原种检测及种质资源保护的依据。 相似文献