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Using Phage PSM‐1 to Control Shewanella marisflavi Infection in Juvenile Sea Cucumber,Apostichopus japonicus 
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下载免费PDF全文 Xitao Wang Jiancheng Zhang Lili Wang Xiaoyu Li Yongping Xu 《Journal of the World Aquaculture Society》2017,48(1):113-121
Shewanella marisflavi is considered responsible for infection in juvenile sea cucumber, Apostichopus japonicas. A bacteriophage specific to S. marisflavi was isolated from seafood wholesale market sewage and designated as vB_SmaM_PSM (PSM‐1). The phage was classified as a member of the Myoviridae family by negative staining transmission electronic microscopy. The stability of phage PSM‐1 was observed after treatment with different temperature gradients and pH values. The results showed that the lytic activity of phage PSM‐1 was optimum at 28 C with a pH of 7.0 and ceased at temperatures higher than 60 C. A one‐step growth curve analysis of the phage revealed eclipse and latent periods of 20 and 40 min, respectively, with a burst size of 219 plaque forming units per infected cell. The ability of phage PSM‐1 to inhibit the growth of S. marisflavi AP629 was tested in vitro using the phage with three multiplicity of infection (MOI) values of 0.1, 1, and 10. All treated cultures that produced an inhibition of the growth of S. marisflavi AP629 were compared with the untreated culture, and the treatment group with a MOI value of 10 showed the highest inhibition effect among the three doses. In an in vivo performance experiment, the sea cucumbers (15–20 g) were randomly assigned to five groups (one negative control, one antibiotic treatment group, and three phage treatment groups) in a phage injection trial as well as a phage immersion trial. All groups were infected with S. marisflavi strain AP629 (3.3 × 106 colony forming units/g, LD50 [lethal dose 50%] level) by intraperitoneal injection. After 8 d of observation, the survival rates ranged from 40 to 80% in all phage treatment groups, while 10% in the negative control group. The optimal therapeutic time points of the two trials were also determined. The results showed that using phage prior to infection could be a good choice to protect sea cucumbers. The overall results of this experiment indicate that using phage may be a feasible biological control agent to prevent S. marisflavi infection in sea cucumbers. 相似文献
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DGGE分析不同盐度仿刺参养殖环境中菌群多样性 总被引：1，自引：0，他引：1
采用16S rDNA的PCR-DGGE基因指纹技术对不同盐度仿刺参养殖水环境中的菌群多样性进行了分析。试验设置了22、26、30、34,4个盐度梯度,每隔10 d采样1次,通过PCR-DGGE指纹分析发现,仿刺参养殖环境存在着丰富多样的细菌。其中大多属于非可培养细菌,变形菌门和CFB门的种类是水体中的优势菌群,交替假单胞菌属是报道过的腐皮综合征的致病菌。根据DGGE指纹图谱的聚类分析发现,同等盐度条件下的样品之间存在一定的菌群相似性,并在聚类分析图中分别各自成簇。样品的多样性指数为1.7～2.3,不同盐度条件下,样品的多样性指数随着时间的推移变化不大。 相似文献
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本研究利用MRS培养基,从山东东营刺参(Apostichopusjaponicus)养殖池塘环境中分离到56株乳酸菌。以刺参腐皮综合征2种重要致病菌灿烂弧菌(Vibrio splendidus)和假交替单胞菌(Pseudoalteromonas nigrifaciens)为指示菌,采用牛津杯法测定所分离的乳酸菌对2株致病菌的抑制效果,筛选出1株具有较强抑菌活性的乳酸菌CSND-6,并对该细菌的形态、胞内产物和胞外产物的抑菌活性、生理生化实验、16S r DNA序列分析、菌株生长特性及对刺参安全性进行了研究。结果显示,菌株CSND-6对灿烂弧菌和假交替单胞菌的生长具有较好的抑制作用。其中,胞内产物的抑菌圈分别为17、22 mm,胞外产物的抑菌圈分别为25、31 mm。该菌株对刺参的高浓度浸浴胁迫实验结果表明,所分离的菌株对刺参是安全的。通过生理生化和16S rDNA序列分析表明,CSND-6属于乳杆菌科(Lactobacillaceae),与副干酪乳杆菌(LactobacillusparacaseiJCM1171)的相似性为99.83%。菌株CSND-6在30℃~44℃、pH为6~8范围内生长较快,24 h后进入对数生长期,28~32 h时达到生长高峰,最高值达2.10×109CFU/ml。本研究筛选的副干酪乳杆菌属于刺参池塘养殖环境中土著益生菌,对刺参的主要病原菌抑制效果较好,并表现出了较好的生长特性,可为养殖池塘刺参疾病的生态防控和乳酸菌开发提供参考。 相似文献
4.
应用分子系统发育学的方法, 以浙江沿海一海地瓜的18S rDNA和COI片段序列为分子标记,自行设计引物,进行了克隆, 结合来自GenBank 中10种海参的18S rDNA和COI 同源序列, 用邻接法和最大简约法构建系统进化树,并结合形态学特征对它们的分类地位进行了探讨.初步分析结果,基于此海地瓜的各形态学的研究,可以认为它属于海参纲芋参目;鉴于18S rDNA基因的分析,此海地瓜与拟刺参遗传距离为0.017亲缘关系非常近,可以认为它属于海参纲;从COI基因的角度分析,它虽然与怀玉参在系统树上聚成一枝,但支持率很低;仅为49%,遗传距离比较大,为0.223,不足以作为分析的依据. 相似文献
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在水温13．0～23．0℃下,将平均质量1.45g的仿刺参Apostichopus japonicus幼参放养在容量50L（45cm×31cm×30cm）的水槽中,投喂以鱼粉、虾糠和玉米蛋白为蛋白源,添加马尾藻粉、海泥、贝壳粉和黄原胶等粗蛋白12．70％和粗脂肪5．48％的饲料。在饲料中含有不同比例的亚油酸（LA）、α-亚麻酸（LNA）、二十二碳六烯酸（22：6n-3）（DHA）和二十碳五烯酸（20：5n-3）（EPA）,以橄榄油平衡脂肪含量,以贝壳粉平衡其他成分,配制成LA和LNA的比例分别为20：0（S1）;20：1（S2）;1：2（S3）和2：1（S4）;LA、LNA、DHA和EPA的比例分别为6：1：5：0（S5）;10：1：30：5（S6）和10：5：6：1（S7）的膏状饲料。80d的饲养表明,幼参摄食只添加橄榄油（S1）、添加橄榄油和亚油酸（S2）的饲料时生长最慢,显著低于其他各组的幼参（P〈0．05）;摄食只添加亚麻酸（S3）或亚油酸和亚麻酸（S4）的饲料时,生长较慢,二者差异不显著（P〉0．05）,但均显著低于摄食添加DHA（S5）和EPA＋DHA（S6）的幼参（P〈0．05）;摄食添加上述4种脂肪酸（S7）饲料时,生长最快,即LA,LNA,DHA和EPA的比例为10：5：6：1时,体壁最厚,肠道中淀粉酶和蛋白酶的有效活力最高,对饲料脂肪和蛋白质的消化率显著高于其他各组（P〈0．05）。摄食实验饲料的仿刺参体内蛋白＋脂肪十灰分的含量之和（平均85．79％）远大于初始刺参（79．70％）的相应之和,由高至低依次为：S2（90．57％）〉S1（87．97％）〉S3（85．78％）〉S4（85．29％）〉S7（84．19％）〉S5（83．79％）〉S6（82．97％）。仿刺参摄食后体内18碳脂肪酸含量呈负增长,而体内EPA的含量均呈正增长,且恒定变化在4．36％～6．83％之间,表明饲料中的18碳脂肪酸能转化为仿刺参体内的EPA。添加了4种脂肪酸的S4、S5、S6和S7组幼参肠过氧化氢? 相似文献
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以7—10月的新鲜紫贻贝为试验材料优化培养基,从中分离纯化出各种细菌,并采用MIDI微生物自动鉴定系统结合PCR的方法分析贻贝整体及各部位的优势菌相。试验结果表明,选用加5%贻贝汁和2.5%营养琼脂作为培养基较好;新鲜贻贝的优势菌主要由弧菌、芽孢杆菌和腐败希瓦氏菌组成,而弧菌和腐败希瓦氏菌集中在表面,芽孢杆菌在肠腺占82%;对分离的蜡样芽孢杆菌菌株进行16SrDNA序列分析,发现其与GeneBank中的4,5,6,7株蜡样芽孢杆菌的16SrDNA序列相似性均达到99%,因此,应用MIDI微生物自动鉴定系统鉴定贻贝中优势细菌是可行的。 相似文献
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冷藏大黄鱼SSO希瓦氏菌致腐能力差异机制初探 总被引：5，自引：2，他引：3
为探讨特定腐败菌(SSO)希瓦氏菌(Shewanella)致腐能力的差异机制,采用生化和16S rDNA鉴定冷藏大黄鱼货架期终点的产H2S菌,在灭菌鱼汁和无菌鱼块筛选4株致腐差异的希瓦氏菌,扩增氧化三甲胺(TMAO)还原酶基因及分析其表达量,并预测其蛋白质的理化性质。结果显示,22株产H2S菌均为希瓦氏菌属,其中 S.baltica占54.5%,为S. putrefaciens占40.9%,S. hafniensis占4.5%。希瓦氏菌在灭菌鱼汁中致腐能力存在显著差异,其中S. balticaXH2和XH8的缺点评分和TVB-N最高,S. putrefaciensXH14和XH17菌最低。接种无菌鱼块的4株希瓦氏菌中XH2的样品在72h出现腐败气味,48h细菌高于107cfu/g,产生较高的TMA、TVB-N、尸胺和腐胺和,XH8菌次之,XH14和XH17菌最慢。四株希瓦氏菌都扩增出2490bp的torA基因,且torA基因的表达量与致腐能力密切相关,S.balticaXH2最高。预测的TorA蛋白中S.balticaXH2的分子量和不稳定指数最大,理论等电点和总平均疏水性最小。可见,S. baltica XH2为冷藏大黄鱼的SSO,其强致腐能力与torA基因高表达量和TorA蛋白理化性质有关。研究为阐明希瓦氏菌致腐机制奠定了良好的基础。 相似文献
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枯草芽孢杆菌B2的生长及其对仿刺参的益生特性 总被引：1，自引：0，他引：1
从大连湾地区健康的仿刺参养殖池塘沉积物中分离得到一株芽孢杆菌菌株B2,经16SrDNA鉴定以及形态学分析确定其为枯草芽孢杆菌。该菌株生长适宜温度为15~35℃,适宜pH为6~8,适宜盐度为30~50。电镜观察发现,枯草芽孢杆菌B2周围有明显可见的芽孢。枯草芽孢杆菌B2可产淀粉酶和蛋白酶,但不具有产脂肪酶的能力。将枯草芽孢杆菌B2按照仿刺参体质量的0.1%、0.2%和0.3%配成不同密度的菌液,添加至饲料中,投喂7d后发现,该菌株可有效提高仿刺参肠道内的消化酶以及体腔液中多种非特异性免疫酶的活性。结果表明,枯草芽孢杆菌B2可作为益生菌剂的基础菌株添加至仿刺参饲料中。 相似文献
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2011年冬季,福建省宁德市霞浦县海区网箱养殖刺参发生"腐皮综合症",并伴有死亡现象出现。刺参的发病症状表现为:厌食、排脏、身体萎缩、体表局部溃烂乃至大面积溃烂。从患病刺参病灶处分离得到两种优势细菌CS1和CS2。经人工回接感染实验证明两种菌对健康刺参都具有较强的感染性,且感染病参的症状与自然发病刺参的症状相同。通过生理生化试验、16S rDNA序列分析及系统进化树分析,结果表明两株菌分别与灿烂弧菌(Vibrio splendidus)和假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)相似。菌株CS1与灿烂弧菌的亲缘关系最近,相似率达到99%,菌株CS2与假交替单胞菌的亲缘关系最近,相似率达到95%。菌株CS1可鉴定为灿烂弧菌,菌株CS2可鉴定为假交替单胞菌。另外,在患病刺参呼吸树膜和腔体内发现大量后口虫(Boveria sp.)。所以导致本次刺参"腐皮综合症"的原因可能是致病性细菌和寄生虫共同作用的结果。本文首次揭示了该地区"腐皮综合症"导致养成刺参大规模死亡的致病原因,对刺参病害防治和健康养殖具有重要的指导意义。 相似文献
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Qiufen Li Y. Zhang D. Juck N. Fortin Charles W. Greer Qisheng Tang 《Aquaculture International》2010,18(6):977-990
In this study, we investigated the bacterial communities in the shrimp and sea cucumber culture environment, including shrimp ponds (SP), sea cucumber ponds (SCP), mixed-culture ponds (MCP) and the effluent channel (EC) in Qingdao, China. Bacteria cultivation showed that the counts of heterotrophic, nitrate-reducing and sulfate-reducing bacteria in the sediment of SP were higher than that in the sediment of SCP and MCP, varying between 8.7 × 104 and 1.86 × 106, 2.1 × 104 and 1.1 × 105, and 9.3 × 101 and 1.1 × 104 CFU g?1, respectively. In contrast, the counts of ammonium-oxidizing and nitrifying bacteria in the sediment of SP was lower than that in the sediment of SCP and MCP. Denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) of 16S rDNA gene and dendrogram analyses showed that bacterial diversity in the mixed-culture environment was higher than that in the monocultures. The similarity of bacterial community between EC and SCP or MCP was higher than that between EC and SP. These results indicated that sea cucumber culture played a significant role in influencing the environmental bacterial communities that were composed mainly of Flavobacteriaceae (64.3%), Bacteriodetes (21%) and delta proteobacteria (14.7%), including the genera of Croceimarina, Lutibacter, Psychroserpens and so on. The results explained the benefit of sea cucumber culture in shrimp ponds at the level of microbial ecology. 相似文献
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黄颡鱼鲇爱德华氏菌的分离鉴定及其致病性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
从患头顶溃疡症的黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)内脏组织中分离出致病力强的菌株JZ086,对该菌进行了形态学、生理生化特性的测定,并进行了Biolog全自动微生物分析系统及16S rDNA序列鉴定。结果显示:人工感染实验证实该菌为黄颡鱼的病原菌,其半数致死量(LD50)为1.7×105CFU。Biolog全自动微生物分析系统鉴定结果显示该菌为鲇爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)。16S rDNA序列分析显示该菌与鲇爱德华氏菌的亲缘关系最近,同源性高达99%;系统进化树中与鲇爱德华氏菌(AB050826)自然聚为一支,二者遗传距离约为0.002。鉴定结果确认JZ086为鲇爱德华氏菌。药物敏感性试验结果显示,该菌对所测试的15种药物都敏感,其中对氨苄西林、环丙沙星、左氧氟沙星、妥布霉素等尤其敏感。 相似文献
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本研究对辽宁4家刺参育苗场患“化板症”的稚参进行了病原学分析,从患有“化板症”的稚参体表病灶处分离得到一株优势菌Aj2010072802A90.人工回接感染试验证实,该细菌能使稚参发生厌食、萎缩、降低附着力、溃烂、死亡等现象,具有较强的致病性,为此次“化板病”的病原菌.在此基础上,利用细菌形态观察、生理生化及16S rDNA分子生物学方法对该菌株进行了鉴定,结果显示,该菌为副溶血弧菌Vibrio parahaemol yticus.这是副溶血孤菌导致海参感染的首次报道.此外,本研究针对该病原菌进行了药敏学测试,证实所分离的副溶血弧菌菌株对氟苯尼考等药物高度敏感,相关研究结果将为刺参疾病防控和健康养殖提供了理论依据和技术支撑. 相似文献
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在水温9℃～13℃下,将平均体质量0.745±0.3 g的仿刺参（Apostichopus japonicus Selenka）随机投放到50cm×40cm×30cm的塑料水槽内,每箱10头,共分为五组,每组3个平行,采用不同间隔时间投喂每kg添加0.5 mg蛋氨酸硒的饲料：第1、2、3、4组分别间隔0、5、10和15 d投喂一次,第5组投喂不含硒的饲料（对照组）。60d的饲养结果表明：间歇投喂含硒饲料各组仿刺参的成活率和特定生长率差异不显著,但都明显高于对照组;每隔5 d投喂一次含硒饲料的刺参体腔液中SOD活力（78.34U/ml）显著高于其他组（P〈0.05）;谷胱甘肽的浓度（2.87×10-5mol/L）对照组差异不显著,但显著高于其它组（P〈0.05）;连续投喂含硒饲料的仿刺参体内的酸、碱磷酸酶活性（2.42U/ml,5.76U/ml）显著高于其他组（P〈0.05）。建议在生产中宜每日或最多间隔5 d投喂含硒饲料。 相似文献
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采用RACE方法克隆了仿刺参TLR信号通路MyD88非依赖途径接头分子SARM,命名为AjSARM。AjSARM基因的序列全长3874 bp,开放阅读框为2412 bp,编码803个氨基酸。通过SMART软件对AjSARM蛋白进行蛋白结构预测,发现AjSARM蛋白由2个SAM结构域和1个C端TIR结构域组成。采用实时荧光定量PCR的方法检测AjSARM基因在仿刺参发育不同时期的表达量,发现在小耳幼虫期开始高表达,神经发育也是从这一时期开始的,表明AjSARM蛋白在仿刺参的发育过程中发挥了重要作用。仿刺参体腔细胞经过4种病原菌(灿烂弧菌、假交替单胞菌、希瓦氏菌和蜡样芽孢杆菌)刺激后,在灿烂弧菌、假交替单胞菌和希瓦氏菌刺激组,AjSARM基因在4 h和24 h的表达均受到抑制,然而在蜡样芽孢杆菌组,24 h表达上调。除了希瓦氏菌组外,其他3个组的AjSARM基因在96 h表达量达到最高。AjSARM在应对不同病原菌刺激后不同时间点所表现出的动态表达模式表明,它参与了仿刺参体腔细胞免疫应答的过程。通过对AjSARM的结构以及在不同发育阶段和不同病原菌刺激后的表达模式进行分析,探索仿刺参MyD88非依赖途径接头分子SARM的功能,可以为棘皮动物的发育和免疫系统进化研究提供参考。 相似文献
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从合浦珠母贝（Pinctada fucata）粘液中分离纯化得到一株抗菌物质产生菌F9,利用16SrDNA方法鉴定该菌株为棒状乳杆菌（Lactobacillus coryniformis）。通过琼脂扩散法测定了该菌的抑菌谱,发现该菌发酵液上清液在排除有机酸和过氧化氢（H2O2）的影响后仍对金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）等多种食源性致病菌有明显的抑菌作用。对该菌发酵液抑菌物质进行超滤分析及蛋白酶处理,可推断该抗菌物质为分子量在5～10kDa的蛋白类物质。 相似文献
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为了探究刺参(Apoasichopus japonicus)保苗阶段(7–9月)最佳的附着基更换频率(changing frequency,CF),本实验在夏季保苗期设置5个附着基更换频率组,即CF10、CF20、CF_(30)、CF40和CF_(50)。采用实验生态学的方法,并结合传统细菌培养法和16S r DNA细菌鉴定技术对上述不同实验组进行检测。结果表明:CF20组刺参整池增重和个体增重幅度最大,CF_(30)次之,CF_(50)组由于死亡率高,整池重量为负增长。CF20组的特定生长率和存活率分别为(5.986±0.135)%/d和(95.231±0.265)/%,且显著高于其他各组(P0.05),CF_(30)次之,而CF_(50)组的特定生长率和存活率最低,且显著低于其他各组(P0.05)。养殖用水中4NH+-N、2NO--N和COD随着附着基更换频率的降低而升高,并在第50天时分别达到0.53 mg/L、0.28 mg/L、0.18 mg/L。各实验组水体中异养细菌和弧菌数量随附着基更换频率变化不明显,而附着基上的异养细菌和弧菌数量随附着基更换频率的降低而升高,CF_(50)组异养细菌总数在第50天时达到1.38×105 cfu/cm2,弧菌数量达到1.5×104 cfu/cm2,皆明显高于其他各组。附着基上优势菌为溶藻弧菌(Vibrio algindyticus)、需钠弧菌(V.natriegens)、马胃葡萄球菌(Staphylococcus equorum)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)和副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)。其中,溶藻弧菌为刺参条件致病菌,且一直存在于养殖系统中并逐步占据绝对优势。这与CF_(50)组在实验进行到43 d时开始出现化皮,50 d时开始出现死亡现象有一定的关系。同时,附着基长时间未更换,会滋生大量玻璃海鞘、日本毛壶、内刺盘管虫等敌害生物,争夺栖息空间和食物,导致刺参苗种生长减慢。综上,由实验结果显示,在7–9月高温季节每20 d更换一次附着基最佳。考虑到生产成本,附着基更换频率一般为20~30 d为宜。本研究结果为刺参苗种培育工艺的优化及刺参健康养殖提供了理论依据和参考。 相似文献
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2014年10月,利用 PCR-DGGE 技术分析了标准化养殖池塘中仿刺参(Apostichopus japonicus)肠含物及附着基和底泥中细菌的菌群结构及其相关性。结果显示,仿刺参肠含物、附着基、底泥中细菌多样性较高,分别平均获得30.00±1.00、15.33±1.70、21.67±2.62条带,肠含物中细菌种类数显著高于附着基和底泥。聚类分析和戴斯系数表明,不同池塘的仿刺参肠含物样本单独聚为一支,相似性达到0.785,附着基和底泥样品聚为一支,平均相似性达到0.532。不同样品 DGGE 图谱中20条优势条带的切割、克隆、测序,共获得了20条细菌序列,表明肠含物细菌种类以聚球藻属(Synechococcus sp.)、脱硫杆菌属(Desulfobacterium)、脱硫叠球菌属(Desulfosarcina sp.)、极地杆菌属(Polaribacter)、Algibacter sp.为主,附着基中主要以 Robiginitalea sp.和 Silicibacter sp.为主,底泥样品中主要以假单胞菌属(Proteobacterium）、噬胞菌属(Cytophaga）、Desulfosarcina sp.为主,肠含物中细菌特有种类的分离与鉴定为仿刺参养殖潜在益生菌的开发提供基础数据。 相似文献
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在刺参(Apostichopus japonicus)配合饲料中添加不同比例(10％、20％、30％、40％、50％、60％)的甘薯块根粉与甘薯茎蔓粉,测定了添加2种甘薯饲料成分对刺参生长和非特异性免疫力的影响.结果显示,在50 d实验期间,投喂添加甘薯块根粉饲料的实验组刺参平均体重随实验时间呈上升趋势,实验结束时,添加20％甘薯块根粉组终末体重显著高于对照组(P＜0.05),10％、30％组特定生长率(SGR)与对照组差异不显著(P＞0.05);投喂添加10％甘薯茎蔓粉的实验组刺参SGR与对照组差异不显著(P＞0.05),其余各组SGR均低于对照组(P＜0.05).投喂添加10％、20％甘薯块根粉饲料的实验组刺参体腔液中过氧化氢酶(CAT)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)均显著高于对照组(P＜0.05);投喂添加10％甘薯茎蔓粉饲料的实验组ACP显著高于对照组(P＜0.05),刺参体腔液中的溶菌酶(LZM)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、CAT和AKP与对照组差异不显著(P＞0.05).研究表明,当甘薯块根与茎蔓的添加比例分别在30％和20％以下时,可满足刺参的营养需求,促进或保证刺参的生长,提高刺参免疫能力. 相似文献