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地衣芽孢杆菌W10抗菌蛋白的分离纯化及其理化性质研究 总被引：10，自引：3，他引：10
地衣芽孢杆菌W10是一株对多种植物病原菌有拮抗作用的生防细菌,其产生的抗菌物质主要是抗菌蛋白。细菌培养滤液用30%硫酸铵盐析,透析后再经SephadexG-75层析柱纯化得到一种具有抑菌活性的蛋白。该抗菌蛋白的分子量为46049.2Da;等电点为6.71;含有糖基,含糖量为6.83%;含有脯氨酸或羟脯氨酸;不含脂基。这种蛋白在pH6~12范围内均具有抑菌作用,pH6时活性最大;对热稳定,100℃以下水浴20min,抑菌活性与对照相比均在对照的80%以上,121℃蒸汽处理20min,活性虽有所下降,但仍达对照的65.7%;对胰蛋白酶和蛋白酶K不敏感,酶处理后蛋白的抑菌活性分别为对照的98.7%和98.3%;对氯仿和紫外线也不敏感,处理后活性仍达对照的91.0%和98.6%。 相似文献
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内生解淀粉芽孢杆菌LP-5抗菌蛋白的分离纯化及特性 总被引：6，自引：1，他引：5
解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens LP-5是一株对梨黑斑病菌Alternaria alternata具有抑制作用的内生细菌,其产生的抗菌物质主要是抗菌蛋白.为明确该抗菌蛋白的理化性质,采用盐酸沉淀、DEAE-52层析和Sephadex G-100层析进行纯化,测定了所得抗菌蛋白对热、蛋白酶、紫外辐射及酸、碱的稳定性.结果表明:纯化的抗菌蛋白分子量为20.3 kD,等电点为6.33.该蛋白对高温敏感,100℃处理30 min,抑菌活性仅为对照的18.4%;对蛋白酶K和胰蛋白酶稳定,酶处理后的抑菌活性分别为对照的92.5%和88.9%;对紫外辐射稳定,照射12 h后抑菌活性仍达对照的92.5%;对酸稳定、对碱敏感,pH 13处理后抑菌活性下降为原有活性的74.1%.抑菌活性测定结果显示,该蛋白对梨黑斑病菌的孢子萌发和菌丝生长有明显抑制作用,可造成孢子萌发端泡囊化、菌体破裂、原生质外渗. 相似文献
3.
为探究解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens HRH317菌株所产抗菌蛋白物质对禾谷镰孢菌Fusarium graminearum的抑制机理,采用硫酸铵分级沉淀菌株发酵液,DEAE Sepharose Fast Flow柱和Sephadex G-200柱层析分离纯化抗菌蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测抗菌蛋白分子量;并采用平板计数法和扫描电子显微镜观察病原菌孢子萌发和菌丝生长情况。结果表明,硫酸铵饱和度为50%时HRH317菌株发酵液的抑菌活性最大,抑菌圈直径可达2.02 cm,显著大于其它饱和度处理;2次柱层析可纯化出抗菌蛋白,分子量约为36.0 k D。禾谷镰孢菌经该抗菌蛋白处理后12h,病原菌孢子萌发率为55.8%,显著低于对照,且2~12 h间其孢子萌发率平均下降了57.3%;该抗菌蛋白还可造成病原菌菌丝变细、畸形与扭曲,且末端膨大等现象。表明解淀粉芽胞杆菌HRH317菌株产生的抗菌蛋白对禾谷镰孢菌孢子萌发和菌丝发育具有较强的抑制作用。 相似文献
4.
小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealis Vander Hoeven)在以小麦细胞壁为唯一碳氮源的液体培养基中可产生多种蛋白酶,培养液经硫酸铵沉淀,SP-Sepharose Fast Flow离子交换层析,Phenyl(high-sub)-Sepharose Fast Flow疏水层析。Sephadex G-75分子筛层析,分离纯化到分子量约40kD的一种蛋白酶。该酶能水解胰蛋白酶专一性底物Benz-Phe-Val-Arg-NA,对凝乳弹性蛋白酶底物Sue-Ala-Ala-Pro-Phe-NA和枯草杆菌蛋白酶底物CBZ-Gly-Gly-Leu-NA无活性,能被胰蛋白酶抑制剂aprotinin、leupeptin和soybean trypsin inhibitor强烈抑制,丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF能部分抑制酶的活性。表明该蛋白酶是丝氨酸蛋白酶中的一种类胰蛋白酶。 相似文献
5.
生防芽孢杆菌T2胞外蛋白酶的纯化及其抗真菌作用 总被引：5，自引：0，他引：5
从小麦根际土壤中分离到一株高产蛋白酶并对棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f sp.vasinfectum)具有拮抗作用的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)T2。采用硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow、SP Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤层析,从T2发酵液中分离纯化出一种分子量约为29.0kD的蛋白酶。该酶作用的最适温度为65℃,最适pH为8.0,在低于50℃、pH5.0-7.5范围内较稳定。Na+、K+Pb2+、EDTA对酶有激活作用,Ca2+、Ba2+、Al3+、Zn2+、Mn2+、Hg2+、SDS对酶有部分抑制作用,而PMSF可完全抑制酶活,推测该酶是一种丝氨酸蛋白酶。抗菌活性显示,该酶对棉花枯萎病菌的孢子萌发、菌丝生长有明显抑制作用。 相似文献
6.
短小芽孢杆菌BSH-4抗菌物质的提取及其特性 总被引：5，自引：2，他引：3
为明确短小芽孢杆菌BSH-4所产生抗菌物质的理化性质,以黄瓜菌核病菌为指示菌,采用平板打孔法研究了温度、pH变化、紫外照射、有机溶剂、金属离子及蛋白酶等对其稳定性的影响.结果表明,该抗菌物质粗提液具有良好的热稳定性,100℃处理1 h后仍具有对照活性的90%左右;对酸碱较敏感,在pH值6～8时活性较高;对紫外线稳定,在紫外光下照射10 h以上时,其活性基本不受影响;经乙醚和丙酮处理后仍具有对照活性的80%以上;对重金属离子敏感,Ag+、Cu2+、Zn2+能够降低对照活性的40%左右;对蛋白酶较稳定.此外,该抗菌粗提物同时对黄瓜蔓枯病菌、番茄早疫病菌和黄瓜立枯病菌有较高的抑制活性,具有分解羧甲基纤维素的能力,但不具有分解几丁质和β-1,3-葡聚糖的能力,并且其抗菌活性与分解羧甲基纤维素的能力无关. 相似文献
7.
为探究枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis菌株YY1抗菌蛋白的基本特性,采用硫酸铵分级沉淀法对蛋白粗提液进行提取,测定温度、酸碱性、蛋白酶和金属离子对抗菌蛋白稳定性的影响,利用阴离子交换柱层析和葡聚糖凝胶柱层析对其组分进行分离,通过MALDI-TOF质谱对其活性组分进行初步鉴定。结果表明,当硫酸铵饱和度为50%时,菌株YY1产生的粗蛋白对玉米大斑病菌Setosphaeria turcica的抑制效果最好,抑菌圈半径达2.20 cm。该粗蛋白具有较高的热稳定性,90℃处理120 min其抑菌活性未受到明显影响,121℃处理120 min其抑菌活性仍可保持原有活性的85.0%。该粗蛋白具有较好的耐碱性,pH 5～11条件下其抑菌活性稳定,pH 3～4条件下其抑菌活性显著下降。该粗蛋白对蛋白酶K和胰蛋白酶不敏感,两者处理后的抑菌活性分别为对照的97.5%和98.9%;不同浓度金属离子对其抑菌活性的影响存在差异,Cr3+可使该粗蛋白完全失活,Zn2+、Li+、K+、Na+、M... 相似文献
8.
中华根瘤菌L03几丁质酶纯化及其酶学性质研究 总被引：1，自引：0，他引：1
中华根瘤菌Sinorhizobium sp.菌株L03是1株能产生几丁质酶的生防细菌.采用90%饱和度硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子层析、Phenyl-Sepharose疏水层析等方法获得了菌株L03的几丁质酶.SDS-PAGE检测发现该酶已被纯化,其分子量约为41.3kD.该酶反应的最适温度为45℃;最适反应的溶液pH值为6;酶液在pH5～8条件下和40℃下分别保存1h,酶活力基本保持稳定;Mg2+和Ba2+能显著促进几丁质酶活性上升,而Zn2+、Cu2+和Fe3+等对酶活力有明显的抑制作用.功能分析结果显示,该几丁质酶对供试的几种病原真菌细胞壁都有明显的降解作用. 相似文献
9.
冬季灌水对土壤中向日葵菌核的活力及其致病力的影响 总被引：4，自引：3，他引：1
为明确内蒙古巴彦淖尔市河滩地向日葵菌核病发生轻的原因,在内蒙古农业大学教学农场模拟了巴彦淖尔市河滩向日葵地块的种植条件即对土壤中的向日葵菌核进行了冬季大水漫灌处理,并在次年春天对冬灌水处理后土壤中菌核的活力、草酸分泌量、多聚半乳糖醛酸酶（polygalacturonase,PG）的活性以及致病力进行了测定。结果表明,灌水处理后土壤中菌核萌发率为46%,比未灌水处理的对照降低了27%;草酸分泌量为50.94 μg/mg,PG活性为14.82 U/mg,均显著低于对照。冬灌水处理后的菌核萌发后在离体叶片上接种病斑大小仅为0.69 cm,显著低于未经冬季灌水处理的1.29 cm。2012和2013年的向日葵植株活体接种试验结果表明,用冬灌水处理后的菌核接种后发病株率分别为10.67%和18.37%,显著低于未经灌水但混有菌核的处理。表明冬季灌水处理能够降低土壤中菌核来年对向日葵的致病力,从而降低向日葵菌核病的发病程度。 相似文献
10.
枯草芽胞杆菌GB519是从土壤中分离对稻瘟病菌具有显著抑菌活性的菌株。为了明确菌株GB519抗菌粗蛋白的理化性质，分析了光照、紫外线、温度、pH和酶（蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶）对抑菌活性的影响。结果表明，抗菌蛋白对光照、紫外线和3种酶作用稳定；40℃~100℃处理1 h抑菌活性稳定，121℃处理30 min活性仅降低了7.4%，具有较好的耐高温特性；在pH 2.0~10.0活性稳定，但pH 11.0~12.0活性有所下降，分别降低了14.9%和18.1%。抗菌蛋白对多种植物病原菌具有抑菌作用，其中对茄子菌核病菌的抑菌活性为72.7%。在温室条件下对水稻叶瘟的防效达到80.1%。因此，菌株GB519可作为防控稻瘟病生防潜力菌进行开发。 相似文献
11.
螺旋毛壳ND35 β-1,3-葡聚糖酶的诱导、性质及其抑菌作用 总被引：8，自引：0，他引：8
以病原菌Rhizoctonia solani的细胞壁为诱导物,模拟毛壳菌自然的重寄生过程,研究了内生真菌螺旋毛壳(Chaetomium spirale) ND35 β-1,3-葡聚糖酶的产酶条件、性质,尤其是不同碳源的调控作用。结果表明,不同种类的真菌细胞壁及几丁质和昆布多糖,均可诱导产生β-1,3-葡聚糖酶,而作为分解代谢产物的葡萄糖则抑制产酶。经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换层析及Phenyl-Sepharose疏水层析,并通过SDS-PAGE鉴定,纯化了一种分子量约为73 kDa的内切β-1,3-葡聚糖酶GLUC73。其最适反应温度为55℃,在40℃以下较稳定;最适pH值为5.5,在pH 5-9范围内均很稳定;酶活性受Hg2+、Fe3+、Zn2+、Mg2+等金属离子不同程度的抑制,Mn2+和Co2+对酶有激活作用;以昆布多糖为底物时,该酶的米氏常数Km为0.412 mg·mL-1,最大反直速度Vmax为3.876 U·mL-1。粗酶液同时具有β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶活性,离体抑菌试验表明,对苹果炭疽病菌(Glomerella cingulata)、杨树腐烂病菌(Valsa sordida)、苹果树腐烂病菌(Valsa mali)的菌丝生长和孢子萌发有明显的抑制作用。通过对β-1,3-葡聚糖进行免疫细胞化学标记和超微结构观察,间接证明了β-1,3-葡聚糖酶在螺旋毛壳重寄生过程中的作用。 相似文献
12.
Séjalon-Delmas N Mateos FV Bottin A Rickauer M Dargent R Esquerré-Tugayé MT 《Phytopathology》1997,87(9):899-909
ABSTRACT A glycoprotein of 34 kDa (GP 34) was solubilized at acidic pH from the mycelium of Phytophthora parasitica var. nicotianae and was purified by ion exchange and gel permeation chromatography. Whole tobacco plants treated with GP 34 through their roots showed an enhanced lipoxygenase activity as well as hydroxyproline-rich glycoprotein accumulation, indicating that this molecule had elicitor properties. An antiserum raised against the pure glycoprotein allowed localization of GP 34 by immunogold-labeling on the cell surface of the mycelium when the fungus was grown in vitro. In the wall-less zoospores, GP 34 was limited to the flagellum surface. It was then abundantly synthesized at the onset of encystment. During infection of tobacco plants, labeling was very faint at early stages of colonization, particularly in the susceptible host cultivar. It appeared earlier in the resistant host cultivar and was restricted to the living fungus, declining with mycelium cell death. 相似文献
13.
淡紫拟青霉几丁质酶的纯化和活性影响因子 总被引：6，自引：0，他引：6
淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)是一种重要的植物线虫卵寄生真菌。采用DEAE-22离子交换层析和SephcrylS-300凝胶过滤层析分离纯化到一种淡紫拟青霉胞外几丁质酶,经7.5%聚丙烯酰胺凝胶电脉检测为单一条酶带,Rf值等于0.43。淡紫拟青霉几丁质酶的最适温度为45℃。热稳定性测定表明它在40℃下放置10min可保持原有活力,60℃下10min,完全失活。该酶的最适pH值为5。其pH值稳定性与温度和反应时间有关。20℃、20min,在pH3~9范围内稳定;37℃、1h,则只在pH5~7范围内较稳定。金属离子如Mg2+、Ca2+、Zn2+、Li+和Fe2+对酶有一定的激活作用,其中Mg2+的激活作用最强。相反,Cu2+对酶有强烈抑制作用。 相似文献
14.
分别用液—液分配法和柱层析法对珠芽尖距紫堇Corydalis sheareri 全株的氯仿粗提物进行了分离, 以求获得对甘蓝害虫有拒食活性的物质。液—液分配法中, 苯提取物的拒食活性最高, 在50 倍稀释浓度下, 小菜蛾Plutellaxy lostella 和菜粉蝶Pierisrapae 幼虫对其拒食率分别为97.7% 和97.3%。苯提取物还显示了很高的拒产卵活性。通过硅胶柱层析获得了相对较纯的提取物, 其中活性最高的成分在200 倍的稀释浓度下对菜粉蝶的拒食率为93.0%。根据现有资料对上述分离物的化学本质进行了探讨。 相似文献