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1.
滩羊成纤维细胞系的建立及其生物学特性研究 总被引：2，自引：1，他引：1
试验以滩羊耳缘组织为材料,采用组织块贴壁培养法和细胞冷冻保存技术构建了35个滩羊成纤维细胞系,并对其进行了形态学、生长动力学、细胞活力测定、核型分析、微生物检测和荧光蛋白报告质粒(PEGFP-N3)基因转染等生物学特性的研究。结果表明,细胞群体倍增时间(PDT)约为36h,细胞冻存后活力为95.8%,细胞染色体中二倍体(2n=54)占主体,镜检细胞的百分比约为97.5%。细菌、真菌、病毒和支原体检测结果为阴性,该细胞库的各项指标均达到ATCC细胞系鉴定标准。 相似文献
2.
采集岷县黑裘皮羊肾组织,用胰蛋白酶热消化法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法进行继代培养和细胞纯化,并对复苏细胞的形态、活力、生长曲线、荧光蛋白质粒转染表达、核型以及乳酸脱氢酶同工酶等生物学特性进行了分析。结果显示:原代和传代细胞生长形态均好,群体倍增时间为28.3 h;染色体2 n=54,二倍体占主体(84%)乳酸脱氢酶同工酶电泳图谱有明显特征,未见LDH4、LDH5谱带,与其它羊有明显区别;外源性荧光蛋白转染质粒在该细胞中能进行复制和表达;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性。表明该研究已成功建立岷县黑裘皮羊肾组织成纤维细胞系,为在细胞水平上保存岷县黑裘皮羊种质资源以及进行相关研究提供了理想的生物材料。 相似文献
3.
本研究旨在建立转双基因（pGH/IGF-Ⅰ）猪胎儿成纤维细胞系,保存转双基因猪的成纤维细胞以便于后续细胞水平研究。试验采用胰蛋白酶消化法对猪胎儿躯干组织进行原代培养,通过原代培养、细胞传代、冷冻保存等成功分离出转双基因猪胎儿成纤维细胞,并对细胞进行了形态学观察、冻存前和复苏后细胞活力检测、生长动力学分析、波形蛋白免疫组化及微生物污染检测等生物学特性分析。结果显示,原代细胞经过胰蛋白酶消化和差速离心分离培养出成纤维细胞,冻存前细胞活力为94.3%,冻存3个月后细胞复苏后活力为91.2%;细胞生长总趋势呈“S”型,经历了潜伏期、指数生长期和平台期3个阶段;细胞波形蛋白在成纤维细胞中呈阳性反应;细胞的细菌、真菌、病毒和支原体检测均为阴性。结果表明本试验成功建立了转双基因猪成纤维细胞系。 相似文献
4.
以郏县红牛耳缘组织为试验材料,采用组织块贴壁法培养,成功建立郏县红牛成纤维细胞系,对其进行细胞形态、细胞活力、生长曲线、染色体核型分析及微生物检测等生物学特性研究。结果显示:细胞形态为典型的成纤维细胞,生长曲线呈S型,细胞倍增时间为39h,冻存前和细胞复苏后活力为98%以上;细胞染色体2n=60,细胞株1-P9、1-P14及2-P9二倍型比例为89.86%、73.82%、78.02%;细菌、真菌、病毒及支原体检查均为阴性。结果表明该细胞系的建立实现了郏县红牛遗传资源在细胞水平上的成功保存。 相似文献
5.
《中国兽医杂志》2017,(6)
本试验采用组织块贴壁法对初生仔猪的耳组织进行原代培养,成功分离出转pGH基因猪与非转基因猪成纤维细胞,并对细胞进行形态学观察,冻存前和复苏后细胞活力检测,生长动力学分析,波形蛋白免疫组化,染色体计数以及微生物污染检测等生物学特性分析。结果表明,原代细胞经过胰蛋白酶消化和差速离心分离培养出成纤维细胞,7组细胞冻存前细胞活力均在为92%以上,冻存3个月后细胞复苏活力仍在89%以上;细胞生长总趋势呈"S"型,即经历了潜伏期、指数生长期和平台期3个阶段;细胞波形蛋白免疫组化在成纤维细胞中呈阳性反应;染色体计数结果表明,染色体数量稳定;成纤维细胞的细菌、真菌、病毒和支原体检测均为阴性。本试验成功建立了转pGH基因猪与非转基因猪成纤维细胞系。 相似文献
6.
以中华鳖心组织为材料,用含10％胎牛血清的TC199培养基,于25℃条件下,经14个月传代培养60余次,获得一个能稳定生长、以成纤维样细胞为主的细胞系,称之为TSH（Trionyx sinesis heart)细胞系。分别对其原代和传代细胞的染色体数目、不同温度下细胞的生长线及原代和传代细胞的显微形态进行了测定和比较。结果表明,细胞在25℃条件下生长速度最快;原代细胞约有64％的染色体为2n=66,而传代细胞为四倍体的有62％。初步估计的细胞周期为2－3d。传代细胞冻存后,复苏状态良好,能继续增殖传代。 相似文献
7.
7日龄小鼠生精上皮单细胞冷冻保存 总被引：15，自引：3，他引：12
在DMEM中添加10％小牛血清（NBS），并分别添加不同浓度的抗冻剂二甲基亚砚（DMSO）、丙二醇（PG）、乙二醇（EG）及甘油（G），对7日龄小鼠生精上皮单细胞进行冷冻保存，复苏后台齿蓝染色测定细胞复苏率。结果：当冻存液中DMSO分别为5％、10％、15％、20％时，细胞复苏率分别为77．1％、88．2％、86．5％、73．5％、65．5％，其中10％和15％DMSO组细胞复苏率最高，与其作各组间均差异极显著（P＜0．01）。当冻存液中PG分别为5％、10％、15％、20％、25％时，细胞复苏率分别为66．2％、84．3％、72．1％、69．9％、47．5％，其中10％PG组细胞复苏率最高，与其余各组间均差异极显著（P＜0．01）。当冻存液中EG分别为5％、10％、15％、20％时，细胞复苏率分别为64．9％、81．6％、60．9％、44．7％，其中10％EG组细胞复苏率最高，与其余各组间均差异极显著（P＜0．01）。当冻存液中G分别为5％、10％、20％、25％时，细胞腹苏率均低于10％。10％DMSO组细胞复苏率与10％PG组和10％EG组之间均差异显著（P＜0．05）或极显著（P＜0．01）。结果表明，10％DMSO、10％PG及10％EG均适宜冷冻保存小鼠精原细胞，以及10％DMSO的冻存效果最好，而则不适宜冷冻保存。在含10％DMSO的冻存液中，二步慢速冷冻，液氮储存，37C水浴复苏小鼠精原细胞，是一种具有较高细胞复苏率的冷冻保存方法。 相似文献
8.
牛皮肤成纤维细胞的体外培养与冻存 总被引：10，自引：0，他引：10
利用牛皮肤组织块直接培养法，得到牛皮肤细胞的原代培养物，再用酶消化法和反复贴壁法处理，能够纯化成纤维细胞。成纤维细胞的冻存是通过选用6种分别含有二甲基亚砜（DMSO）、甘油（GL）及乙二醇（EG）的保护液，以相同的冻前处理方法，对牛皮肤成纤维细胞进行缓慢冷冻，冰箱预冷平衡1－2h，逐步投入液氮（－196℃）中保存，再经37℃水浴解冻，Hanks液脱保护剂，以贴壁率评价冻存效果。结果表明，20％DMSO保护液对牛皮肤成纤维细胞表现出较好且稳定的冷冻保护效果，其平均贴壁率达87．9％。 相似文献
9.
《黑龙江畜牧兽医》2017,(19)
为了研究敖汉细毛羊毛囊细胞的培养方法,建立敖汉细毛羊毛囊细胞系,保存毛囊细胞便于后续细胞水平毛囊相关基因的深入研究,试验采用胰蛋白酶消化法对初生40日龄以内的敖汉细毛羊皮肤组织进行原代培养,通过原代培养、细胞传代、冷冻保存、复苏等方式成功分离并纯化出敖汉细毛羊毛囊细胞,然后对细胞进行了形态学观察,冻存、复苏活力检测,生长动力学分析,核型分析和微生物污染检测等分析。结果表明:原代毛囊细胞经胰蛋白酶消化及差速离心分离培养出毛囊细胞,冻存前细胞活力为94.19%,冻存1个月复苏后细胞活力为91.96%。细胞生长呈S型,经历潜伏期、指数生长期和平台期三个阶段。细胞的细菌、真菌、病毒和支原体检测均为阴性。试验成功分离了敖汉细毛羊毛囊细胞并建立了敖汉细毛羊毛囊细胞系。 相似文献
10.
贵德黑裘皮羊是青藏高原藏羊群体中的一种特殊的地方品种资源，以生产黑紫羔皮而闻名。同其他藏羊一样，贵德黑裘皮羊胎产仔数多为单羔，极少见两羔及多羔。为提高其繁殖性能，本研究对其群体繁殖性能相关基因位点进行了研究。实验选取BMPR1B、GDF9、BMP15、ESR1、GnRHR、FSHR、LHR和PRLR等基因中的22个高繁殖力相关基因位点，采用多重单碱基延伸SNP分型技术（SNaPshot）对348只贵德黑裘皮羊群体中以上8个基因的22个SNP位点的多态性进行了检测分析。检测结果发现在该群体中存在以下突变位点：BMPR1B的FecB(g.746A>G)、GDF9的G1(g.260 G>A)、ESR1外显子1的c.106A>T、FSHR外显子10的c.904T>G、LHR外显子11的c.1020C>A和c.1425T>A、PRLR外显子10位点的g.304A>G和g.585C>G，以及BMP15外显子1的c.28-30del缺失，共8个SNP和1个缺失突变，且每个位点的最小等位基因频率分别为0.003、0.014、0.342、0.103、0.2... 相似文献
11.
The Mongolian sheep ear marginal tissue fibroblast cell line (MSF32) from 32 samples was successfully established by using primary explants technique and cell cryoconservation technology. MSF32 cells were adherent, with a population doubling time of 28.2 h. Chromosome analysis showed that >90.2% of cells were diploid (2n = 54) prior to cell passage 4. Isoenzyme analyses of lactate dehydrogenase and malate dehydrogenase showed that the MSF22 cells had no cross‐contamination with other species. Tests for cell line contamination with bacteria, fungi, viruses and mycoplasmas were also negative. Plasmids encoding the fluorescent proteins pEGFP‐N3, pEGFP‐C1, pECFP‐N1, pECFP‐mito, pDsRed1‐N1 and pEYFP‐N1 were transfected into cells to study exogenous gene expression in the cells. The plasmid transfection efficiency was between 12.3% and 63.3%. Every index of the MSF32 cell line meets all the standard quality controls of American Type Culture Collection (ATCC). Not only has the genetic resources of the Mongolian sheep been preserved at the cell level, but also valuable materials had been provided for genome, postgenome and somacloning research. 相似文献
12.
Cell line was an important carrier for the isolation and culture of animal viruses.In the research, modern commercial piglet kidney was taken as the raw material in order to cultivate a new cell line for isolating and culturing animal viruses. By trypsin digestion and differential velocity adherent combination method,porcine kidney epithelial cells were separated and purified,and then continuously subcultured in vitro. The results showed that a new cell strain named SDPK-D had been serially passaged for 90 generations.The doubling time of SDPK-D cell strain F33 and F83 were 40.9 and 32.7 h,respectively;While the cell viability were 97.55% and 98.86%,the cell adherent rate at the 8 h were 91.67% and 97.06%,respectively. Obvious cytopathic effect appeared after inoculating with PRV,SIV and PEDV positive samples. For the first time, a new cell strain from modern pig named SDPK-D was successfully cultivated,which was sensitive for several animal viruses.It could provid a new selection for the isolation and culture of virus. 相似文献
13.
细胞系是动物病毒分离培养的重要载体。本研究以现代商品化仔猪肾脏为原始材料,拟培育新的细胞系用于动物病毒的分离和培养。利用胰酶消化法和差速贴壁相结合方法,分离纯化仔猪肾上皮细胞,并在体外进行传代培养和筛选。结果显示,试验成功得到一株可以连续传代的细胞株,命名为SDPK-D,且已在体外连续传代90代。SDPK-D细胞株F33和F83代倍增时间分别为40.9和32.7 h,细胞活率分别为97.55%和98.86%,8 h细胞贴壁率分别为91.67%和97.06%。在该细胞株接种猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪流感病毒（SIV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）阳性病料均出现明显的细胞病变。本研究首次针对现代商品猪培育出一株可以在体外连续传代的细胞株,并对多种动物病毒敏感,为相关动物病毒的分离培养提供了新的细胞系选择。 相似文献
14.
This study was aimed to establish a fetal fibroblast cell line of double transgenic (pGH/IGF-Ⅰ) pigs,and reserve fibroblast cells of double transgenic pigs for the follow-up study.A method of trypsin digestion was adopted to isolate and culture body tissues from pregnant porcine,and porcine fetal fibroblasts were isolated successfully through primary culture,subculturing and cryopreservation.The morphological observation,determination of viability before cryopreservation and after recovery,dynamic growth analysis,vimentin immunohistochemistry and microbial contamination detection were all done to study the biological characteristics of the cell line.The results showed that the fibroblasts were cultured and isolated successfully by trypsin digestion and differential centrifugation.The cell viability before cryopreservation and after recovery were 94.3% and 91.2%,respectively.The growth curve was sigmoidal,and experienced the incubation period,exponential growth period and platform three stages.The vimentin immunohistochemistry was positive,the microbial contamination detection were all negative.The results indicated that a fibroblast cell line of double transgenic porcine was successfully established. 相似文献
15.
16.
Rebecca Cohen REGAN Robert Michael GOGAL Jr James Perry BARBER Richard Cary TUCKFIELD Elizabeth Wynne HOWERTH Jessica Ann LAWRENCE 《The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science》2014,76(12):1563-1568
Loperamide is a peripheral
opiate agonist that can cause apoptosis and G2/M arrest in human cancer cell lines and may
sensitize cells to chemotherapy. The objectives of this study were to investigate the
effects of loperamide on viability, apoptosis and cell cycle kinetics in canine cancer
cells and to establish whether the drug sensitizes cells to doxorubicin. Cell viability
was assessed using Alamar Blue. Cell death and cell cycle were studied using flow
cytometry with 7-Aminoactinomycin-D (7-AAD) and propidium iodide (PI), respectively.
Loperamide decreased cell viability in a dose-dependent fashion and was most effective
against canine osteosarcoma cells. In all cell lines, it induced a dose and time dependent
apoptosis and resulted in accumulation in G0/G1. When co-incubated with doxorubicin,
loperamide induced a synergistic cell kill in canine carcinoma cells. Investigation is
warranted into the role of loperamide in the treatment of canine cancer. 相似文献
17.
试验旨在分析岷县黑裘皮羊群体内遗传多样性,筛选出理想的遗传标记,为岷县黑裘皮羊的选育保种提供理论依据。选取144只岷县黑裘皮羊,颈静脉采血并提取DNA,对24对微卫星引物进行PCR扩增,用毛细管电泳技术进行基因分型,计算其等位基因数、等位基因大小及频率、有效等位基因数、杂合度和多态信息含量。结果显示,24个位点共检测到210个等位基因,平均等位基因数为8.75;群体等位基因频率为0.0104~0.7396,等位基因片段大小为97~285 bp;有效等位基因数为1.7581~8.2433个;群体平均观测杂合度为0.4839;平均期望杂合度为0.6959;平均多态信息含量为0.6527。其中MAF70位点等位基因数、有效等位基因数、期望杂合度和多态信息含量最高;OarFCB128位点观测杂合度最高;OarAE129位点等位基因数最少,SRCRSP9位点期望杂合度、多态信息含量最低;OarFCB304位点观测杂合度最低。Hardy-Weinberg平衡分析结果表明,所选位点中有19个处于非平衡状态。结果表明,岷县黑裘皮羊的遗传背景复杂,群体内遗传多样性丰富,可为其遗传资源的评估和选育保种工作提供理论依据。 相似文献