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环介导等温基因扩增技术及其应用研究进展 总被引：4，自引：0，他引：4
本文简单综述了环介导等温基因扩增方法(LAMP法)的基本原理,操作方法及其研究进展。LAMP法是一种简便、快速、高效、特异性很强的基因扩增方法,尤其适合于人类和动物疫病的检测。 相似文献
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环介导等温扩增技术在动物病原检测中的应用 总被引：1，自引：0，他引：1
环介导等温扩增技术（LAMP）是一种依赖于自动循环的链置换技术,在等温条件下,不到1h就能扩增出10^9-10^10靶序列拷贝。该技术快速准确、操作简单、特异性强、灵敏度高,已经被用于动物病原微生物的快速检测。本文就LAMP法的反应原理、技术特点及其在动物病原快速检测中的应用作一综述。 相似文献
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环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplifi cation,LAMP）技术是一门新兴的分子生物学检测技术,因其具有特异性强、敏感性高、简单、快捷及不需要昂贵的仪器设备等特点,受到了生物医学研究者的高度关注。目前,该方法已经被广泛应用于各种病原微生物检测。本文综述了近年来LAMP在动物疫病检测中的具体应用实例和目前的研究进展,并对LAMP方法在动物疫病诊断中的应用前景做了展望。 相似文献
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环介导等温扩增技术及其在重大动物疫病诊断中的应用 总被引：1，自引：1，他引：0
环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新型恒温扩增技术。LAMP技术不需要特殊的精密仪器设备,结果观察和判定直观,且具有成本低廉、操作简单、反应时间短、特异性强、灵敏度高等优点。因此特别适合现场快速检测及基层普及应用,具有很高的实用推广价值。作者就LAMP技术的原理、反应过程、操作过程及其在禽流感、口蹄疫、高致病性蓝耳病和猪瘟等重大动物疫病诊断中的应用等作一综述。 相似文献
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等温扩增技术是一种可以在恒定温度下进行体外核酸扩增的技术,近几年其研究热度很高。本文从技术原理、优缺点及在动物病原检测应用等方面,对环介导等温扩增技术（LAMP）、重组酶等温扩增技术、依赖核酸序列扩增技术（NASBA）、交叉引物等温扩增技术（CPA）和赖解旋酶等温扩增技术（HDA）等5种常见等温扩增技术进行了综述。LAMP技术操作简单,不依赖特殊设备,但引物设计较为复杂,研发多重LAMP检测方法有很大困难。重组酶等温扩增技术不受场地条件约束,扩增时间短,但容易造成气溶胶污染,因此一般用于实验研究。NASBA技术扩增效率高,不易产生污染,但成本偏高,操作相对复杂,在目前疫病检测研究中的应用逐渐减少。CPA技术操作相对简单,灵敏度高,特异性好,但结果判断受主观因素影响易造成假阳性或假阴性。HDA技术引物设计相对简单,但反应体系较为复杂,因此不适合扩增长序列。不同的等温扩增技术需要根据实际需求和场景条件来选择。等温扩增技术作为一种新兴技术具备许多优点,但仍需要不断改进,未来与微流体芯片、纳米金、CRISPR等技术联合应用,将会实现更加快捷、准确、简便的检测,从而为动物疫病检测提供更好的服务。 相似文献
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《中国畜牧兽医文摘》2016,(1)
环介导等温扩增技术(Loop-mediated Isothermal Amplification,简称LAMP)是一种体外等温扩增核酸片段的新技术,利用4条特异性引物,在Bst DNA聚合酶的催化下能够有效地扩增出靶基因。与常规PCR法相比该法具有特异性强、灵敏度高、快速准确以及操作简便等优点,现已广泛应用于动物疾病检测中。此文综述了LAMP技术原理及其在鸡传染性疾病病原检测中的应用,旨在为该技术的深入研究和应用提供参考。 相似文献
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核酸检测技术是目前动物疫病诊断和食品安全监测的重要手段。多重核酸检测技术可同时检测多种病原,具有通量高、损耗低的优势,在疫病诊断和食品安全监测等领域的应用越来越广泛。目前已研发出多种多重核酸检测技术,包括聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)多病原核酸检测技术、环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)多病原核酸检测技术、生物芯片多病原核酸检测技术、高通量测序多病原核酸检测技术等。由于检测原理不同,不同方法之间的检测性能存在较大差异。本文通过概述基于PCR/RT-PCR、LAMP/RT-LAMP、生物芯片、高通量测序建立的多重核酸检测技术,全面分析其在动物疫病诊断和食品安全监测领域中的特点和具体应用策略,以期推进病原检测技术的创新和发展,为动物疫病诊断及食品安全监测提供技术支持。 相似文献
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《贵州畜牧兽医》2015,(4)
环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新型体外等温扩增特异核酸片段的技术,该技术具有高效、快速、特异、低廉、操作简单和结果可视化判定等优点,在基层现场检测中得到广泛应用。传统的LAMP技术已成功应用于病原微生物的快速检测、食品卫生检测、肿瘤检测、原位扩增和胚胎性别鉴定等方面。随着LAMP技术在样本处理、引物设计、特异性产物可视化检测方面日臻完善,改良后的LAMP技术将向多个方向发展,逐步应用于病原微生物活性检测、遗传病和传染病早期诊断等方面。文章就近年来改良LAMP技术原理、特点及在病原检测中的应用进行综述。 相似文献
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环介导等温扩增技术在病原检测中的应用 总被引：1，自引：0，他引：1
文章介绍了环介导等温扩增技术的的基本原理、特点及其在传染性疾病中检测和诊断的应用。环介导等温扩增技术具有特异性强、等温灵敏、操作简单、产物易检测等优点。环介导等温扩增技术已经被用来快速诊断动物的传染病。目前可检测圆环病毒2型、鹅细小病毒、伪狂犬病病毒、高致病性禽流感病毒、新城疫病毒、副猪嗜血杆菌、单核细胞增生性李斯特氏菌、猪肺炎支原体及弓形虫基因等。 相似文献
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本研究利用3种方法对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)进行检测,并对这3种检测方法的灵敏度和特异性作出比较。根据新城疫病毒的融合蛋白基因(F基因)设计合成6条特异性引物,利用水浴LAMP法、PCR及LAMP实时浊度仪进行检测。通过对恒温水浴中的反应温度、反应时间及反应液中Mg2＋浓度进行优化获得最佳反应条件,结果用凝胶电泳分析;用优化的温度进行LAMP实时浊度仪检测,同时都与PCR方法进行比较。结果显示,获得了最佳反应条件,水浴LAMP方法最低检测限是1.58 pg,比PCR高100倍,而LAMP实时浊度仪检测灵敏度比水浴LAMP方法高10倍,最低检测限是0.158 pg。3种方法对其他非新城疫病毒均无检出。结果表明,新城疫病毒水浴LAMP检测方法速度快、不需要高精密的仪器,而且具有灵敏度高、特异性强、操作简单等特点,有望在核酸扩增领域取代PCR技术,LAMP浊度仪法检测灵敏度更高,但是所需仪器和试剂比较昂贵。 相似文献
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根据Q热贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)插入序列IS1111序列设计1套特异性引物,建立快速检测Q热的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)实时浊度检测方法。以梯度稀释含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,在恒温反应条件下,对靶基因的特定区域进行扩增,建立LAMP检测方法。结果显示,该方法能够检测出10个拷贝数的阳性质粒,而对结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、衣原体(C.psittaci)、布鲁氏杆菌(Brucella.spp)及部分牛血液的核酸样本的特异性检测结果均为阴性,无交叉反应。本研究建立的LAMP实时浊度检测方法灵敏度高、特异性好,在Q热的检测与鉴定中具有良好的应用前景。 相似文献
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As a new molecular biology technique,the loop-mediated isothermal amplification (LAMP) has the advantages of easy to operate,no need of specialized devices,low cost,short reaction time and so on.It has higher sensitivity and specificity than the common molecular biology techniques.It has been widely used in rapid and early infection by variety of pathogens including bacteria,virus and mycoplasmas.We reviewed the research progress on LAMP techniques and the diagnostic applications in the bacteria,viruses,Mycoplasma and other pathogens at home and abroad,so as to understand the advantages and disadvantages of LAMP and application situation,and provide a reference for its widespread application in the future. 相似文献
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环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一门新兴的分子生物学技术,该技术具有操作简单、不需要大型仪器设备、成本低廉、反应时间短、结果判定简单等优点,且具有比常规分子生物学方法更高的灵敏度和特异性.目前该技术在细菌、病毒及支原体等病原微生物的快速检测和早期诊断中已广泛应用.通过对国内外LAMP研究进展及该技术在细菌、病毒、支原体等致病菌中的诊断应用进行综述,以期介绍该技术的优缺点和应用现状,从而为今后的广泛应用提供参考依据. 相似文献
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Ai L Li C Elsheikha HM Hong SJ Chen JX Chen SH Li X Cai XQ Chen MX Zhu XQ 《Veterinary parasitology》2010,174(3-4):228-233
The present study developed and validated a species-specific loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay for the rapid detection and discrimination of Fasciola hepatica and Fasciola gigantica. The LAMP assay is inexpensive, easy to perform and shows rapid reaction, wherein the amplification can be obtained in 45 min under isothermal conditions of 61 °C or 62 °C by employing a set of four species-specific primer mixtures and results can be checked through naked-eye visualization. The optimal assay conditions with no cross-reaction with other closely related trematodes (Clonorchis sinensis, Opisthorchis viverrini, Orientobilharzia turkestanicum and Schistosoma japonicum) as well as within the two Fasciola species were established. The assay was validated by examining F. gigantica DNA in the intermediate host snails and in faecal samples. The results indicated that the LAMP assay is approximately 10(4) times more sensitive than the conventional specific PCR assays. These findings indicate that this Fasciola species-specific LAMP assay may have a potential clinical application for detection and differentiation of Fasciola species, especially in endemic countries. 相似文献
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试验旨在建立简易、快速、高效的鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)检测和诊断方法。根据GenBank上公布的ILTV TK基因序列,设计检测ILTV的特异性环介导的等温扩增(loop media-ted isothermal amplification,LAMP)技术反应引物,通过对LAMP反应体系和反应条件的优化,以及特异性、敏感性和临床样品的检测,建立了ILTV LAMP检测方法。结果显示,以内引物ILT9-FIP和ILT9-BIP、外引物ILT9-F3和ILT9-B3、环引物ILT9-LB和ILT9-LF为LAMP反应引物,反应温度为66℃时,所建立的LAMP检测方法反应效率最高;所建立的LAMP检测方法能够特异性地检测ILTV(匈牙利株和王岗株),不与新城疫病毒(NDV,B株)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV,H52株和H120株)、大肠杆菌、鸡副嗜血杆菌、巴氏杆菌等发生交叉反应,且能够检测到的病毒最低浓度达到0.06pg/μL,其灵敏度是普通PCR方法的100倍;采用建立LAMP方法对50个临床样本进行检测,阳性率为14%,且与PCR检测结果的符合率达96%。本研究建立了特异性强、灵敏度高、操作简单的LAMP检测方法,适用于临床上ILTV的快速检测和诊断。 相似文献