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1.
《畜牧兽医学报》2017,(3)
旨在研究公山羊β防御素124(Goat beta-defensin 124,gDB 124)的表达谱及其蛋白在繁殖器官中的分布特点。采集1周龄、2~6月龄公羊各3只(体重相近)睾丸和附睾,以及18月龄公山羊睾丸、附睾头、附睾体、附睾尾、心、肝、脾、肺、肾和背最长肌组织。用qRT-PCR分析gDB124mRNA的表达情况;采用免疫荧光技术分析睾丸、附睾头、附睾体和附睾尾gDB 124分布特点。结果显示:除背最长肌中无表达外,gDB124mRNA在18月龄公山羊睾丸、附睾头、附睾体、附睾尾、心、肝、脾、肺和肾组织均有表达,且附睾头表达量极显著高于其他组织(P0.01);睾丸gDB124mRNA表达量6月龄时显著高于其他月龄;附睾头、附睾体和附睾尾gDB124mRNA表达量随月龄的增加呈上升趋势;1周龄公山羊睾丸和附睾gDB124mRNA表达量不存在显著差异,3、4、5、6、18月龄时附睾头gDB124mRNA表达量显著高于睾丸、附睾体和附睾尾(P0.05);免疫荧光定位技术分析显示:gDB 124在公山羊睾丸和附睾中均有分布,但主要是在附睾头上皮细胞中。根据荧光信号强度gDB 124的表达量顺序:附睾头附睾体附睾尾睾丸,该结果与qRT-PCR分析结果相一致。公山羊gDB124mRNA表达具有明显组织特异性和时间依赖性。 相似文献
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GPxs家族基因在山羊不同组织和睾丸不同发育时期的表达特性研究 总被引：5，自引：1，他引：4
为了研究谷胱甘肽过氧化酶家族(GPxs)在山羊不同组织表达的特异性及在睾丸不同发育时期的表达特性.采用SYBR Green荧光定量PCR的方法对太行青山羊公羊各组织和不同发育时期睾丸GPxs mRNA的表达进行了定量分析.结果表明:GPxl、GPx3、GPx4和GPx7在各组织广泛表达,其表达量由高到低的顺序:GPx1是肝脏＞肺脏＞心脏＞睾丸、脾脏＞肾脏＞背最长肌,肝脏GPxl mRNA表达量是肌肉组织的6.7倍;GPx3是肾脏＞心脏＞肝脏、睾丸＞脾脏、肺脏、背最长肌,肾脏GPx3 mRNA表达量分别是肝脏和肺脏表达量的12和24倍;GPx4是睾丸＞心脏＞肾脏、肝脏、肺脏＞脾脏、背最长肌,睾丸GPx4 mRNA表达量分别是肝脏和肌肉的21和137倍;GPx7是肝脏＞脾脏、肺脏、背最长肌＞心脏＞肾脏、睾丸.GPx5和GPx6仅在睾丸和附睾中表达,且GPx5在附睾头中的表达是睾丸的114倍;睾丸中GPx3表达量随日龄增加而降低,GPxl和GPx4表达量随日龄增加而增加,GPx5在90 d开始表达且直接到达高峰平台,GPx6和GPx7在60 d开始表达,90 d到高峰平台,而后其表达量降低.山羊GPxs mRNA表达具有明显的组织特异性,山羊睾丸中GPxs mRNA表达具有时间依赖性. 相似文献
3.
4.
研究孕酮(P4)对绵羊输卵管上皮细胞β-防御素2(SBD2)基因表达的影响,探讨P4调节SBD2表达的潜在机制。建立绵羊输卵管上皮细胞体外培养体系,用不同浓度(10^-6、10^-7、10^-8、10^-9、10^-10mol/L)P4分别处理绵羊输卵管上皮细胞0、2、6、12、24、48h,筛选P4诱导绵羊输卵管上皮细胞SBD2mRNA表达的最佳条件。然后使用10-6mol/L孕激素核受体拮抗剂RU486,50μmol/L蛋白激酶C(PKC)信号通路阻断剂H7预处理细胞1h,再使用P4诱导SBD2mRNA表达的最佳条件处理细胞,同时设只添加阻断剂(RU486和H7)处理组、只添加孕酮(P4)处理组和空白对照组,通过RT-qPCR技术检测SBD2mRNA的表达变化。10-9mol/LP4诱导绵羊输卵管上皮细胞6h和24h时SBD2mRNA表达显著高于对照组(P<0.01),且与P4组相比,添加RU486和H7后显著抑制了P4诱导的SBD2mRNA的表达水平(P<0.01)。P4以浓度和时间依赖性方式显著增加SBD2mRNA表达,并且诱导可能通过孕酮核受体(PR)介导的基因组途径以及PKC信号通路来提高绵羊输卵管上皮的先天免疫防御能力。 相似文献
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6.
乳酸脱氢酶-C4基因mRNA在绵羊睾丸和附睾中的表达研究 总被引：1，自引：1，他引：1
实验检测3乳酸脱氢酶-C4基因mRNA在绵羊睾丸和附睾中的表达情况。提取绵羊睾丸组织、附睾头、体、尾部组织总RNA,以此为模板,逆转录合成cDNA,自行设计引物,PCR扩增出347bp的目的DNA。然后,将目的片段克隆入T载体,通过菌液PCR和重组质粒酶切,鉴定重组质粒中的目的DNA。再经序列分析鉴定目的片段。同时,以β-actin为内参照物,进行RT-PCR半定量分析,比较在睾丸、附睾头、体、尾部组织中的表达量。结果表明:乳酸脱氢酶-C4在绵羊睾丸中表达量最多,尾部中表达不明显。 相似文献
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实验检测3乳酸脱氢酶-C4基因mRNA在绵羊睾丸和附睾中的表达情况。提取绵羊睾丸组织、附睾头、体、尾部组织总RNA，以此为模板，逆转录合成cDNA，自行设计引物，PCR扩增出347bp的目的DNA。然后，将目的片段克隆入T载体，通过菌液PCR和重组质粒酶切，鉴定重组质粒中的目的DNA。再经序列分析鉴定目的片段。同时，以β-actin为内参照物，进行RT—PCR半定量分析，比较在睾丸、附睾头、体、尾部组织中的表达量。结果表明：乳酸脱氢酶-C4在绵羊睾丸中表达量最多，尾部中表达不明显。 相似文献
8.
为了探讨氟对体外培养的绵羊成骨细胞中核因子кB受体活化因子配体(RANKL)mRNA基因表达的影响,进行了绵羊成骨细胞体外培养,分别加入含浓度为0、10-6、10-5、10-4、5×10-4mol/L氟化钠(NaF)的培养液,并于第6天提取细胞总mRNA,用半定量RT-PCR方法分析RANKL mRNA表达水平的改变.结果表明,10-6、10-5、10-4、5×10-4 mol/L NaF均能刺激体外培养成骨细胞RANKL mRNA表达,当氟化钠浓度为10-5及5×10-4 mol/L时,可以明显促进RANKL mRNA表达(与对照组相比P＜0.01).这说明氟呈剂量依赖性地刺激成骨细胞RANKLmRNA的表达. 相似文献
9.
本试验旨在采用体外法研究p H与脂多糖(LPS)或组胺(HIS)的交互作用对奶山羊瘤胃上皮细胞紧密连接蛋白mRNA表达量的影响。选用8只体况良好,体重、泌乳量相近的萨能奶山羊作为瘤胃上皮供体。采用3×3双因素试验设计,山羊屠宰后采集瘤胃上皮,插入到尤斯灌流仪器(Ussing chamber)半室中央,在浆膜侧半室加入5 m L缓冲液,黏膜侧加入配制好的不同处理的培养液5 m L,每个处理3个重复。试验1:因素1为p H,分别为7.4、5.5、5.2;因素2为LPS浓度,分别为0、30、60 k EU/m L。试验2:因素1为p H,分别为7.4、5.5、5.2;因素2为HIS浓度,分别为0、0.5、10.0 ng/m L。采集培养80 min后的瘤胃上皮,测定其紧密连接蛋白Claudin-1、Claudin-4、Claudin-7、Occludin、zonula occludens-1(ZO-1)mRNA表达量。结果显示:1)p H与LPS的交互作用对Claudin-1、Claudin-7、ZO-1 mRNA表达量影响显著(P0.05)。与p H 7.4×0 k EU/m L LPS组相比,降低p H或添加LPS均显著降低了Claudin-1、Claudin-7 mRNA表达量(P0.05),ZO-1 mRNA表达量有整体降低的趋势,在p H 5.2×60 k EU/m L LPS组最高。2)p H与HIS的交互作用对Claudin-1、Claudin-7、ZO-1 mRNA表达量影响显著(P0.05)。p H 5.5×0.5 ng/m L HIS组Claudin-1 mRNA表达量最低,但与p H 5.2×0.5 ng/m L HIS组差异不显著(P0.05)。p H 7.4×10.0 ng/m L HIS组Claudin-7 mRNA表达量显著低于p H 7.4×0 ng/m L HIS组(P0.05),但与p H 5.5×10.0 ng/m L HIS组差异不显著(P0.05)。与p H 7.4×0 ng/m L HIS组相比,降低p H或添加LPS有提高ZO-1 mRNA表达量的趋势,且p H 5.2×10.0 ng/m L HIS组显著提高(P0.05)。结果提示,亚急性瘤胃酸中毒(SARA)发生后,p H与LPS或HIS交互作用于瘤胃上皮,降低瘤胃上皮紧密连接蛋白mRNA表达量,进而增大瘤胃上皮黏膜通透性。 相似文献
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酿酒葡萄皮渣对单栏饲养方式下公绵羊繁殖性能及睾丸抗氧化性的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
《畜牧兽医学报》2016,(11)
旨在研究日粮中添加一定量的酿酒葡萄皮渣对绵羊繁殖性能及睾丸抗氧化性能的影响。试验选取30只5月龄,体重(25±1)kg的杜泊×小尾寒羊杂交公羊,采用完全随机设计平均分为5组。1组自由活动,其余4组单栏饲养,建立应激模型。自由活动绵羊饲喂未添加葡萄皮渣日粮,单栏饲养绵羊分别饲喂不同葡萄皮渣添加水平(0%、5%、10%、20%)日粮。试验期80d。试验结束后,屠宰取样,测定睾丸系数并作附睾精子分析,测定睾丸组织抗氧化水平,对睾丸组织中Cu-ZnSOD、CAT、GPx4及Nrf2mRNA和蛋白相对表达量进行研究。结果表明,与自由活动组相比,单栏组绵羊睾丸组织中MDA及ROS水平升高(P0.01),睾丸重量显著降低(P0.05),睾丸系数也表现出下降趋势(P=0.06),附睾精子密度及顶体完整率显著降低(P0.05),精子活动率极显著降低(P0.01),精子畸形率极显著升高(P0.01),表明单栏饲养方式对绵羊造成氧化应激,并在一定程度上影响绵羊繁殖性能。适量添加酿酒葡萄皮渣后,绵羊附睾精子密度和精子活动率均显著升高(P0.05),精子畸形率显著降低(P0.05),睾丸组织MDA含量显著下降(P0.01),SOD、CAT及GSH-Px活性均显著提高(P0.01,P0.05,P0.01);睾丸组织中Cu-ZnSOD mRNA相对表达量显著提高(P0.05),Cu-ZnSOD、CAT、GPx4蛋白相对表达量显著提高(P0.05)。综上表明,酿酒葡萄皮渣可以提高单栏饲养方式下绵羊睾丸组织抗氧化性,进而改善绵羊繁殖性能。 相似文献
11.
为建立可同时检测猪捷申病毒（PTV）与猪圆环病毒2型（PCV2）的双重PCR方法,本研究根据GenBank登录的相关病毒基因序列,选择保守区域设计引物,经过反应条件的优化,建立了可同时检测以上2种病毒的PCR诊断方法,扩增片段长度分别为187bp（PTV）、120bp（PCV2）。通过实验证明该方法具有良好的特异性和较高的敏感性,对PTV、PCV2核酸检测最低浓度分别为2．8×10^-2ng和6．6×10^-3ng。应用该方法对43份临床样品进行检测发现,PTV阳性率为23％,PCV2阳性率为38％,PTV与PCV2共感染率为16％。该方法的成功建立,为快速高效地检测以上2种病毒提供有力手段。 相似文献
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The objectives of this study were to evaluate the expression of G-protein coupled receptor 54 (GPR54) in various tissues and the cellular localization of testis of 4 to 6-month-old sheep.In this experiment,mRNA expression was detected by Real-time fluorescence quantitative PCR.Cellular localization of GPR54 in testis was examined by immunohistochemistry.The results showed that GPR54 mRNA was expressed in all the tissues,and abundantly expressed in hypothalamus,pituitary gland and testis.The expression level gradually increased with the individual growth and development,the mRNA and protein expression of GPR54 in testis of 6-month-old was significantly higher than 4-month-old and 5-month-old (P<0.05);It was detected that GPR54 expression only in spermatogonia and a very number of primary spermatocytes in the testis by immunohistochemical staining,and it could detect significantly that the GPR54 expression in many split early sperm cells.The results demonstrated that it had close relationship between GPR54 and sexually mature of animals and the process of spermatogenesis in male animals. 相似文献
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试验旨在研究GPR54(G-protein coupled receptor 54)基因在绵羊不同组织中的表达及其在4~6月龄公羔睾丸组织中的表达特性及定位。本研究采用实时荧光定量PCR法检测各组织GPR54 mRNA表达规律,以及其在不同月龄公羔睾丸中的表达量,运用免疫组化技术对睾丸中GPR54基因进行定位分析。结果显示,GPR54在不同组织中均有不同程度的表达,其中在下丘脑、垂体和睾丸中大量表达;GPR54在4~6月龄绵羊公羔睾丸组织中呈阶段性表达,6月龄表达量显著高于4和5月龄(P<0.05);4月龄时,在精原细胞和极少数的初级精母细胞中检测到较弱的阳性信号;6月龄性成熟时,在睾丸中分裂早期的精子细胞检测到强阳性信号。综上表明,GPR54基因在绵羊不同组织中广泛表达,在下丘脑-垂体-睾丸生殖轴中发挥重要的作用,并与动物的性成熟及雄性动物精子发生过程有密切的关系。 相似文献
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本研究旨在探讨PROP1和PRLR基因在绵羊不同组织中的表达差异及其发育变化规律。利用荧光实时定量PCR技术分析了PROP1和PRLR基因在中国美利奴成年母羊13种组织中的表达谱信息,并检测了垂体组织中PROP1基因和垂体、卵巢、睾丸和皮肤组织中PRLR基因在0、7、14、30、60和90日龄时表达水平的发育变化。结果表明:PROP1基因仅在绵羊垂体组织中表达;而PRLR基因在绵羊各种组织中广泛表达,且在子宫和下丘脑组织中的表达量高于其它组织(P<0.01)。垂体组织中的PROP1基因表达量较低,在7日龄高于30(P<0.01)、14和60日龄(P<0.05)。垂体组织中PRLR基因表达量在30日龄时最高,之后急剧下降,各日龄间无差异(P>0.05);在卵巢组织中从7日龄起呈先下降后上升的趋势,90日龄高于0(P<0.01)、14和30日龄(P<0.05);在睾丸组织中总体呈上升趋势;在皮肤组织中呈现为生长前期高于后期的趋势(P<0.01)。绵羊PROP1和PRLR基因表达存在明显的组织表达差异和发育变化差异;PROP1和PRLR基因的表达可能对绵羊繁殖等性状的发育有一定的调节作用。 相似文献
15.
In this study,ASB17 gene cDNA full length in Shaziling pig was cloned by RACE and it was analyzed by bioinformatics,the ASB17 gene expression levels were detected in Shaziling pig D30 period of nine different tissues（testis,muscle,intestine,lung,heart,kidney,liver,spleen,fat）and eight different developmental stages（E90,D1,D30,D60,D90,D120,D150,D180）of testicular tissue by Real-time quantitative PCR.The results showed that the length of ASB17 gene cDNA was 1 135 bp,and the ORF region was 888 bp,which encoded 295 amino acids.Real-time quantitative PCR results showed that the D30 period's expression level of ASB17 gene mRNA was the highest in testis,followed by fat and spleen,while the expression of ASB17 gene mRNA in muscle and small intestine tissue were the lowest,there were significant difference in testis and muscle,small intestine,lung（P<0.05);In the testis,the expression of ASB17 gene mRNA was the highest in D120 and D150 periods,while slightly declined in D180,the differences were extremely significant beween E90,D1,D30,D60 and D90,D120,D150,D180（P<0.01);The differences were not significant beween D90 and D180（P>0.05),while there were extremely significant with other periods（P<0.01);The sexual maturity periods of D120,D150,D180 had no significant differences（P>0.05).The full length of ASB17 cDNA was cloned and the expression levels of ASB17 gene in different tissues and different developmental stages were detected in this study,which laid the foundation for further research on the function of ASB17 gene. 相似文献
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本研究利用RACE法克隆沙子岭猪ASB17基因cDNA全长并进行生物信息学分析,应用实时荧光定量PCR对ASB17基因在沙子岭猪D30时期9个不同组织（睾丸、肌肉、小肠、肺脏、心脏、肾脏、肝脏、脾脏、脂肪）及睾丸组织8个不同发育阶段（E90、D1、D30、D60、D90、D120、D150、D180）进行差异表达分析。结果显示,ASB17基因克隆所得片段长1 135 bp,其中ORF区为888 bp,编码295个氨基酸。实时荧光定量PCR结果显示沙子岭猪D30时期ASB17 mRNA在睾丸中表达量最高,其次为脂肪及脾脏,而在肌肉及小肠中表达量最低,其中睾丸与肌肉、小肠及肺脏中表达量差异显著（P<0.05）;睾丸组织不同发育时期中,ASB17 mRNA在D120、D150时期表达量达到最高,在D180时期表达量略有下降,其中E90、D1、D30、D60与D90、D120、D150、D180时期差异极显著（P<0.01）;D90与D180时期差异不显著（P>0.05）,与其余时期均差异极显著（P<0.01）;沙子岭猪性成熟期D120、D150、D180 3个时期表达量差异不显著（P>0.05）。本试验成功克隆了沙子岭猪ASB17基因cDNA全长并检测了其在猪不同组织及睾丸组织不同发育阶段表达量,为进一步研究ASB17基因功能奠定基础。 相似文献
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为明确PYY对巨噬细胞炎性细胞因子分泌的调节作用,本试验分离培养健康小鼠腹腔巨噬细胞,不同浓度PYY预处理后,以LPS刺激。ELISA方法检测细胞培养上清中TNF-α、IL-6含量,半定量PCR方法检测细胞中TNF-α、IL-6mRNA表达变化。结果显示：高浓度的PYY1-36（10-9-10-7 mol/L）和PYY3-36（10-8-10-7 mol/L）对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α分泌具有显著抑制作用（P〈0.05）;PYY1-36对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞IL-6分泌无明显作用（P〉0.05）;不同浓度PYY3-36（10-11-10-7 mol/L）对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞IL-6分泌均具有显著抑制作用（P〈0.05）。表明PYY对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎性细胞因子TNF-α及IL-6的分泌具有一定的抑制作用,提示PYY可能通过抑制炎性细胞因子的分泌而抑制炎症性疾病的发生发展。 相似文献
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解偶联蛋白2（UCP2）是一种具有解偶联功能的蛋白质,普遍认为其与脂肪酸代谢、调节ATP生成有关。利用实时荧光定量PCR技术,对不同月龄（6、8、10月龄）小尾寒羊4种内脏（心脏、脾脏、肾脏、瘤胃）组织中UCP2基因的表达量进行了分析。结果表明,UCP2基因在6～10月龄小尾寒羊相同内脏中的表达量差异不显著（P＞0.05）,但在脾脏中的表达量显著（P〈0.05）高于心脏、肾脏和瘤胃,而后三者之间表达量差异不显著（P＞0.05）。试验证明了UCP2基因在小尾寒羊内脏组织中有广泛表达,为UCP2基因可能与免疫相关的观点提供了证据,并且说明在6～10月龄的月龄段内,UCP2基因在小尾寒羊内脏组织中的表达受月龄的影响较小。 相似文献
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[目的] 以稀有鮈鲫雄鱼为研究对象,探讨17α-甲基睾酮（17α-methyltestosterone,MT）对稀有鮈鲫精巢甲基转移酶（DNMT）基因相对表达量的影响。[方法] 采用不同浓度MT（25、50和100 ng/L）处理稀有鮈鲫雄鱼7、14和21 d,处理结束时,每组随机解剖10条鱼,取精巢组织,Trizol一步法提取总RNA,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测DNA甲基转移酶基因（dnmts）相对表达量。[结果] MT处理稀有鮈鲫雄鱼7 d,25 ng/L MT处理组（P<0.05）、50 ng/L MT处理组（P<0.01）和100 ng/L MT处理组（P<0.05）精巢dnmt3基因相对表达量显著（或极显著）降低;25 ng/L MT处理组和50 ng/L MT处理组精巢dnmt5基因相对表达量显著（P<0.05）降低;50 ng/L MT处理组精巢dnmt7基因相对表达量显著（P<0.05）降低。MT处理稀有鮈鲫雄鱼14 d,100 ng/L的MT处理组dnmt3、dnmt5、dnmt6、dnmt7基因相对表达量显著（P<0.05）升高;50 ng/L的MT处理组dnmt1基因相对表达量极显著（P<0.01）升高。MT处理稀有鮈鲫雄鱼21 d,50 ng/L MT处理组和100 ng/L MT处理组dnmt1基因相对表达量显著（P<0.05）升高;100 ng/L MT处理组dnmt8基因相对表达量极显著（P<0.01）升高。[结论] MT可以干扰稀有鮈鲫精巢DNA甲基转移酶基因dmmts的mRNA表达。MT对DNMTs酶活性的影响以及是否可以通过改变DNA甲基化水平对稀有鮈鲫精子的发生产生影响有待研究。 相似文献